příprava analytického vzorku Preanalytická fáze — —Proces laboratorní diagnostiky —Tři fáze: preanalytická — analytická — postanalytická —Preanalytická – mimolaboratorní — laboratorní —Mimolaboratorní – příprava pacienta, odběr, identifikace, transport — — Transport biologického materiálu — —Donáška —Potrubní pošta —Transportní vozidlo - chlazení Olomouc_2008 001 Olomouc_2008 004 přenosný mrazící box transportní vozidlo s chladícím agregátem a monitorováním teploty Preanalytická fáze laboratorní —Příjem a identifikace biologického materiálu – povinné údaje, kontrola — —Vložení identifikačních údajů pacienta do LIS –manuálně, pomocí načítacího zařízení nebo automaticky při načtení čárového kódu — —Příprava analytického vzorku – centrifugace (rozložení, bezpečnost) — —Označení analytického vzorku čárovým kódem — —Vytvoření sekundárních analytických vzorků – aliquotů (aliquoting) a jejich označení štítky s čárovým kódem (labeling) — —Roztřídění analytických vzorků pro jednotlivá cílová pracoviště laboratoře (sorting) Laboratorní informační systém (LIS) —Laboratoře – data – jejich shromáždění a zpracování —Tvorba laboratorního nálezu —Předání nálezu lékaři – tisk – elektronicky —Historie – sběr a uložení dat —PC – síť —Čárový kód – jedinečná číselná identifikace —Oboustranná komunikace — — LIS —Definice metod —Vklady —Nálezy —Kontrola nálezů —Interní kontrola kvality —Ekonomika —Statistika — centrifugace Centrifugace (odstředění) — —Postup, který využívá odstředivé síly pro dělení látek různé hustoty, zrychluje proces sedimentace částic — —Používá se k : üDělení směsi nemísitelných kapalin üOdstranění sraženin üIzolace nebo odstranění buněk a subcelulárních částic ü izolace, koncentrace buněk (cytologický preparát z likvoru cytospin) üZahuštění bílkovin (moč, likvor) Způsoby centrifugace —Diferenciální - běžná, založena na rozdílné sedimentační rychlosti částic, určité částice jedné velikosti zcela sedimentují, k odstranění buněk, sraženiny, buněčný homogenát na částice — Probíhá v homogenním mediu s nižší hustotou než jakou sedimentují částice — —Izopyknická – rozdělení částic na základě rovnovážné centrifugace, princip rozdílu hustoty částic nezávisle na jejich ostatních vlastnostech, používá se prostředí o měnící se hustotě (hustotní gradient). — k přípravě hustotního gradientu se používají roztoky sacharozy,polymerů, solné roztoky (CsCl), jsou dva typy hustotních gradientů: o diskontinuální (několik různě hustých vrstev, dělené částice se soustředí na hranici mezi dvěma vrstvami) o kontinuální (změna hustoty plynulá v celém rozsahu zkumavky) —Použití k dělení makromolekul (bílkoviny, nukleární kyseliny) Význam: Ø odstranění sraženin (krevní koláč, deproteinace….) Ø odstranění buněk (získání plazmy z nesrážlivé krve) Ø izolace; koncentrace buněk (cytologický preparát z likvoru – cytospin) Ø zahuštění bílkovin (moč, likvor) Ø dělení směsi nemísitelných kapalin Ø Centrifugační síla —Vliv gravitace nahrazen použitím centrifugy —Zkumavky se pohybují v tzv. rotoru po kruhové dráze —Působí na ně odstředivá síla, je tím větší, čím větší rychlostí a po delší dráze se zkumavky pohybují (síla závisí na poloměru rotoru a jeho rychlosti otáčení ) — — F = m . r . w2 — — m – hmotnost částic — r – poloměr, tj. vzdálenost dna centrifugační zkumavky od osy otáčení (uvedeno v dokumentaci rotoru) — w - úhlová rychlost (w = 2 p f, kde f je frekvence otáček). —Součin r . w2 [m.s2] odpovídá centrifugačnímu zrychlení — —O rychlosti sedimentace vedle centrifugační síly rozhoduje rozdíl mezi hustotou centrifugované částice a rozpouštědla (přímo úměrně) a faktor tření (nepřímo úměrně) — — Relativní centrifugační síla (R); anglický termín Relative Centrifugal Force (RCF) vyjadřuje poměr mezi centrifugačním zrychlením a zrychlením tíhovým udává kolikrát je vyvolané centrifugační zrychlení vyšší než tíhové zrychlení Udává se v násobcích g R = r . w2 / g 10 000 x g≈ 100 000 m.s-2 Relativní centrifugační síla R se snadno vypočítá pro kteroukoli centrifugu a daný počet otáček R = 4,02 . f 2 . r (je-li frekvence otáček uváděna v jednotkách [s-1] a vzdálenost r v [m]) R = 1,12 . f 2 . r . 10-5 je-li frekvence otáček uváděna v jednotkách [min-1] a vzdálenost r v [cm] Lze určit rovněž z nomogramu r (poloměr rotoru) [mm] otáčky [f / min.] Relat.centrif. síla (RCF) [g] Typy centrifug —Dle dosahovaného odstředivého zrychlení: —Nízkoobrátkové - zrychlení 5.104 ms-2(5000 x g) —Středněobrátkové - zrychlení 2.105 ms-2(20000x g) —Vysokoobrátkové - zrychlení 107 ms-2 — ultracentrifugace virů, rotory těchto centrifug pracují ve vakuu, čimž se omezuje odpor vzduchu a tím vyvolaný vznik tepla třením) — —Dle konstrukce rotoru : —Rotory výkyvné - menší zrychlení, rozdělení — horizontální (odstředivá síla — kolmo ke dnu) —Rotory úhlové - větší počet otáček, kratší doba — dělení — Instr Instr Instr GCMS_SKH_AAK_Labsklo_centrifugy 091 Centrifugace —Krevní elementy (erytrocyty, leukocyty, trombocyty, v případě séra krevní sraženina) - vyšší specifická hustota -účinkem odstředivé síly do dolní části odběrové nádobky — —V horní části sérum případně plazma — —Separační gel - specifická hustota mezi krevními — elementy a sérem nebo plazmou — - po centrifugaci mezi nimi – oddělení — - zabrání průniku látek z krevních elementů — (např. draslíku) do séra nebo plasmy — - odstraňuje nutnost sérum nebo plazmu po — centrifugaci přenést do jiné zkumavky preanal_video_2 002 Cytofuga — — — Příprava mikroskopického preparátu — k cytomorfologickému vyšetření mozkomíšního moku - cytospin Instr Speciální centrifugační nádobky — —1) Zahuštění močí, likvorů — Stanovení specifických proteinů — — —2)Analýza ze slin — Zpracování hustých biologických materiálů Instr_tech_lab Instr_tech_lab Instr_tech_lab Automatizovaná a robotizovaná perianalytická laboratorní fáze – jednotlivé kroky : — —Identifikace biologického materiálu —Centrifugace —Odzátkování —Označení aliquotů čarovým kódem - labeling —Rozpipetování – aliquoting —Zazátkování —Roztřídění - sorting —Archivace —Skladování Typy laboratorní perianalytické automatizace —Celková —Perianalytická zařízení spojená transportní dráhou přímo s analyzátory ( „On-line“) — a) kruhové uspořádání — b) moduly uspořádané stavebnicově za — sebou — —Diskrétní —Samostatně stojící pracovní stanice —Roznášení vzorků k analýze do samostatně stojících přístrojů DSC1 Power Processor (Beckman Coulter) spojený s analyzátory (St. Dominic-Jackson Memorial Hospital, Jackson, Mississippi) Základní části: —Vstup – místo pro vkládání zkumavek —Dopravníkový systém - transport zkumavek mezi jednotlivými funkčními jednotkami —Laserová čtečka k identifikaci vzorku načtením čárového kódu —(Robotizovaná centrifuga) —Odzátkovací zařízení —Zásobník zkumavek pro aliquoty —Tisk a nalepení štítků s čárovým kódem —Pipetor pro vytvoření aliquotů —Zařízení pro roztřídění primárních zkumavek a aliquotů pro cílové analyzátory —Chlazený sklad pro uložení vzorků – automaticky posílá vzorky pro analýzu doordinovaných testů, po uplynutí skladovací doby vyhodí vzorky Složení perianalytického systému —Vstupní modul —Robotizovaná centrifuga —Odzátkovací zařízení —Alikvotační modul —Modul generující a lepící čárové kódy —Zátkovací modul —Třídící modul —Skladovací zařízení Olomouc_2008 009 Chlazený sklad p 501/p701 (k MPA), Roche Chlazený sklad p 501/p701 (k MPA), Roche —Ukládá 400 zkumavek/hod. —Automaticky zátkuje a odzátkovává —Likviduje vzorky po uplynutí expirace —Kapacita 13500 zkumavek modul p501 —Kapacita 27000 zkumavek modul p701 — — — — Preanalytický systém cobas p 312 - „Kolibřík“, Roche —Malý, výkonný preanalytický systém (1mx1m) —Velmi vhodný pro menší laboratoře, pro provozy s nedostatkem místa —Zpracování 100 až 2000 vzorků za den —Provede odzátkování, třídění a archivaci vzorků z různých oborů — (klinická chemie, imunologie, — hematologie, koagulace a močová — analýza) 42 ANd9GcR6eDXGIi1OmOX7JvGGlFCk7IrYMdsR24yuUp9ib_PA7qt7_giL Power Link, Beckman 43 AU680 Power Link UniCel DxI 600 or 800 Včetně odzátkování Power Express, Beckman (ještě není na trhu) —Složeno z AU5800 a UniCel DxI 800 immunoanalyzátor —RFID technologie —Konsolidace chemie, klinický — informační systém a hematologie —Možnost integrace s chlazeným skladem (skladování a likvidace vzorků) — 44 Thermo TCAutomation (Siemens) —Řešení pro střední a velké laboratoře, 500 zkumavek/ hodinu Výhody preanalytických systémů: • •Zkrácení TAT •Úspora personálu •Odstranění možnosti potenciální záměny materiálu •Omezení styku s biologickým materiálem •Zachycení sraženiny v séru •Zájem personálu o novou přístrojovou techniku •Representativní laboratoř