C:\My Documents\bits\Facbanna.png
Imunofluorescence
       Přímá
slouží k průkazu antigenů (Ag)
Nepřímá
slouží k průkazu protilátek (Ab)
Ab+ fluorescenční barvička (hotová)
  Ag (hotový)
sérum (Ag)
   sérum (IgG)
                 protilátka proti Ab+ barvička

C:\My Documents\bits\Facbanna.png
Imunofluorescence
C:\Documents and Settings\muprac\Dokumenty\Černohorská\LF MUas\FTA_ABS.jpg
Úkol 1 a 2

C:\My Documents\bits\Facbanna.png
ELISA I. (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
®Slouží k průkazu antigenů i protilátek
C:\Documents and Settings\muprac\Dokumenty\Černohorská\lenka_jpg_soubory\elisap.jpg

C:\My Documents\bits\Facbanna.png
ELISA k průkazu antigenů
Sérum bez Ag
Sérum s Ag
Ab značená enzymem
   Substrát
+
  -
Ab vázaná v důlku
      změna barvy

C:\My Documents\bits\Facbanna.png
ELISA II. – průkaz protilátek
®Prokazujeme třídy protilátek – IgM, IgA, IgG
®!!! IgM a IgA jsou znakem akutní infekce
®IgG obecně = prodělané infekce, ale !!
®existují nízkoavidní IgG – vazba těchto protilátek v reakci není pevná, lze ji rozrušit ureou
(výskyt v časnější fázi infekce)

C:\My Documents\bits\Facbanna.png
ELISA k průkazu protilátek - obecně
Ag na dně
Ab proti protilátce značená enzymem
Substrát
+
  -
Sérum bez Ab
Sérum s Ab

C:\My Documents\bits\Facbanna.png
ELISA k průkazu tříd protilátek – vazná (capture)
Ag (hotový)
Ab proti protilátce značená enzymem
Substrát
+
  -
Sérum bez Ab/jinou Ab než hledanou
Sérum s Ab (IgM/IgG)
Ab proti IgM//IgG vychytává všechny IgM/IgG ve vzorku

C:\My Documents\bits\Facbanna.png
Westernblot (k průkazu Ab)
Ag
Dark horizontal
Rozštěpení DDS
5%
  ELFO
gelová
Přesátí
Rozstříhání
Dark horizontal
Dark horizontal
Dark horizontal
      Proužky
  Příprava Ag

C:\My Documents\bits\Facbanna.png
Westernblot
Hotový proužek s Ag
(BmpA, OspC, p39 aj.)
 + sérum s  protilátkami (Ab)
Vazba Ab na Ag
Alespoň 2 proužky shodné se šablonou = výskyt protilátek
Výjimka:pl proti OspC u IgM      stačí
             pl proti vlsE u IgG        1proužek
        vzorek
    šablona
OspC

C:\My Documents\bits\Facbanna.png
Šablona k úkolu č. 5
C:\Documents and Settings\muprac\Dokumenty\Černohorská\lenka_jpg_soubory\wb.jpg
OspC je vysoce specifické
jsou-li IgM proti OspC přítomny = akutní infekce, netřeba hledat IgM proti jiným antigenům