Kultivace hematopoetických buňek
L. Bourková, OKH FN Brno


Stem_cells_diagram
Multipotent /


vývoj-strom2



vvývoj buněk v BM
Progenitory
Prekurzory

Hematopoetické kmenové buňky
nv kostní dřeni i periferní krvi ve velmi nízké koncentraci
npro svoji podobnost s lymfocyty se nedají morfologicky rozpoznat.
nmorfologicky jsou rozpoznatelné až jejich další vývojová stádia - myeloblast, proerytroblast,
megakaryoblast…..
nkmenové buňky se stanovují např. imunologicky pomocí povrchových antigenů a nebo  funkčními testy,
na základě proliferační aktivity
–sebeobnova: schopnost buňky dát buněčným dělením vznik dvěma dceřiným elementům, které jsou
identické s buňkou mateřskou
–diferenciace: schopnost buňky vyvíjet se dále ve  funkčně i morfologicky odlišná vyzrálejší
vývojová stádia

Základní pojmy
nTotipotentní kmenové buňky: jsou schopné vytvořit jakýkoliv typ buňky, který se v organismu
vyskytuje. Každá totipotentní buňka obsahuje kompletní gentickou informaci pro celý organismus a má
jedinečnou schopnost diferenciace.
nPluripotentní kmenové buňky: jsou schopny diferenciace (dělení) do mnoha různých typů. Speciálním
případem pluripotence je multipotence, kde je pluripotentní schopnost kmenové buňky omezena na
určitý typ tkáně (případně na určitý orgán).
nMultipotentní kmenové buňky: jsou schopny diferenciace (dělení) do mnoha typů buněk, ale pouze v
rámci jednoho typu tkáně (resp. orgánu). Např. hematopoetická kmenová buňka, která se dále vyvíjí
přes progenitorové a prekurzorové buňky k vyzrálým stádiím.
–progenitorové b.: CFU-GEMM (colony-forming unit-granulocyte, -erythrocyte, -monocyte, and
–megakaryocyte), CFU-GM (colony-forming units-granulocyte/macrophage), BFU-E (burst-forming units
erythrocyte)
–prekurzorové b.: myeloblast, proerytroblast, megakaryoblast…..

Metoda tkáňových kultivací
nPrincip metodiky:
Kultivační metoda sleduje funkční schopnosti krvetvorných buněk, které odpovídají na růstové
faktory v kultivační půdě tvorbou kolonií.
nKultivační prostředí:
Kultivační média představují sterilní vybalancované chemické prostředí, z něhož buňky čerpají
složky pro svůj metabolismus. Kultivační atmosféra má 100% vlhkost a 5% obsah CO2 v inkubátoru.
nSchéma metodiky:
mononukleární buňky + médium + atmosféra (14 dnů) è kolonie
nHodnocení:
mikroskopem
kolonie vznikají z progenitorových buněk
kolonie CFU-GM obsahují minimálně 40 buněk
kolonie BFU-E obvykle více jak 200 erytroblastů
nVyužití:
diagnostika (hematologické malignity), monitorování léčby, k terapii…

Pracovní prostředí
IMG_1865 IMG_1866


kultivace1 kultivace2
Tkáňové kultivace
kultivace3

hemopoiesis-kultivace



BFU-E kolonie kolonie1 kolonie-obrázky2 kolonie-obrázky4
BFU-E kolonie


kolonie2 kolonie2 kolonie2



kolonie-obrázky3 kolonie-obrázky5 kolonie2
CFU-GM kolonie


CFUGM CS-CFU-GM
CFU-GM kolonie