Anémie Bourková L., OKH FN Brno Sledování vyšetření •Sledovat: •hloubku anémie v KO •morfologické změny erytrocytů v periferní krvi (barevné, tvarové, inkluze) •morfologické a množstevní změny erytrocytární populace v KD • Vyšetření retikulocytů •Barvení RNA v erytrocytech: •mikroskopicky –supravitální barvení (bez fixace preparátu) •analyzátorem –analýza prošlého a odraženého světla –analýza fluorescence Mikroskopické vyšetření retikulocytů •V retikulocytech se barví supravitálně brillantcresylovou modří zbytky RNA. •Pozitivita se hodnotí v 1000 erytrocytech –normální hodnoty: 0,5 – 2,5 % reticulocyte reticulocytes reticulocytes1 Retikulocyty Vyšetření retikulocytů na analyzátoru •analýza prošlého a odraženého světla probíhá na precipitovaných síťových strukturách RNA v retikulocytech, pracipitáty jsou obarveny methylenovou nebo brillantcresilovou modří •fluorescenční analýza vlákna RNA jsou obarvena fluorescenčními barvami, množství RNA je úměrné intenzitě fluorescence •Normální hodnoty: 0,5 – 2,5 % 25 – 75 x 109/L Cytochemické vyšetření zásobního Fe - I •Zásobní (nehemové) železo ve formě Fe3+ §v erytrocytech §NRBC §makrofázích •Princip: Fe3+ tvoří s ferrokyanidem draselným a kyselinou chlorovodíkovou barevný komplex – berlínskou modř. Cytochemické vyšetření zásobního Fe - II •Hodnocení: zelenomodrá granula §v erytrocytech (siderocyty) §v NRBC (sideroblasty) §zrnka v NRBC okolo 2/3 jádra (prstenčité sideroblasty) §v makrofázích (siderofágy), normální hodnoty: •Normální hodnoty: 20 – 60 % pozitivních NRBC 4 siderofágy •Klinický význam: anémie §např.: sideropenické (nízké hodnoty) §sideroblastické (přítomné prstenčité sideroblasty, zvýšené zásobní Fe) §hemolytické anémie (vysoké hodnoty) §refrakterní anémie (vysoké hodnoty) Barvení Fe 3+ Fe-makrofágy Fe-ring Fe-zásobní Fe-nrbc1 Barvení Fe 3+ Fe-nrbc2 Fe-nrbc3 Fe-nrbc4 Fe-nrbc5 Fe-nrbc6 Fe-nrbc7 Porucha syntézy hemu •Sideropenická anémie •(nedostatek železa) •KO: pokles HGB, MCV, vyšší RDW, vyšší PLT, lehce vyšší Retic •nátěr PK: hypochromní mikrocyty, anulocyty, poikilocyty, bazofilní tečkování •nátěr KD: vyšší erytropoéza, NRBC - opožděné vyzrávání cytoplazmy, vyšetřování zásobního Fe (hodnoty snížené nebo nulové) hem-PK4_ery-1000x hem-PK1_ery-1000x hem-PK6_ery-nedostatek Fe Sideropenická anémie Porucha syntézy globinu •Thalasemie •KO: nižší nebo normál. RBC, nižší nebo normál. HGB, výrazně snížené MCV, vyšší RDW, lehce vyšší WBC, lehce vyšší PLT, zvýšený Hgb F (až nad 30%) •nátěr PK: mikrocytóza, hypochromie, terčovité ery, polychromázie, bazofilní tečkování, H.J.tělíska, bazofilní tečkování, NRBC, mladší formy WBC •nátěr KD: hyperplazie erytropoézy, vyšetření zásobního Fe (hodnoty zvýšené) Thalasemie thalasemia Porucha syntézy DNA •Megaloblastové anémie •KO: MCV >100fl, HGB až pod 50g/L, vyšší RDW, snížení WBC, NE, PLT •nátěr PK: makroovalocytóza, poikilocytóza, Cabotovy prstence, bazofilní tečkování, H.J. tělíska, NRBC, NE - hypersegmentace, větší buňky, větší laločnatost jader i u monocytů, velké až gigantické PLT •nátěr KD: buněčně bohatá, erytropoéza zmnožená, posun k mladším formám, (megaloblastová přestavba ve všech vývojových řadách), velké tyče, metamyelocyty, hypersegmentace MGK, vyšetření zásobního Fe (hodnoty zvýšené) NRBC Megaloblasty NRBC X Megaloblast Megaloblastová anémie megaloblastic_anemie2 megaloblastic_anemie7 Megaloblastová anémie megaloblastic_anemie10 megaloblastic_anemie11 megaloblastic_anemie12 megaloblastic_anemie13 Aplastické anémie •periferní krev: pancytopenie nebo alespoň anemie a trombocytopenie, mírná makrocytóza a anizocytóza •kostní dřeň: obvykle hypoplastická až aplastická Aplastické anémie KD Dysplastické anémie •dysplázie erytropoézy: porucha vyzrávání, morfologické abnormality §periferní krev: makrocytóza, anizocytóza,poikilocytóza, §kostní dřeň: často megaloidní rysy, vícejaderné NRBC, karyorexe, interplazmatické můstky, mitózy, bývají zvýšené zásoby Fe Anemie ze zvýšené ztráty erytrocytů •Sledovat: •KO a morfologické změny v periferní krvi •změny v KD •vyšetření na HA • Vyšetření na hemolytické anémie (HA) •např.: •volný hemoglobin v plazmě §základní metodika pro vyšetřování hemolýzy v plazmě ühaptoglobin üferitin üelektroforéza hemoglobinu • •Speciální vyšetření: •osmotická rezistence •hemosiderin v moči •hemoglobin F •Heinzova tělíska •autohemolýza Princip základní metodiky •Volný hemoglobin v plazmě Volný hemoglobin Hb(Fe2+) v plazmě je stanoven fotometricky po jeho oxidaci na hemiglobin (Fe3+) a ten se potom pomocí kyanidu (CN-) draselného přemění na barevný komplex hemiglobinkyanidu, stanovitelný fotometricky. Osmotická rezistence •Princip Stanovení odolnosti erytrocytů vůči různě koncentrovaným hypotonickým roztokům NaCl v koncentracích od 0,70 % do 0,22 % (odstupňované po 0,02 %). Jestliže jsou erytrocyty v isotonickém roztoku 0,9% NaCl, dochází na membráně buňky k rovnovážnému stavu a kapalina se nedostává ani z buňky ani do buňky. Jestliže jsou erytrocyty umístěny v prostředí hypotonického roztoku (0,70 - 0,22 % NaCl) tak buďto prasknou a dojde k hemolýze nebo se vytvoří na membráně rovnováha. • Osmotická rezistence osmot-rez1 osmot-rez2 normál patologie příprava Hemosiderin v moči •Princip Fe3+ v hemosiderinu reaguje s kyselým roztokem ferrokyanidu draselného na ferrokyanid železitý, který vytváří krystalky berlínské modři. •Hodnocení přítomnost modrých krystalů v moči –normální nález: negativní –pozitivní nález: + až +++ Hemosiderin v moči hemosiderin v moči Hemoglobin F •Princip Nafixované, zaschlé nátěry se ponoří do pufru pH 3.3. Hemoglobin A (adult hemoglobin) je v buňce rozpuštěn a vyplaven, hemoglobin F (fetální hemoglobin) je ke kyselému prostředí rezistentní a v erytrocytu zůstává. Zbylý hemoglobin F se potom barví a odečítá mikroskopicky. •Hodnocení procentuelní hodnocení sytě zbarvených erytrocytů §novorozenci: 50 - 90 % HbF §věk < 2 roky: 0 - 4 % HbF §věk > 2 roky: 0 - 2 % HbF Hemoglobin F HGB-F Heinzova tělíska •Princip Heinzova tělíska znázorňují vysrážený degenerovaný hemoglobin v případě, že glykolytické enzymy erytrocytů nejsou schopny zabránit oxidaci hemoglobinové molekuly. Precipitáty se jeví jako jedno nebo více oválných tělísek v erytrocytech. Objevují se těsně u buněčné membrány, ke které přiléhají, barví se supravitálně brillantcresylovou modří. •Hodnocení normalní erytrocyty jsou negativní •Klinický význam enzymové defekty (např.G-6-PDH), hemoglobinopatie, toxické HA, po splenektomii Heinzova tělíska Heinz1 Heinz2 Vyšetření HA •Fotometrická vyšetření na principu stanovení volného hemoglobinu v plazmě. •Autohemolýza Hodnocení spontánní hemolýzy v prostředí fyziologického roztoku, glukózy a ATP po dobu 48 hodin.