IMUNOBLOT ANTI-MPO, ANTI PR3
POSTUP :
Příprava univerzálního pufru: 2,5 ml koncentrovaného roztoku doplnit do 22,5 ml destilovanou vodou-
používá se na ředění sér , konjugátu a promývání
Odtrhnout strip z fólie a vložit do promývací vaničky lícem nahoru(číslem nahoru). Přidat 1,5 ml
univerzálního pufru
a inkubovat 5 minut na třepačce.
Pufr odsát a přidat 1,5 ml univerzálního pufru ke kterému se přidá 15 ul vyšetřovaného séra
(pozitivní
kontrola se ředí stejně jako pacient ).Inkubace 15 min na třepačce
Odsát séra . Přidat 1,5 ml univerzálního pufru, po 5 minutách na třepačce odsát a promývání
opakovat
ještě 2x.
Naředit konjugát: na jeden strip 150 um konc.kojugátu + 1,350 ml univerzálního pufru
Ke každému stripu přidat 1,5 ml naředěného konjugátu a inkubovat 15 min.
Odsát konjugát a 3x promýt v univerzálním pufru - opět 3x po 5 minutách.
Přidat 1,5 ml substrátu - je připraven k použití a inkubovat 15 min.
Odsát a přidat 1,5 ml destilované vody. Stripy vyjmout pinzetou, osušit a vyhodnotit.