Upozornění! Nemanipulujte, prosím, s mikroskopy Po demonstračním výkladu dostanete instrukce Krev a krevní elementy PLAZMA 55% objemu 91% ´voda 7% krevní proteiny (albumin,globulin, fibrinogen) 2% - živiny (aminokyseliny, cukry,lipidy) - hormony (EPO, Insulin) - elektrolyty (Na+, K+, CaII+) BUŇKY 45% objemu Leukocyty, trombocyty Erytrocyty SÉRUM - Neobsahuje fibrinogen a srážecí krevní faktory Velmi komplexní zastoupení různých biologicky aktivních látek ve velmi úzkém koncentračním rozpětí Krevní buňky (formované elementy) • Red blood cells /RBC/ – erytrocyty - 4 – 6 millionů/ 1 l • White blood cells /WBC/ – leukocyty - 5,000 – 9,000 / 1 l • Platelets /PLT/ – trombocyty - 150,000 – 300,000/ 1 l ERYTROCYTY • 4 – 6 milionů/μl • tvar: bikonkávní terčík • velikost: 7.4 μm (normocyt) • struktura: – plasmalema – cytoplasma + hemoglobin 33 % – chybí jádro a buněčné organely • životnost: 120 dní • funkce: transport O2 a CO2 Poikilocytóza a anisocytóza sferocyty drepanocyty • polyglobulie, polycytémie, erytrocytóza – zvýšený počet ery • anemie – snížený počet ery • osmotická resistence a hemolýza (osmotický tlak má velký vliv na živé buňky, protože jejich membrány jsou permeabilní) – v hypertonickém roztoku – ery se smršťují →echinocyty – v hypotonickém roztoku – ery bobtnají, plasmalema praská - hemolýza Retikulocyty • Nezralé ery , v periferní krvi - 0.5 – 1.5 % • Obsahují zbytky organel (polyribosomy, mitochondrie – substantia reticulofilamentosa) • Specifické barvené - brilantkresylová modř • V ery dozrávají během 24 – 48 hod LEUKOCYTY • Granulocyty: - neutrofily - eosinofily - basofily polymorfonukleáry acidofilní cytoplazma specifická + azurofilní granula • Agranulocyty - lymfocyty - monocyty mononukleáry basofilní cytoplazma pouze azurofilní granula Neutrofilní granulocyty • 71 % z DBOK •  10 – 12 m • cytoplazma: acidofilní • specifická granula: neutrofilní • jádro: tyčka (4 %) segmenty (67 %) - (2-5 ) • životnost: několik hodin nebo dní • funkce: mikrofág Eosinofilní granulocyty • 1– 4 % z DBOK •  12 – 14 m • cytoplazma: acidofilní • specifická granula: eosinofilní • jádro: 2 laloky propojené tenkým chromatinovým můstkem, připomíná činku nebo brýle • funkce: fagocytóza komplexů antigen-protilátka •  - eosinofilie – alergie, parazitární onemocnění Eosinofilní granulocyty Basofilní granulocyty • do 1 % z DBOK •  do 10 m • cytoplazma: lehce basofilní • specifická granula: – basofilní - heparin, histamin, .. • jádro: nepravidelně laločnaté, tvar „tlustého písmene S“ • hypersensitivita Agranulocyty • obecná charakteristika: - mononukleáry – jádro je sférické, oválné nebo ledvinovité - basofilní cytoplazma - chybí specifická granula - azurofilní granula s lysosomálními enzymy Lymfocyty • 20 -25 % z DBOK • cytoplazma – modrá s azurofilními granuly, četné ribosomy • jádro – kulaté, hyperchromatické • třídění: - T- a B-lymfocyty - malé ( 8 m), střední ( 10-12 m), velké ( 16-18 m) Monocyty • 5 % z DBOK • velikost:  15 – 20 m • cytoplazma – objemná, šedomodrá, nespecifická granula a četné ribosomy, • jádro – ledvinovité až laločnaté, většinou v excentrické pozici, chromatin je jemně vláknitý • funkce : makrofág TROMBOCYTY • nejsou buňky, ale fragmenty cytoplazmy megakaryocytů • tvar: primárně vřetenovitý, po aktivaci - pseudopodie • velikost: 2 – 4 m • hyalomera světle modrá periferie • granulomera červeně zbarvená zrníčka v centru destičky • životnost: 10-12 dnů • funkce : hemostáza /zástava krvácení/ Jak připravit krevní nátěr? 2 3 4 5 • krevní nátěr fixovat (methylalkohol, 3-5 minut) a barvit (speciální panoptické barvení dle Pappenheima) Světelný mikroskop Jak studovat krevní nátěr? • Čočka imerzního objektivu /zvětšení 100x/ je ponořena do kapky imersního oleje a krevní nátěr je připraven ke studiu • Zapněte mikroskop • Pokud obraz není ostrý, zaostřete pouze pomocí MIKROŠROUBU Pokud se něco nedaří, obraťte se na svého vyučujícího NESAHAT NA MAKROŠROUB Manipulace špatně dobře Dioptrická korekce - Nejprve podívat do pravého okuláru a zaostřit - Potom zkontrolovat levým okulárem, pokud není obraz ostrý, otočte kolečkem Jak počítat DBOK? • krevní nátěr musíte prohlížet systematicky – meandrovitě Tabulka 1 2 Neu tyčky / Neu segmenty /////// /// Eos / Baso Ly // //// Mono // 10 10 9 10 výsledky norma // 4 % ////// /// 67 % / // 3 % / 1 % / ///// 20 % 5 % 10 10 100 100 % Diferenciální bílý obraz krevní • průměrné (normální) hodnoty Neutrofily - tyčky 4 % - segmenty 67 % Eosinofily 3 % Basofily 1 % Lymfocyty 20 % Monocyty 5 % ∑ = 100 % Neutrofily • tyčky : segmenty - 4 % : 68 % →1 : 17 • posun doleva • posun doprava • Hynkovo číslo – 2.7 5 35 41 17 2 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 band 2 segm. 3 segm. 4 segm. 5 segm. neutrophils (nuclei) % Anomálie DBOK   Neutrofily neutrofilní granulocytóza neutrofilní granulocytopenie Eosinofily eosinofilní granulocytóza eosinofilní granulocytopenie Basofily basofilní granulocytóza basofilní granulocytopenie Lymfocyty lymfocytóza lymfocytopenie Monocyty monocytóza monocytopenie