Forenzní serologie Vyšetřuje se materiál biologického původu - krev, krevní stopy na různém materiálu (stříkance na zdi, podlaze, vražedných nástrojích, ušpiněných textiliích, v interiérech automobilů) - části tkání - kožní adnexa (chlupy, vlasy) - sperma - další sekrety Krev • dostatečné množství krve odebrané ze žilního systému živého či mrtvého člověka vyšetřujeme zkumavkovou metodou. • PRINCIP: neznámé aglutinogeny (erys) jsou shlukovány známými antiséry a naopak neznámé aglutininy (protilátky ve vyšetřovaném séru) shlukují známé aglutinogeny (typové erys). • VYUŽITÍ: krev řidičů odebraná k toxikologickému vyšetření (alkohol, drogy) • krev pachatelů podezřelých z trestných činů, kdy na místě zanechali krevní stopy • krev poškozených zemřelých ke srovnání s krví na vražedných nástrojích apod. • STANOVUJEME: A,B,0 systém, MN znaky a Rh faktor. Biologické stopy • Vyšetření skvrn či stop, které se jeví jako krev (může jít o rez, o barvu a podobně) • POZOR: vždy je nutné provést i pozitivní kontrolu a vyšetření podkladu stopy. Důkaz krve BERTRANDOVA metoda • PRINCIP: Hemoglobin za přítomnosti chloridu hořečnatého tvoří při 120 °C s ledovou kyselinou octovou krystaly acetchlorheminu červenohnědé drobné krystalky kosodélníkového nebo kosočtverečného tvaru. • Odečítá se mikroskopicky. • Další možná metoda dle Takayamy, u nás ji nepoužíváme. Důkaz druhové příslušnosti imunodifuzí • PRINCIP: pokud se zkoumá bílkovina (např. ze skvrny nebo z tkáně), tak tato při difuzi agarem (agarozou) se setká s příslušnou specifickou a známou precipitační protilátkou, dojde k reakci a vzniká precipitační linie. Stanovení krevní skupinové vlastnosti ze skvrny provádíme dvojokruhově dvěma metodikami a/ Therkelsenova metoda b/ Smíšená aglutinace Vysycovací metoda dle Therkelsena PRINCIP: přidáme – li k vyšetřovanému materiálu známé antisérum, pak v pozitivním případě dojde ve fázi absorbce k vazbě aglutinogenu z vyšetřovaného materiálu s antisérem a titr použitého séra významně poklesne. Odečítáme ve zkumavkách. Smíšená aglutinace PRINCIP: po přidání antiséra ke stopě zkoumaného materiálu dojde k vazbě s aglutinogeny ze stopy. Po promytí nenavázaných protilátek a po přidání typových erys, dojde v pozitivním případě k aglutinaci s navázanou protilátkou na zkoumaném materiálu. Odečítá se mikroskopicky. Stanovení krevní skupiny z tkání imunohistochemicky (HISTOTEST) Využití: u zemřelých s hnilobnou dekompozicí, u bezkrevných tkání apod. Tkáně se zpracovávají histologicky a poté na podložních sklíčkách proběhne chemická reakce. Následným barvením jsou v případě pozitivity reakce s myšími antiséry anti A,B nebo H) detekovány endotelie kapilár, které jsou rozhodující pro stanovení krevní skupiny. Podobnou metodikou lze stanovit krevní skupinu z chlupu či vlasu, kdy rozhodující reakci pozorujeme ve dřeni těchto adnex. SPERMA Vyšetření podezřelých skvrn na různém materiálu, výtěry z pochvy při trestných činech (znásilnění, sexuálně motivovaná vražda) Ejakulát se v dřívější době detekoval - nespecifickou metodou – průkaz acidfosfatázy PRINCIP: acidfosfatáza je schopna z přítomného substrátu odštěpit fosfát, což lze prokázat barevnou reakcí – fialovočervené zbarvení (fenolftalein v parách amoniaku)– inhibice aktivity acidfosfatásy kyselinou vinnou pro odlišení prostatické a endogenní acidfosfatázy (falešně pozitivní reakce) - specificky barvením spermií V dnešní době (na ÚSL BRNO) Semikvantitativní membránový test firmy SERATEC PSA (prostatický specifický antigen) - výskyt: jedna z dominantních bílkovin seminální tekutiny produkován prostatou (tedy obsahuje jej i tekutina vycházející z urethry před vlastní ejakulací). V malém množství detekován rovněž v periurethrálních žlazách, v endometriu a v buňkách nádoru prsu. - PSA jako marker tumoru prostaty - forenzní využití • Lze jej prokázat ve stopách spermatu i několik let starých a ve vaginálním stěru až do 48 hodin po znásilnění bez ochrany (prezervativ) i bez vlastní ejakulace.