Automatizace močové analýzy Miroslava Beňovská Historie •1500 př.n.l. – Egypťané zjistili, že někteří pacienti mají zvýšený objem moče, která přitahuje mravence •V 6.stol. – Indové zjistili, že sladká moč je spojena s nemocí •V r.1674 – anglický lékař Thomas Willis zařadil ochutnávání moče do rutinní praxe a zavedl pojem Diabetes mellitus http://3.bp.blogspot.com/_ijVOsJdq68M/TSE_K0pEyUI/AAAAAAAAAG0/LmphTBOURCU/s1600/1-2UrineFlask.jpg http://i.dailymail.co.uk/i/pix/2012/09/10/article-2201221-14F06618000005DC-679_312x486.jpg Analýza moče •Chemická analýza moče • •Morfologická analýza moče • Chemická analýza moče • •Automatizace od 80. let minulého století •Přístroje využívají stanovení parametrů pomocí diagnostických proužků (suchá chemie) •Semikvantitativní stanovení bilirubinu, urobilinogenu, bílkoviny, ketonů, hemoglobinu, leukocytů, dusitanů, pH, glukosy a specifické hmotnosti •Standardizace měřící procedury •Pipetování na jednotlivé reakční zóny •Analýza na principu reflexní fotometrie •Diagnostické proužky •Matrice pro suchá činidla - Impregnovaná vlákna • •Analyzovaný vzorek (moč) je aplikován na povrch pevné fáze • •Difunduje do její matrice a rozpouští suché činidlo, které je v matrici dispergováno • •Rozpuštěné činidlo reaguje s analyzovanou látkou za vzniku barevného produktu • •Výsledné zbarvení na povrchu pevné fáze je sledováno vizuálně nebo instrumentálně •Celulózová impregnovaná vlákna •Celulózová matrice (firma Bayer – Siemens) porézní či polopropustná • •Reagencie v suché formě distribuovány • - do matrice • - na povrchu matrice • •Postupná impregnace a zasoušení jednotlivých činidel • •Činidla oddělena separační vrstvou polymeru (ta při hydrataci praskne) •Reflexní fotometrie • • •Impregnovaná vlákna mají vysokou opacitu (neprůhlednost) • •Ke stanovení jejich zbarvení nutno využít reflexní fotometrii • - měření ze stejné strany jako nanesen vzorek, ale na jiném místě (Roche, vhodné i pro plnou krev – přístroj Reflotron) • - měření z opačné strany než aplikován vzorek (vícevrstvé filmy) • Chemická analýza moče •Reflexní fotometrie: •zdroj světla - světlo emitující diody •emitují světlo o různých přesně definovaných vlnových délkách – světlo pak dopadá v různých úhlech na reagenční zóny diagnostického proužku •světlo je odráženo na fotodiodu , která slouží jako detektor •intenzita odraženého světla závisí na vybarvení reakční zóny (od bílé zóny se odráží prakticky 100%, čím tmavší zóna, tím víc světla je absorbováno) Chemická analýza moče •Příklady analyzátorů: •pro malé laboratoře - často poloautomaty • Urisys 1800 (Roche Diagnostic) • Aution Mini, PocketChem UA (Arkray) • •vysokokapacitní – • Urisys 2400 (Roche Diagnostic) • Aution Max (Arkray) http://www.medista.cz/data/images/ARKRAY_PU-4010_PocketChem_UA.gif Urisys 2400 (Roche) • •plně automatický močový analyzátor pro střední a velké laboratoře •kazety s 400 vyšetřovacími proužky •snadné vkládání vzorků ve stojanech, posuv po pásovém dopravníku •identifikace vzorků integrovanou čtečkou čárového kódu •pozice pro statimové vzorky •minimální objem vzorku 1.5ml • Urisys 2400 (Roche Diagnostic) strip Automatická morfologická analýza moče •Tři principy na trhu: a)Fluorescenční flow cytometrie, nativní moč b) b)Automatická mikroskopie (průtoková cela, mikroskop, digitální kamera – nativní moč) c) c)Automatická analýza močového sedimentu v malé kyvetce, digitální kamera – 10x zakoncentrovaná moč d) •Kompletní systém močové analýzy – diagnostické proužky + morfologie • a) Fluorescenční flow cytometrie •UF 100 (Sysmex) • •vzorek moče je automaticky naředěn a obarven a obklopen kapalinou neobsahující žádné buňky •prochází měřící celou, kde je ozářen argonovým laserem •fluorescence a rozptyl světla vznikající po ozáření se detekuje a je specifická pro jednotlivé buňky •výsledky jsou vydány jako počet buněk /ul (erytrocyty, leukocyty atd.) •nevýhoda - jednotlivé částice nemůže obsluha prohlížet •rozšířil se od r.1999 UX-2000, Sysmex http://img.medicalexpo.com/images_me/photo-mg/automatic-urine-analyzer-bench-top-70998-7472161.jpg http://sysmex.me/files/f1/Image/pic_135/fsc-fi-scatter.gif •Automatická analýza diagnostických proužků + fluorescenční flow cytometrie • •Až 150 vzorků/hod. • AU-4050, Arkray G:\obrazovka.jpg E:\DCIM\131_PANA\P1310425.JPG Automatická analýza diagnostických proužků + fluorescenční flow cytometrie b) Automatická mikroskopie - IQ 200 (IRIS) •plně automatizovaná mikroskopická analýza •60 vzorků/hod •možnost prohlížení částic na obrazovce •možnost přeřazení do jiné kategorie •přístroj rozlišuje 12 základních kategorií (např. erytrocyty, leukocyty, epitelie, válce) a umožňuje tvorbu podkategorií •archivace zobrazení IQ 200 (IRIS) •Princip přístroje: •Tenká vrstvička vzorku sendvičovitě uzavřená mezi vrstvy suspendované tekutiny prochází průtokovou celou •Kamera spojená s mikroskopem s využitím stroboskopu zachytí 500 obrázků z jednoho vzorku - výsledný obraz je digitalizován •Jednotlivé snímky částic jsou izolovány do rámečků – každá částice zvlášť Erytrocyty – zobrazení z IQ 200 C:\Users\75224\Documents\Vzdělávání\E-learning\Mocky\IQ\My Pictures\Granulvalce\granulovane valce.bmp Kompletní systém močové analýzy IQAX System Front view •IQ 200 (Iris) v kombinaci s Aution Max AX-4280 (Arkray) • • Zjednodušení provozu • Vložíme vzorek a získáme kompletní výsledek • Rozšířil se v r. 2004 • IQ 200 Elite + Velocity, Beckman http://www.axonlab.com/var/em_plain_site/storage/images/media/bilder/axonlab-schweiz/produkte/urind iagnostik/iricell-2000-3000_2/4971-1-ger-CH/iRICELL-2000-3000_2_lightbox.jpg Automatická mikroskopie + chemická analýza moče FUS-2000, DIRUI http://www.dirui.com.cn/Y02/zyj_img_cp/s2000_1b.jpg •Přístroj je hybridní močový analyzátor • •Provádí chemickou analýzu i automatizované mikroskopické vyšetření moče • •Princip je stejný jako u systému iQ 200 – Aution Max, ale zařízení je umístěno v jednom přístroji •Pro obě metodiky je využit jeden pipetor • •Čínský výrobce c) Automatická analýza močového sedimentu v kombinaci a chem. anal. - LabUMat and UriSed 2, Elektronika 77 – dodává DOT diagnostics a Biovendor • LabUMat - UriSed UriSed •Hlavní výhody přístroje: • •každý vzorek je prohlížen v jednorázové kyvetě •pro provoz stačí pouze destilovaná voda k promývání pipety •porovnání výsledků s chemickou analýzou •výsledkem jsou jasné, ostré obrázky jednotlivých částic močového sedimentu •lze si prohlížet obrázek jednotlivé částice nebo celého zorného pole •všechny obrázky jsou pak uloženy v databázi, odtud mohou být kdykoli vyvolány • H:\kuku images\ss.jpg Urised 3 •Automatický analyzátor močového sedimentu – nově s fázovým kontrastem • •Speciální kombinace • jasného obrazu a fázového • kontrastu • •Výkon 120 vzorků/hod. • •Mnohonásobné zvětšení pro prozkoumání trojnásobného množství vzorku v porovnání s UriSed 2 • •Kompatibilita s LabUMat 2 • https://www.novolab-labware.com/media/catalog/product/cache/3/thumbnail/555x361/9df78eab33525d08d6e 5fb8d27136e95/U/r/Urised_3+PC%20layeres.jpg Automatická analýza močového sedimentu sediMax, Menarini sediMAX stand alone V licenci od firmy Elektronika 77 Sedimax cuvette Kyvetka cobas 6500, Roche sediment + chem. analýza https://www.mojemedicina.cz/files/videos/2014_11_27_CB_DGN_Ferdova-cobas-6500/slides/slide_03.jpg http://www.cobas.com/content/internet/product/cobas/en/home/product/urinalysis-testing/cobas-6500-u rine-analyzer-series/_jcr_content/mainParsys/tabs/tabsParsys/tabitem/firstProductDetailsParsys/imag e/image.img.jpg/1432122195030.jpg cobas 6500 - automatická močová linka •Složena z analyzátoru cobas u 601 a analyzátoru cobas u 701 • •cobas u 601 - automatizované vyšetření moči pomocí testovacích proužků • •cobas u 701 • - automatizované mikroskopické vyšetření • močového sedimentu s výhodou reálných snímků • - posouvá zlatý standard v oblasti mikroskopického • vyšetření moči standardizací a automatizací všech • manuálních kroků • E-learning: Mikroskopická analýza moče o o ohttp://elportal.cz/publikace/vysetreni-moce o o o- Mikroskopické nálezy barveného sedimentu • - Mikroskopické nálezy nativního sedimentu • - Nálezy z automatického analyzátoru FUS-2000 a iQ 200 o •