Laboratorní preanalytická fáze příprava analytického vzorku Preanalytická fáze • •Proces laboratorní diagnostiky •Tři fáze: preanalytická • analytická • postanalytická •Preanalytická – mimolaboratorní • laboratorní •Mimolaboratorní – příprava pacienta, odběr, identifikace, transport • • Transport biologického materiálu • •Donáška •Potrubní pošta •Transportní vozidlo - chlazení Olomouc_2008 001 Olomouc_2008 004 •přenosný •mrazící box •transportní vozidlo s chladícím agregátem •a monitorováním teploty Preanalytická fáze laboratorní •Příjem a identifikace biologického materiálu – povinné údaje, kontrola • •Vložení identifikačních údajů pacienta do LIS –manuálně, pomocí načítacího zařízení nebo automaticky při načtení čárového kódu • •Příprava analytického vzorku – centrifugace (rozložení, bezpečnost) • •Označení analytického vzorku čárovým kódem • •Vytvoření sekundárních analytických vzorků – aliquotů (aliquoting) a jejich označení štítky s čárovým kódem (labeling) • •Roztřídění analytických vzorků pro jednotlivá cílová pracoviště laboratoře (sorting) Laboratorní informační systém (LIS) •Laboratoře – data – jejich shromáždění a zpracování •Tvorba laboratorního nálezu •Předání nálezu lékaři – tisk – elektronicky •Historie – sběr a uložení dat •PC – síť •Čárový kód – jedinečná číselná identifikace •Oboustranná komunikace • • LIS •Definice metod •Vklady •Nálezy •Kontrola nálezů •Interní kontrola kvality •Ekonomika •Statistika • •centrifugace Způsoby centrifugace •Diferenciální - běžná, založena na • rozdílné sedimentační rychlosti částic • (rozdílná hustota část. k hust. prostř.) •Izopyknická – stejné, ale prostředí o • měnící se hustotě – sacharóza, • polymery • - diskontinuální • - kontinuální (změna hustoty plynulá) •Význam: • Ø odstranění sraženin (krevní koláč, deproteinace….) • Ø odstranění buněk (získání plazmy z nesrážlivé krve) • Ø izolace; koncentrace buněk • (cytologický preparát z likvoru – cytospin) • Ø zahuštění bílkovin (moč, likvor) • Ø dělení směsi nemísitelných kapalin Ø Centrifugační síla •Vliv gravitace nahrazen použitím centrifugy •Zkumavky se pohybují v tzv. rotoru po kruhové dráze •Působí na ně odstředivá síla, je tím větší, čím větší rychlostí a po delší dráze se zkumavky pohybují (síla závisí na poloměru rotoru a jeho rychlosti otáčení ) • • F = m . r . w2 • • m – hmotnost částic • r – poloměr, tj. vzdálenost dna centrifugační zkumavky od osy otáčení • w - úhlová rychlost (w = 2 p f, kde f je frekvence otáček). •Relativní centrifugační síla (R); •anglický termín Relative Centrifugal Force (RCF) • •vyjadřuje poměr mezi centrifugačním zrychlením •a zrychlením tíhovým • •Udává se v násobcích g •R = r . w2 / g •Relativní centrifugační síla R se snadno vypočítá •pro kteroukoli centrifugu a daný počet otáček • • •R = 4,02 . f 2 . r •(je-li frekvence otáček uváděna v jednotkách [s-1] a vzdálenost r v [m]) • • •R = 1,12 . f 2 . r . 10-5 •je-li frekvence otáček uváděna v jednotkách [min-1] a vzdálenost r v [cm] • • •Lze určit rovněž z nomogramu • •r (poloměr rotoru) • [mm] •otáčky •[f / min.] •Relat.centrif. síla • (RCF) • [g] Typy centrifug •Nízkoobrátkové - zrychlení 5.104 ms-2(5000g) •Středněobrátkové - zrychlení 2.105 ms-2(20000g) •Vysokoobrátkové - zrychlení 107 ms-2 – • ultracentrifugace virů • •Rotory výkyvné - menší zrychlení, rozdělení • horizontální (odstředivá síla • kolmo ke dnu) •Rotory úhlové - větší počet otáček, kratší doba • dělení • Instr Instr Instr GCMS_SKH_AAK_Labsklo_centrifugy 091 Centrifugace •Krevní elementy (erytrocyty, leukocyty, trombocyty, v případě séra krevní sraženina) - vyšší specifická hustota -účinkem odstředivé síly do dolní části odběrové nádobky • •V horní části sérum případně plazma • •Separační gel - specifická hustota mezi krevními • elementy a sérem nebo plazmou • - po centrifugaci mezi nimi – oddělení • - zabrání průniku látek z krevních elementů • (např. draslíku) do séra nebo plasmy • - odstraňuje nutnost sérum nebo plazmu po • centrifugaci přenést do jiné zkumavky preanal_video_2 002 Cytofuga • • • Příprava mikroskopického preparátu • k cytomorfologickému vyšetření mozkomíšního moku - cytospin Instr Speciální centrifugační nádobky • •1) Zahuštění močí, likvorů • Stanovení specifických proteinů • • •2)Analýza ze slin • Zpracování hustých biologických materiálů Instr_tech_lab Instr_tech_lab Instr_tech_lab Centrifugační automatické analyzátory (historie) • •otvor pro pipetování reagencie •otvor pro pipetování vzorku •kyveta s vertikálním průchodem paprsku • Automatizovaná a robotizovaná perianalytická laboratorní fáze – jednotlivé kroky : • •Identifikace biologického materiálu •Centrifugace •Odzátkování •Označení aliquotů čarovým kódem - labeling •Rozpipetování – aliquoting •Zazátkování •Roztřídění - sorting •Archivace •Skladování Základní části perianalytického systému •Vstup – místo pro vkládání zkumavek •Dopravníkový systém - transport zkumavek mezi jednotlivými funkčními jednotkami •Laserová čtečka k identifikaci vzorku načtením čárového kódu •(Robotizovaná centrifuga) •Odzátkovací zařízení •Zásobník zkumavek pro aliquoty •Tisk a nalepení štítků s čárovým kódem •Pipetor pro vytvoření aliquotů •Zařízení pro roztřídění primárních zkumavek a aliquotů pro cílové analyzátory •Chlazený sklad pro uložení vzorků – automaticky posílá vzorky pro analýzu doordinovaných testů, po uplynutí skladovací doby vyhodí vzorky Typy laboratorní perianalytické automatizace •Celková •Perianalytická zařízení spojená transportní dráhou přímo s analyzátory ( „On-line“) • a) kruhové uspořádání • b) moduly uspořádané stavebnicově za • sebou • •Diskrétní •Samostatně stojící pracovní stanice •Roznášení vzorků k analýze do samostatně stojících přístrojů OLA 2000 (Beckman – dříve Olympus) DSC1 • Power Processor (Beckman Coulter) spojený s analyzátory • (St. Dominic-Jackson Memorial Hospital, Jackson, Mississippi) Propojení 2x Advia 1600 a Advia Centaur - Siemens Složení perianalytického systému Modular Preanalytics •Vstupní modul •Robotizovaná centrifuga •Odzátkovací zařízení •Alikvotační modul •Modul generující a lepící čárové kódy •Zátkovací modul •Třídící modul •Skladovací zařízení Modular Preanalytics (Roche Diagnostic) • Olomouc_2008 009 Chlazený sklad p 501/p701 (k MPA), Roche Chlazený sklad p 501/p701 (k MPA), Roche •Ukládá 400 zkumavek/hod. •Automaticky zátkuje a odzátkovává •Likviduje vzorky po uplynutí expirace •Kapacita 13500 zkumavek modul p501 •Kapacita 27000 zkumavek modul p701 • • • • •42 Preanalytický systém cobas p 312 - „Kolibřík“, Roche •Malý, výkonný preanalytický systém (1mx1m) •Velmi vhodný pro menší laboratoře, pro provozy s nedostatkem místa •Zpracování 100 až 2000 vzorků za den •Provede odzátkování, třídění a archivaci vzorků z různých oborů • (klinická chemie, imunologie, • hematologie, koagulace a močová • analýza) ANd9GcR6eDXGIi1OmOX7JvGGlFCk7IrYMdsR24yuUp9ib_PA7qt7_giL •43 •Preanalytický systém cobas 8100, Roche •44 Preanalytický systém cobas 8100, Roche •Novinka - prezentace Euromedlab 2013, Milano •RFID nosič – 3D transport •Input station – identifikace, centrifugace, odzátkování •Aliquot station – příprava alikvotů, roztřídění, archivace nebo odeslání na analýzu •Output station – mezisklad, třídění, zátkování • • Aptio Automation, Siemens •Dopravníkový systém včetně centrifugy •Třídění – 800 vzorků/hod. •Vzorky stačí nasypat do systému •Centrifuga – 300 vzorků/hod. •Možnost připojení biochemických i imunochemických analyzátorů Advia, immulite, Dimension, hematologické analyzátory včetně koagulometrů •Víčkování pomocí fólie • • •45 Aptio Automation, Siemens - novinka •46 http://www.emedico.co.kr/news/photo/201209/15045_8174_2126.jpg Trend pro středně velké laboratoře •Pracovní stanice spojující některé funkce preanalytiky, klinickou a imunochemickou analýzu •47 •48 Power Link, Beckman •AU680 •Power Link •UniCel DxI 600 or 800 •Včetně odzátkování •49 Řešení preanalytické fáze – pouze software •Automatický tisk alikvotačních štítků, •případně sledování vzorku, skladování - •manuální rozpipetování vzorků a další •operace • •Infolab (LIS), MP Program •PSM, Roche •iPAW, Beckman • • •Výhody preanalytických systémů: • •Zkrácení TAT •Úspora personálu •Odstranění možnosti potenciální záměny materiálu •Omezení styku s biologickým materiálem •Zachycení sraženiny v séru •Zájem personálu o novou přístrojovou techniku •Representativní laboratoř Aptio Automation - video •51 •https://vimeo.com/63413115