P06
Diagnostika některých
dalších gramnegativních
bakterií
VLLM0522c (podzim 2016)
Osnova
●
G– koky
●
„jiné“ G– tyčky
●
diagnostika G– koků a „jiných“ G– tyček
●
úkoly
2/30
Rod Neisseria
●
G– koky až kokobacily, často ve dvojicích, aerobní,
mikroaerofilní (či kapnofilní)
●
KAT+, OXI+
●
kultivačně poměrně náročné:
– ústní neisserie: KA
– N. meningitidis: obohacený KA
– N. gonorrhoeae: ČA
3/30
Neisseria gonorrhoeae
●
G– diplokok, tvar kávového zrna,
často intracelulárně (leukocyty)
●
původce kapavky, infekce
nezanechává trvalou imunitu →
není možné očkování
●
citlivý na vnější vlivy (přenáší se
pouze pohlavně), nutné omezit teplotní šok
(předehřáté medium, rychlý transport atp.)
●
z důvodu citlivosti se zasílají výtěry: ústí urethry,
cervix (nikoli pochva!), rektum (možný rezervoár
infekce), v případě podezření výtěr z faryngu
●
kredeizace – prevenze novorozenecké
keratokonjunktivitidy (Septonex, dříve AgNO3) 4/30
Neisseria meningitidis
●
G– diplokok, citlivý na teplotu
●
časté bezpříznakové nosičství, může způsobit
faryngitidy, pneumonie, až meningitidu a sepsi
●
meningitida málo častá, ale vysoce letální (nutná
kombinace vysoce virulentního kmenu a oslabené
imunity)
●
rychlý průběh (z plného zdraví chřipkovité příznaky,
vyrážka, petechie, meningeální příznaky, sepse)
●
nejčastější seroskupiny: A, B, C, W135, a Y
– možné očkování (v ČR nejčastější seroskupiny
B a C, jinde častější ostatní typy, viz mapa)
– očkování proti seroskupině B pokrývá ¾ kmenů
5/30
Neisseria meningitidis (2)
●
„meningitis belt“ v Africe
6/30
„Ústní“ neisserie
●
běžná mikroflóra dutiny ústní a faryngu
●
obyčejně nepatogenní, při poruše imutiny
endokarditidy, meningitidy
●
koky, kokobacily (nemusí se jednat o diplokoky)
●
kultivace málo náročná, postačí KA
7/30
Srovnání neisserií
8/30
In vivo In vitro
gonokok nejchoulostivější,
přenos jen sexuální
nejchoulostivější,
roste jen na
čokoládovém agaru
meningokok méně choulostivý,
přenos na krátké
vzdálenosti i
kapénkami
méně choulostivý,
je-li krevní agar
obohacen, může na
něm růst
„ústní“
neisserie
nejméně
choulostivé
roste i na chudém
krevním agaru
Rod Moraxella
●
krátké tyčky, kokobacily, M. catarrhalis diplokok
●
KAT+, OXI+, INAC+ (indoxylacetátový test)
●
sliznice nasofaryngu, spojivkového vaku, genitální trakt
●
Moraxella catarrhalis (dříve rod Branhamella):
– záněty HCD u dětí (sinusitis, otitis media)
●
Moraxella lacunata
– konjunktivitida
9/30
Legionella pneumophila
●
kultivačně náročná G− tyčka,
více sérotypů, speciální půda BCYE
●
nejčastější původce legionářské
nemoci (pneumonie)
●
pontiacká horečka (lehké chřipkové
onemocnění s bolestmi hlavy a svalů,
bez postižení plic)
●
rezervoár ve vodovodech, klimatizaci, atp. nutné→
pečlivé plánování vodovodní sítě
●
přenos inhalací kontaminovaného aerosolu
10/30
Legionella pneumophila (2)
11/30
Rod Bordetella
●
G– kokobacily, Bordetova-Gengouova půda
●
řasinkový epitel HCD, přenos kapénkově
●
B. pertussis a B. parapertussis, původci pertusse
(dávivý neboli černý kašel), resp. parapertusse
●
B. bronchiseptica (primárně zvířecí patogen, vyvolává
respirační onemocnění psů,
prasat, atd., ojedinělý přenos
na člověka, obtíže podobné
pertussi)
●
pro diagnostiku se používá
pernasální výtěr
12/30
Rod Brucella
●
G– kokobacily
●
pro člověka patogenní B. abortus, B. melitensis, B.
suis a B. canis
●
Bangova choroba (neboli brucelóza, undulující
horečka či maltská horečka)
– místem vstupu nejčastěji poraněná kůže nebo
sliznice
– intracelulární parazit fagocytujících buněk,
v makrofázích jsou roznášeny po celém těle →
široká škála příznaků (horečka, zimnice, pocení,
únava, myalgie, svalová slabost, nechutenství...)
– diagnostika zejména hemokultivace a serologie
na specializovaném pracovišti 13/30
Francisella tularensis
●
G– kokobacily, intracelulární parazit
●
původce tularémie
– primárním rezervoárem hlodavci a klíšťata
– charakteristické fokálním vředem v místě
vniknutí do organizmu a zvětšením místních
mízních uzlin
– podle brány vstupu různá
klinická manifestace
(od nejčastější formy
ulceroglandulární
až po septickou)
14/30
Diagnostika G– koků
●
u podezření na kapavku důležité provést správně
odběry (vysoce citlivé mikroorganismy)
– časté, že patogen nepřežije transport
– doporučováno poslat také nátěr na sklíčko
z cervixu a urethry (ne z rekta a faryngu)
●
purulentní meningitida
– odebírá se mozkomíšní mok, případně krev na
hemokultivaci
– mozkomíšní mok lze vyšetřit biochemicky,
cytologicky a mikrobiologicky (mikroskopie,
přímý průkaz antigenu)
– nejdůležitější co nejrychlejší zahájení léčby pacienta!
15/30
Kultivace G– koků
●
drobné, bezbarvé nebo nažloutlé kolonie, rostoucí
(podle druhu) na krevním či čokoládovém agaru
●
KA či ČA nezbytný i pro difusní diskový test
16/30
KA KA+ ČA
gonokoky NE NE ANO
meningokoky NE ANO ANO
ústní neisserie a
moraxelly
ANO ANO ANO
Diagnostika „jiných G– tyček“
●
mikroskopie: G – kokotyčky
●
kultivace: zpravidla speciální půdy (BG pro
bordetely, BCYE pro legionely atd.)
●
biochemická identifikace: některé znaky mohou být
využity
●
antigenní analýza: někdy se využívá
●
nepřímé metody: využívají se, např. aglutinace u
tularémie
●
diferenciální diagnostika neprobíhá algoritmicky
(vzorky zasílány na vyšetření přímo s podezřením na
legionelózu, dávivý kašel, Bangovu chorobu apod.)
17/30
Úkol 1: Mikroskopie klinického
vzorku a mikroskopie kmene
●
úkol 1a: Pozorování uretrálního nátěru u kapavky
– zakreslete koky, leukocyty a jejich uložení
●
úkol 1b: Mikroskopie suspektních kmenů
– 4 kmeny G– koky, jeden kmen G+ kok
18/30
Intracelulární uložení gonokoků
19/30
Úkol 2: Kultivace na agarových
půdách
●
popište kolonie všech kmenů na KA+, jeden kmen,
který tam neroste, popište na ČA
20/30
KA KA+ ČA
gonokoky NE NE ANO
meningokoky NE ANO ANO
ústní neisserie a
moraxelly
ANO ANO ANO
Úkol 3: Základní biochemické testy
u G– koků
●
testy budou prováděny demonstračně na bočním stole
●
úkol 3a: Oxidázový test k odlišení neisserií a
moraxel od případných jiných G- koků
●
úkol 3b: Indoxylacetátový test k odlišení
Moraxella catarrhalis od neisserií
– proužkový test, pozitivní je modrozelené zbarvení po
několika minutách
21/30
Úkol 4: Diagnostika neisserií a
moraxel biochemickými testy
●
v naších podmínkách NEISSERIAtest
●
povšimněte si slabé biochemické aktivity
patogenních neisserií
●
gonokok štěpí
jen glukózu
●
meningokok
jen glukózu
a maltózu
22/30
Úkol 5: Test citlivosti G- koků na
antibiotika
●
vyhodnoťte diskové difúzní testy meningokoků a
gonokoků
●
Moraxella catarrhalis vzhledem k hraniční patogenitě
odečítat nebudete
23/30
Úkol 6: Přímý průkaz antigenů
původců meningitid
●
prohlédněte si soupravu a zapište názvy mikrobů,
které mohou být touto metodou diagnostikovány:
– Neisseria meningitidis A (teenageři, batolata)
– Neisseria meningitidis B (teenageři, batolata)
– Neisseria meningitidis C (teenageři, batolata)
– N. meningitidis Y/W135 (teenageři, batolata)
– Haemophilus influenzae b (dříve batolata)
– Streptococcus pneumoniae (senioři)
– Streptococcus agalactiae (novorozenci)
– (nejtypičtější věková skupina uvedena v závorce)
●
prohlédněte si videoklip a zapište určený patogen
24/30
Úkol 7: Diagnostika bordetel,
brucel, legionel a francisel
●
úkol 7a: Kultivační diagnostika bordetel
– výtěr je smíchán s kapkou
– očkován ve směru spirály
– poté jsou očkovány radiální paprsky kličkou
25/30
Úkol 7: Diagnostika bordetel,
brucel, legionel a francisel
●
úkol 7b: Demonstrace kultivační půdy na
legionely (Buffered Charcoal Yeast Extract)
26/30
některé legionely
fluoreskují v UV světle
Úkol 7: Diagnostika bordetel,
brucel, legionel a francisel
●
úkol 7c: Průkaz protilátek proti tularémii
– aglutinace je mapovitý povláček na dně důlku
(buňky jsou provázány protilátkami)
– negativní reakce je kompaktní pravidelná tečka
(sedimentované bakteriální buňky)
27/30
pozitivní negativní
1:2 1:4 1:8
Úkol 7: Diagnostika bordetel,
brucel, legionel a francisel
●
úkol 7c: Průkaz protilátek proti tularémii
– 1. řada:
aglutinát je viditelný
v ředění 1:2 a 1:4,
nikoli však již 1:8 a vyšším
titr je 1:4
– 2. řada:
v žádném důlku
není aglutinace →
žádný titr,
negativní reakce
28/30
Úkol 7: Diagnostika bordetel,
brucel, legionel a francisel
●
úkol 7d: Diagnostika protilátek proti brucelóze
– provedena ELISA ve třídách IgG i IgM
– pokuste se o závěrečnou interpretaci
●
pozitivní IgM akutní infekce→
●
pozitivní igG prodělaná/chronická infekce→
29/30
Po tomto cvičení byste měli umět:
●
popsat nejdůležitější zástupce rodů Neisseria a
Moraxella, vč. diagnostických postupů, které vedou k
úspěšné identifikaci
●
zhodnotit nároky na transport a výživu rodů Neisseria a
Moraxella
●
jmenovat původce purulentních meningitid, vč.
diagnostických postupů, které vedou k úspěšné
identifikaci
●
popsat „jiné“ G– tyčky, jejich nároky na kultivaci a
možné diagnostické metody
30/30