Biologická léčba – principy,
technologie, příklady
Doc. PharmDr. Jan Juřica, Ph.D.
Biologické léčivo
• „Bioléčiva, biologika, cílená léčba“
- rekombinantní proteiny, peptidy,
protilátky, hormony, látky získané z
krve/plazmy a jejich rekomb. varianty
• „Biologicals, Biopharmacy,
Biopharmaceuticals“
- rekombinantní proteiny, peptidy,
protilátky, hormony
+ kmenové buňky + xenotransplantace
Klasická vs. Biologická léčiva
Velké, složité molekuly, nejčastěji
proteiny >50 kDa
Vyrábějí se pomocí živých
organismů/buněk – risk
kontaminace, vlastní „vrozená“
odlišnost původce léčiva
Komplexní heterogenní struktura
matrice, ze kt. se léčivo izoluje
Hůře charakterizovatelné (3D
struktura, konfromace..)
Mechanismus účinku je
komplexní, někdy ne zcela
jasný/průkazný
Většinou je imunogenní
Většinou bez interakcí s CYP
Malá molekula < 1kDa
Výroba chemickou syntézou /
izolací z rostlin
Méně kritických kroků při syntéze
Léčivo velmi dobře
charakterizováno
Většinou lépe popsán
molekulární mechanismus
účinku
Lineární odpověď dávka-účinek
Většinou není imunogenní
Většinou mají farmakokinetické
interakce na úrovni P450
Často velmi podobné/shodné s
molekulami lidského těla.
Dokáží velmi přesně zasáhnout
centrum nemoci.
Lze je využít k léčbě dříve obtížně
léčitelných chorob.
Obtížná adjustace do LF
Často malá molekula, odlišná od
endogenních látek
Exponují svým účinkem celý
organismus
Limitovaná účinnost u některých
stavů
Snadná manipulace a formulace
LF
Klasická vs. Biologická léčiva
Vývoj a výroba biologických léčiv
• Vývoj biologika trvá 10 – 15 let, stojí přes 30 miliard
korun (1,5 mld USD)
• Biologika řízeně vyrábějí buňky (bakteriální, kvasinkové,
savčí i rostlinné), do nichž byla vložena genetická
informace uložená v DNA.
• První lék vyrobený biotechnologických postupem byl
inzulin (v roce 1978, registrace 1982).
• Objev biotechnologické výroby léčiv, resp.
monoklonálních protilátek, byl v roce 1984 oceněn
Nobelovou cenou. Niels K. Jerne;Georges J.F. Köhler,
César Milstein
Specifický účinek biologik
• Specifikem biologik je zacílení na místo nemoci
- konkrétní cílovou strukturu, antigen, enzym,
signální dráhu (např. na nádorové buňky).
• Biologika dokážou označit poškozené buňky ke
zničení imunitním systémem pacienta.
• Umí zabránit růstu a množení buněk, které
onemocnění způsobují.
• Dokáží dodat další lék přímo do centra
onemocnění, což zvyšuje úspěšnost léčby.
Historie biotechnolog. léčiv
• 1972 – získaná rekombinantní deoxyribonukleová
kyselina (rDNA)
• 1975 - první monoklonální protilátka (MAb).
• Následovalo založení prvních biotechnologických
farmaceutickych společností. USA – Genentech
Evropa - Biotech
• 1982 – 1. biotechnologický produkt byl - rekombinantni inzulín
(Genentech, obchodovaný firmou Eli Lilly)
• 1986 : monoklonální protilátka OKT3
(OrthoCloneR), rekomb. IFN
Příklady biologických léčiv
1) Imunomodulační biologika
MAb (Infliximab) a fůzní proteiny (etanercept), IFN
2) Hormony – typicky inzulin nebo růstový hormon;
3) Vakcíny – např. HVB, HPV
4) Růstové faktory – erytropoetin, trombopoetin CSF
5) Enzymy pro léčbu dědičných (monogenních) onemocnění
(např. imigluceráza pro léčbu Gaucherovy choroby);
6) Biologika ovlivňující hemostázu, faktory F VII, F VIII, F IX, jiné
inhibitory koagulace nebo aktivátory fibrinolýzy;
7) Genová terapie (např. Alipogen tiparvovek – gen pro LPL)
Výhody pro pacienta
• Lepší účinnost vs. „klasická“ léčiva
• Biolog. Léčiva jsou užívána pod dohledem odborníků ve
specializovaných centrech.
• Jedná se o cílenou personalizovanou léčbu, která je vždy
vybírána na míru pacientovi i chorobě.
• Před podáním absolvuje pacient podrobnější vyšetření.
• Lepší znalost základních vlastností léku a jeho účinku
• Lepší řešení případných NÚ, včasný záchyt
Rizika a negativa biologických léčiv
• Pozdní kancerogenita
• Alergenní potenciál
• Kontaminanty ze zdrojových buněk
• Stabilizační přísady (kryoprezervace, stabilizátory)
• Sterilita
• Nízká stabilita, variabilita léčiva (produktu
biotechnologie)
• úmrtí - teenager v 1. fázi KHL: hepatotoxicita po genové
terapii vrozeného deficitu enzymu při použití
adenovirového vektoru (1999)
Názvosloví
• Odvození od biochemického názvu (pegasys –
PEG IFNα)
• Název daný výrobcem – nemající vztah ani k
účinku ani k původu
• Název hormonu s různými reg. názvy
(Serostim, Saizen, Zorbtive)
• MAB- systém kořene slova a přípon
Názvosloví MAB
• Obecně: koncovka -mab
• Písmeno před koncovkou:
– o – myší původ
– a – potkaní původ
– e – křeččí původ
– i – z primátů
– u – humánní původ (produkční linie lidských
buněk)
– zu - humanizovaná
– Xi - chimerní
Pavelka a kol. Biologická léčba zánětlivých autoimunitních onemocnění v
revmatologii, gastroenterologii a dermatologii, Grada 2014
Názvosloví MAB
• Někdy i kódování indikace
– lim – imunitní
– bac – bakteriální infekty
– cir– KVS
– tu – malignity
Např. rituximab – chimerická MAB k léčbě
Non-Hodgkin. Lymfomů
alemtuzumab – humanizovaná protilátka proti CD52
glykoproteinu k léčbě CLL
Výroba biologického léčiva
• Izolace z přírodních zdrojů – historicky:
inzulin z pankreatů skotu, prasat (dnes rekombinantní)
h-choriogonadotropin – z moči těhotných žen (dnes
rekombinantní)
hirudin – pijavice lékařská (H. officinalis) (dnes syntetický/rekomb.)
Výroba biologického léčiva –
rekombinantní technologie
• Izolace DNA produktu/syntéza dle knihovny
• Transformace/transfekce DNA do produkčních
buněk
• Produkce
• Přečištění
• Stabilizace
• Testování (biologické účinnosti, KHL I-III)
• Registrace (+ KHL IV)
Výroba biologického léčiva rekombinantní
technologie
• Izolace DNA produktu/syntéza dle knihovny
• Transformace/transfekce DNA do produkčních
buněk
• Produkce
• Přečištění
• Stabilizace
• Testování (biologické účinnosti)
Výroba biologického léčiva rekombinantní
technologie
Transformace/transfekce pomocí
plazmidu počátek replikace
polyklonovací místo (umožňuje vložit cizí DNA)
selekční marker
promotor a terminátor transkripce
selekce
Výroba biologického léčiva
• Produkce mikroorganismy
- bakterie
- kvasinky
• Tkáňové kultury vyšších organismů
• Bezbuněčné expresní systémy
• Geneticky modifikovaná zvířata, rostliny
Výroba biologického léčiva
- rekombinantní technologie
• Produkce mikroorganismy
- bakterie – optimalizované kmeny E. coli (mutace
periplazmatické a membránové proteázy)
- kvasinky – S. cerevisiae
- Pichia pastoris ?
Výroba biologického léčiva
E. Coli
- pro syntézu proteinů bez posttranslační modifikace
- levné medium, mutované formy E. coli s výhodnými vlastnostmi –
zvýšení stability genu, produktu…
- modifikace stěny, tranformace plazmidu ( vnesení DNA
produktu) – teplotní šok, elektroporace
- selekce – rezistence k ATB/ kultivační půdě
- produkce peptidu spolu s pept. sekvencí, kt. zajistí navázání na
afinitní nosič, renaturace
- např. IFNα, GSM, inzulin, růstový hormon …
Výroba biologického léčiva
S. Cerevisiae
- pro syntézu proteinů s nutností posttranslační modifikace
- haploidní kvasinky – možnost hybridizace
- snadná, ekonomická kultivace, generační doba 2h
- statut GRAS – „generally regarded as safe“
- mutanty s výhodnými vlastnostmi – zvýšení stability genu,
produktu…
Výroba biologického léčiva
S. cerevisiae
- modifikace stěny, tranformace plazmidu (různé plazmidové
vektory)
- selekce – auxotrofní kmeny (vyřazena biosyntetická dráha pro
AMK, NK); plazmidem se vnese tento gen –přežijí jen
transformované kvasinky
- selekce ATB
- produkce peptidu spolu s pept. sekvencí, kt. zajistí navázání na
afinitní nosič, renaturace
- např. inzulin, růstový hormon …
Výroba biologického léčiva
Pichia pastoris
- vyšší genet. stabilita, schopnost podobné glykosylace proteinů
jako u lidí
Výroba biologického léčiva
Tkáňové kultury vyšších organismů
- cca v 60 % rekombinantních proteinů
pozitiva:
stejný způsob modifikace jako u lidí
široká paleta produktů
odpadají etické/technické problémy (izolace, zvířecí
buňky, nedostatek materiálu)
negativa: vyšší riziko kontaminace (bohatší medium,
pomalejší růst
dražší, náročnější kultivace
Výroba biologického léčiva
Tkáňové kultury vyšších organismů
primární kultury (nelze pasážovat) / buněčné linie (nádorové)
většinou adherentní linie – uvolnění trypsinem
Medium: ionty, glukóza, vitaminy, nukleotidy, lipidy, telecí
sérum (zdroj růstových faktorů + hormonů- PDGF, EGF, FGF…)
kontrola pH, morfologie, …
Vektory (detaily předmětem utajení): plazmidy, virové plazmidy
(retroviry), polykationty (DEAM dextran)
Součástí transfekované DNA jsou úseky DNA zvyšující produkci
(v jednotkách g produktu /L media)
Selekce (principy podobné jako u S. Cerev.)
Výroba biologického léčiva
Tkáňové kultury vyšších organismů
CHO – chinese hamster ovary
NS0, Sp2/0-Ag14 – myší plazmocytom bb. (leukocyty) –
auxotrofní pro L-glutamin
BHK 21 (baby hamster kidney fibroblasts– křeček syrský)
Výroba biologického léčiva
Tkáňové kultury vyšších organismů
produkce tzv. hybridomů
Sobotková M, Bartůňková J. Remedia 2008, 18 (5), 356-364
Výroba biologického léčiva
Transgenní rostliny
„jedlé vakcíny“ – produkce imunogenního proteinu (podobně jako
p.o. polio vakcína)
kultivace rostlinné tkáňové kultury na agaru
transfekce pomocí Agrobacterium (+ rekombinantní plazmid)
selekce, pěstování, výsadba
tabák (N. tabacum), Huseníček rolní (Arabidopsis thalliana)
PRX-112 – 06/2014 – 1. pacient léčený p.o. rekombinantním
proteinem z rostliny (Protalix Biotherapeutics)
deficit - glucocerebrosidáza (GCD)
„…active recombinant proteins systemically through oral administration of plant cells
expressing biotherapeutic proteins...“
Výroba biologického léčiva
Transgenní rostliny
„jedlé vakcíny“ – produkce imunogenního proteinu (podobně
jako polio vakcína)
kultivace rostlinné tkáňové kultury na agaru
transfekce pomocí Agrobacterium (+ rekombinantní plazmid)
selekce, pěstování, výsadba
tabák (N. tabacum), Huseníček rolní (Arabidopsis thalliana)
PRX-112 – 06/2014 – 1. pacient léčený p.o. rekombinantním
proteinem z rostliny (Protalix Biotherapeutics)
„…active recombinant proteins systemically through oral
administration of plant cells expressing biotherapeutic proteins...“
taliglucerase alfa
Vakcína Zmapp- ebola- N. tabacum, pasivní imunizace
Výroba biologického léčiva
3 generace biologických léčiv
1) „kopie“ lidských proteinů
2) modifikované proteiny (záměna AMK, glykosylace, PEGylace)
- výhodnější farmakokinetika, farmakodynamika
- např. glargin, PEG-IFN
3) de-novo designované proteiny/MAB
Konkomitanty z výroby
• Mikroorganismy – antigenní struktury,
pyrogenita, sepse
• Viry
• DNA - ?důsledky?
• Vlastní produkt v nesprávné 3D struktuře
• Kontaminující proteiny
– antigenita
– stabilita (proteázy)
– bezpečnost (růstové faktory, hormony, toxiny)
Purifikace- gelová afinitní/permeační chromatografie,
Konkomitanty z výroby
Purifikace- gelová afinitní/permeační chromatografie
Čistota cca 98-99 %
Ověřování biologické aktivity každé šarže !
- biochemické metody, na buněčných liniích
nebo i na zvířatech (např. Epoetin)
= časová náročnost, cena, přesnost
Riziko funkčního poškození biol.
léčiva
• Denaturace
• Srážení
• Deaminace
• Nesprávné párování SH skupin (=nesprávná 3D)
• Oligomerace, agregace, kovalentní vazby
• Hydrolýza
• Izomerizace
• Racemizace
• Vznik imidů
• Oxidace
Řada stabilizátorů
•kryoprezervace
•chelatace kovů
•kontrola pH, osmolarity,
posílení hydrofobních
vazeb
Náklady na léčbu
• Biologická léčba je dražší než léčba „klasickými“ léčivy
• Důvody
- výrazně vyšší náklady na vývoj
- náročnější a složitější testování
- povaha přípravků a vyšší náklady po uvedení na trh
- vyšší náklady na výrobu, skladování, transport, kratší expirace
důsledek- nižší počty léčených pacientů (až o 2 řády!!!)
přesto nákladově výhodná a v mnoha případech dokáže finance
ušetřit, v rovině přímých i nepřímých nákladů:
– přímé náklady: zkrácení hospitalizace, snížení počtu chirurgických výkonů,
snížení nákladů na následnou léčbu,...
– nepřímé náklady: zrychlení návratu pacienta do pracovního procesu,
snížení nákladů na pracovní neschopnost, snížení nákladů v oblasti sociální
podpory a příspěvků na péči, snížení nákladů na neformální a
ošetřovatelskou péči,...
Klinické využití biologických léčiv
(vybrané příklady)
Krevní deriváty
Koncentráty koag. faktorů
fa. VIIIc (2332 AMK, glykoprotein), CHO buňky
- hemofilie A, T1/2 = 8 hodin
fa. IXc CHO buňky
- hemofilie B
fa. VIIa
- krvácivé příhody pacientů s hemofilií
A/B, s inhibitory fa. VIII a IX
Krevní deriváty
protein C – Inhibitor koagulace, septické trombofilie
romiplostim – mimetikum trombopoetinových
receptorů (I: trombopenické krvácení)
hirudin - antikoagulační účinek, brání přeměně
fibrinogenu na fibrin, i aktivace fa. V, VIII, XIII
abciximab – MAB proti destičkovým
integrinům GPIIb/IIIa
- zároveň i. trombinu
altepláza – tPA – trombolýza fibrinové sraženiny
retepláza, tenektepláza,
Krevní deriváty
Epoetin α/β, darbepoetin α; I: anemie při
ledvinné nedostatečnosti, anemie po
chemoterapii (mimo hematolog. malignity)
G-CSF – filgrastim, monograstim,
molgramostim - granulocyte macrophage
colony-stimulating factor
Rekombinantní hormony
Inzulin - 1. biotechnologické léčivo (1982)
- S. cerevisieae, E. coli
- modifikované inzuliny (aspart, glulisin, detemir,
glargin)
Glukagon - peptid, 29 AMK, E. coli i S. cerevisieae
GH - 191 AMK, 2x S-S můstky
- před rekombinantním byl získáván izolací z hypofzy
zemřelých
- I: Turnerův sy. (karyotyp 45, XO)
- 1977 (Nutropin, P. Seeburg, Genentech, UCSF)
IGF –poruchy růstu
Rekombinantní hormony
Parathormon – 115 AMK
- teriparatid (Forsteo®)
Kalcitonin - původně izolován z lososů
Gonadotropiny – pro IVF (R.G: Edwards, Nobel. cena 2010)
FSH – folitropin α (CHO bb) - hyperovulace
LH – zrání vajíčka, společně s FSH
hCG – (CHO cells) – zrání folikulů, podpora ovulace vajíčka
(jednorázově)
Biologická léčba autoimunitních chorob
1. Revmatická onemocnění
2. Psoriáza
3. Nespecifické střevní záněty
4. Astma bronchiale
5. Roztroušená skleróza
6. Oftalmologie
1. Biologická léčba revmatických
onemocnění
Revmatoidní artritida, juvenilní idiopatická artritida,
psoriatická artritida, ankylozující spondylartritida
Včasný zásah brání nevratným změnám; někteří pacienti
v trvalé remisi i po ukončení léčby !
Biologická léčba revmatických onemocnění
Anti-TNF léčiva
Infliximab – chimerická MAB, IgG, 75 % lidské, 25 %
myší protilátky
s vysokou afinitou se váže na lidský TNFα
vznik stálých komplexů, vážou komplement
indukce apoptózy a lýzy buněk produkujících TNFα,
rozpad granulomů
Biologická léčba revmatických onemocnění
Anti-TNF léčiva
Adalimumab
Golimumab
– plně humánní MAB proti TNFα
- mechanismus stejný jako infliximab
Biologická léčba revmatických onemocnění AntiTNF
léčiva
Certolizumab – humanizovaný Fab fragment protilátky
proti TNFα, konjugovaný s PEG
Biologická léčba revmatických onemocnění AntiTNF
léčiva
Etanercept – váže TNFα
= solubilní dimerický fůzní protein– extracelulární
doména receptoru pro TNFα a Fc řetězec lidského IgG1
MÚ: kompetitivní inhibice TNFα, oslabení TNFβ
Neváže komplement ale vede k rozpadu granulomů
Biologická léčba revmatických onemocnění AntiTNF
léčiva
Anakinra – antagonista receptoru pro IL1 („IL-1 RA“)
slabší účinek než u anti TNF léčiv
Rituximab - váže se na transmembránový antigen CD20, (na
pre-B a zralých B-lymfocytech).
exprimován > 95% všech nehodgkinských lymfomů
původem z B buněk.
v kombinaci s MTX, cyklofosfamidem
Nežádoucí účinky anti-TNF látek
Oportunní infekce
vyšší riziko u
kombinace imunosupresivních léčiv
(při 2-kombinaci až 14x !)
malnutrice
věk > 50 let
mykobakterie, listerie, mykózy, virózy
Nežádoucí účinky anti-TNF látek
Paradoxní autoimunitní reakce
anti-idiotypové protilátky (navíc znemožní vazbu
protilátky na TNFα)
TBC –manifestace latentní formy
Pozdní kancerogenita – lymfoproliferativní onemocnění
(2-3x oproti zdravé populaci), nekonzistentní data
Ostatní – specifické NÚ u konkrétních látek
Biologická léčba revmatických onemocnění
Abatacept – rekombinantní fůzní protein z
extracelulárního CTLA4 (Cytotoxic T-lymfocyte-assoc.
Antigen 4); kompetitivně se váže na CD80, čímž brání
proliferaci T lymfocytů
- u dětí, nekombinovat s anti TNF léčbou (infekční
komplikace)
Tocilizumab – humanizovaná MAB proti IL6
obvyklé NÚ (infekce) + vzestup lipidů (CHOL, LDL, TAG)
2. Biologická léčba psoriázy
2. Biologická léčba psoriázy
Etanercept – viz výše
- jediné biolog. LČ psoriázy pro děti 8-18 let
Infliximab/golimumab – viz výše
- s.c. 0., 2., 6. týden, dále po 8 týdnech
Ustekinumab – plně humánní MAB IgG1 proti IL-12/23
(významné v patogenezi psoriázy)
inhibice cytokinové kaskády
s.c. v 0., 4. týdnu, dále po 12 týdnech
NÚ: nazofaryngitida, cefalgie, , artralgie, lokální dráždění
v místě podání
3. Biologická léčba idiopatických střevních
zánětů
nespecifické střevní záněty
Crohnova nemoc
ulcerozní kolitida
1. volba: Anti TNF léčiva (viz výše)
infliximab
adalimumab
certolizumab
3. Biologická léčba idiopatických střevních
zánětů
Natalizumab – humanizovaná MABIgG4 proti α integrinu
(na povrchu leukocytů, zajišťuje migraci
přes stěnu kapiláry)
záchranná terapie u CN (jen v USA, u v ČR registrován
pro RS)
Vedolizumab - humanizovaná MAB IgG1 proti α4β1
integrinu (na povrchu aktivovaných leukocytů,
zajišťuje adhezi k endotelu a průnik z cirkulace
do GIT )
4. Biologická léčba astma bronchiale
– doplňková léčba pac. se závažnějším onemocněním,
neodpovídající na obvyklou léčbu
Omalizumab – humanizovaná protilátka vychytává IgE , s.c.
– NU: malignity?, parazitózy..málo dat
Mepolizumab - protilátka proti IL5
Inflixima/golimumab/etanercept – anti TNFα
Off label, klinický přínos nejasný
NU: infekce, malignity, lymfoproliferace
4. Biologická léčba astma bronchiale
Další „problematická“ léčiva
keliximab – MAB proti CD4, menší studie prokázala efekt na plicní
parametry (PEF); studie byly zastaveny z důvodu obav ohledně
snížení počtu CD4-buněk
pitrakinra - inhibuje vazbu IL-4 a IL-13 na IL-4Rα
může působit preventivně proti zhoršeni FEV1 po expozici
alergenu; testována in u AE ; je nutná větší studie
daclizumab - váže CD25, inhibuje vazbu IL-2 na receptor;
může snižovat aktivaci T-buněk, zlepšuje FEV1, v jedné studii
zmírnil příznaky; 3 pacienti měli závažné nežádoucí reakce
5. Biologická léčba roztroušené sklerózy
• Demyelinizační onemocnění
• Mezi 20.–40. rokem života, častěji ženy
• Většinou začíná 1. klinickou událostí (clinically isolated
syndrome,CIS) zahrnuje zrakové, senzitivní nebo motorické
příznaky
Relaps-remitentní forma
Progresivní forma
• Neléčená po 10–20 letech do sekundární progrese - ↑neurologické
invalidity, u cca 50 % po 15 letech postižení fyzických i kognitivních funkcí s
eznačným socioekon. dopadem
• Nákladovost invalidizovaných je 3x vyšší než u biol. léčby
5. Biologická léčba roztroušené sklerózy
Útok imunitního systému proti vlastní tkání CNS
ložiska zánětu, v nichž dochází k:
• rozpadu myelinu
• k ničení nervových vláken
Biologická léčba roztroušené sklerózy
• Demyenilizační onemocnění
• Mezi 20.–40. rokem života, častěji ženy
• Většinou začíná 1. klinickou událostí (clinically isolated
syndrome,CIS) zahrnuje zrakové, senzitivní nebo motorické
příznaky
Relaps-remitentní forma
Progresivní forma
• Neléčená po 10–20 letech do sekundární progrese - ↑neurologické
invalidity, u cca 50 % po 15 letech postižení fyzických i kognitivních funkcí s
eznačným socioekon. dopadem
• Nákladovost invalidizovaných je 3x vyšší než u biol. léčby
5. Biologická léčba roztroušené sklerózy
5. Biologická léčba roztroušené sklerózy
Terapie -vývoj:
60. léta 20. st.: ACTH, kortikosteroidy
70.-80. léta: azathioprin, cyklofosfamid
1993 –IFN β
1996 –glatiramer acetát
2002 –mitoxantron
2006 –natalizumab
2010 - fingolimod
Biologická léčba roztroušené sklerózy
IFN beta - MÚ- prostřednictvím receptorů – fosforylace kináz,
změny množství a lokalizace signálních molekul (MHC I),
neopterinu, β2 mikroglobulinu
předpokládá se imunosupresivní účinek
• IFN: cytokiny s antivirovou, antiproliferativní a
imunomodulační aktivitou.
• IFN α+β = „interferony typu I“, γ „typ II“
• částečně se překrývající, avšak jasně odlišitelné biologické
aktivity.
• IFN β-1a = glykosylovaný protein; exprese v CHO bb.
• IFN β-1b = výměna 1 AMK (zábrana S-S můstků), exprese v E.
coli.
5. Biologická léčba roztroušené sklerózy
Natalizumab - MAB, váže se na α4β1-integriny lymfocytů, kt. jim
umožňují vstup do CNS (vážou se pomocí něj na adhezivní
molekuly endotelu před prostupem cévní stěnou)
Působí preventivně na relapsy i redukuje symptomy
probíhajících relapsů
NÚ: závažné oportunní infekce, vzácné (1:1000) progresivní
multifokální leukoencefalopatie
i.v. v intervalu 4 týdnů
5. Biologická léčba roztroušené sklerózy
Glatiramer acetát– směsí syntetických polypeptidů
odvozených ze 4 AMK (GLU, ALA, TYR, LYS)
- peptidový analog myelinového bazického proteinu -
tlumí zánět a současně má i vlastnosti
neuroprotektivní.
ovlivňuje lymfocytární populace v cirkulaci
mechanismem indukce imunoregulačních Th2
lymfocytů
5. Biologická léčba roztroušené sklerózy
Anti-CD20 MAB (CD 20 lymfocyty)
rituximab
ocrelizumab
ofatumumab
alemtuzumab
Anti CD 25 MAB
daclizumab –MAB proti CD25, kt. je α podjednotkou IL-2 autoagresivních
Lymfocytů
pro těžké ataky RS
6. Biologická léčba virových hepatitid
IFNα, IFNβ –chronická infekce HBV, HCV
Antivirotika - tenofovir, entecavir, adefovir, lamivudin
IFNα – „konvenční“ se dnes téměř nepoužívá
CIFN – konsenzuální IFN – prim. struktura dle nejčastěji se
vyskytujících AMK v sekvenci všech známých IFN
PEGylované – PolyEthylenGlykol – polymerní
etylendioxid – prodlužuje poločas (7-10x), zvyšuje
plazmatické koncentrace, rychlost vstřebání nemění
– ochrana proti proteázám
6 Biologická léčba virových hepatitid
PEG-IFNα2a – větvený monomethoxyPEG + IFN α2a
PEGylované – PolyEthylenGlykol – polymerní
etylendioxid – prodlužuje poločas (cca až 100x) – o
PEG-IFNα2b – lineární PEG + IFNα2b
Albumin-IFNα2b - rekombinantní protein, fůze obou
genů; účinnost, NÚ podobné předchozím,
aplikace 1x za 14 dní (delší poločas albuminu), vyšší
cena
Biologická léčba virových hepatitid
Obecné NÚ IFN
Časté - flu-like sy., trvalý únavový sy.
- myelosuprese
- dystymie, deprese, nechutenství
- pokles hmotnosti, průjem
Vzácné - zánět v místě podání
- psychotické poruchy, suicidální tendence
- poruchy sex. Fcí
- akutní srdeční selhání
- interstciální nefritida
Využití cílené terapie v oftalmologii
• Indikace: věkem podmíněná makulární degenerace
(VPMD), oční choroby na podkladě neovaskularizace
(diabetická retinopatie, neovaskulární glaukom,
diabetický makulární edém,…)
• neovaskularizace=komplexní proces →vznikají nové cévy
z existujících cévních svazků
• neřízená neovaskularizace →nevratné poškození až
slepota
• Patogeneze: novotvořené cévy se vytvářejí ze sítnicových
cév a způsobují nitrooční krvácení →přestavba sklivce
→až odchlípení sítnice
Vlhká VPMD (10% z
nemocných) → nové cévy
prorůstají do prostoru mezi
pigmentovým epitelem sítnice
a čípky nebo tyčinky, krvácení
do sítnice, otok a zjizvení v
oblasti makuly.
Suchá VPMD (90% z
nemocných) → postupná
ztráta centrální zrakové
ostrosti, periferní vidění je
zachováno.
VPMD
-v rozvinutých zemích hlavní příčinou ztráty zraku u starších osob
Využití cílené terapie v oftalmologii
• využívají se především látky s antiangiogenním účinkem
(tzn. blokují novotvorbu cév)
• největší význam pro proces angiogeneze má
VEGF=vaskulární endotelový růstový faktor
– důležité fyziologické funkce
– nachází na výstelce krevních a lymfatických cév v těle
– v oku nezbytný pro trofiku choriokapilaris
– reguluje vaskulární proliferaci a permeabilitu
– několik typů (A-E)
– účinek zprostředkován přes tyrozinkinázové receptory
• účinné látky:
– monoklonální protilátky (bevacizumab, ranibizumab)
– small drugs (pegaptanib, vortepofin)
– aflibercept= fúzní protein
Aplikace cílené terapie v oftalmologii
• intravitreální aplikace
• terapie trvá většinou rok a více
• výhody: méně nežádoucích
systémových účinku léčiv
• nevýhody: zanesení
intraokulární infekce, atrofie
pigmentového listu sítnice ,
hemoftalmus,…
Cílená terapie v oftalmologii
• bevacizumab
– byl vyvinut pro léčbu kolorektální karcinomu
– u indikace VPMD se používá off-label
– MÚ: monoklonální protilátka proti VEGF (váže se VEGF1 i
VEGF2, blokuje interakci s rp.)
– NÚ: akcelerace hypertenze, proteinurie, tromboembolické
příhody, špatné hojení ran,…
• ranibizumab
– indikace: VPMD, CNV (chorioidální neovaskularizace…
– MÚ: fragment monoklonální protilátky proti VEGF-A
– krátký plazmatický poločas
– aplikace 1x měsíčně do doby kdy je pacientova zraková
ostrost stabilní (3 po sobě jdoucí měsíční vyhodnocení).
Cílená terapie
• pegaptanib
– syntetický oligonukleotid
– indikace vlhká VPMD
– MÚ: váže se na receptor VEGF-A165
• verteporfin
– monokyselina benzoporfyrinového derivátu
– jako jediný se podává systémově infúzí
– vždy ve spojení s fotodynamickou léčbou
• aflibercept
– MÚ: rekombinantní fúzní protein; falešný receptor
váže VEGF-A a PlGf
BIOSIMILARS
BIOSIMILARS
“kopie” biotechnologických léčiv
• vyráběna po vypršení patentové ochrany na originalní
biotechnologická léčiva
• v USA se pro stejnou skupinu používá termín Follow-onbiologics,
zkráceně FOBs.
• standardni postup pro registraci generických léčiv s
definovanou strukturou (tj. bioekvivalenční studie) je
nepoužitelný
BIOSIMILARS
• Biosimilars jsou léčiva podobná, nikoliv shodná
s původním biologickým lékem.
• Biosimilars není automaticky terapeuticky
zaměnitelné s originálním biologickým lékem.
• malá změna procesu u biosimilars může
způsobit, že vznikne zcela jiný lék.
• Biosimilars procházejí před vstupem na trh
kratším nebo zjednodušeným klinickým
hodnocením, přesto nepoměrně složitějším než
je tomu u generik
BIOSIMILARS
• Po absolvování tzv. centralizované procedury (povinná
pro registraci léčivých přípravků vyrobených špičkovou
technologií, zvláště biotechnolog. léčiva)
• Srovnávána účinnost a kvalita ve studiích podobných
těm, co jsou vyžadovány u orig. refer. přípravku
• zakotveno v evropských směrnicích
• posouzení, zda byl přípravek hodnocen ve stejné lékové
formě, síle, se stejnou cestou podání jako u refer.
přípravku a zda se používal ve stejné idikaci
• Např. pro růstový hormon: 12-měs. srovnávací studie
účinnosti + bezpečnosti v rámci KHL III
• Cena je cca 10x vyšší než u generických léčiv
Biologická léčiva v širším kontextu
• Genová terapie
• Anti-sense terapie
• Imunizace vakcínami
Biologická léčiva v širším kontextu
Genová terapie
• Vpravení genové sekvence do cílové tkáně
vhodným vektorem
• přístup léčby nebo prevence genově
podmíněných nemocí změnou exprese
genů člověka
Genová terapie - vektory
• biologickými vektory virálního původu
– nejefektivnější způsob terapie
– retroviry, lentiviry, adenoviry
• injekce čisté DNA přímo do nádoru injekční
stříkačkou
• genetické dělo DNA obalující zlaté partikule a
vstřelené do epidermis – silné heliové dělo
• lipofekce DNA obalená do lipozomů a dodána do
tkáně
• intravaskulárně, intratracheálně, perorálně
Genová terapie - rizika
• Nežádoucí imunitní odpověď
• Infekce vektorem, aktivace přírodního viru
• Genetické ovlivnění pohlavních buněk
• Riziko malignity- aktivace protoonkogenů,
- suprese regulačních genů
Biologická léčiva v širším kontextu
Anti-sense terapie
• Vpravení oligonuleotidů, komplementární k
iniciačnímu kodonu/promotoru na DNA a tak
blokovat důsledky působení proteinů, které se
netranskribují
Olimersen - -snížení exprese Bcl-2
(overexprimován u řady nádorových
onemocnění) – stáhnuta registrace
Antisense a genová terapie v praxi
Fomivirsen - antisense sekvence k mRNA lidského CMV
- oční aplikace u pac. HIV+ pro snížení CMV infekcí
Pegaptanib - oligonukleotid vázající se na protein VEGF –
pro léčbu vlhké formy VPMD
Gencidin – adenovir nesoucí gen pro p53,
- od r. 2004 registrován v Číně
Glybera – (alipogen tiparvovek) 3 × 1012 genomových
kopií lidské lipoproteinové lipázy ve virovém vektoru
(adeno-associated virus serotype 1 (AAV1); k léčbě
hyperlipoproteinémie I
Děkuji za pozornost
Použité zdroje
• Fusek M., Vítek L., Blahoš J., Hajdúch M., Ruml T. a kol. Biologická léčiva,
Grada 2012
• Pavelka a kol. Biologická léčba zánětlivých autoimunitních onemocnění v
revmatologii, gastroenterologii a dermatologii, Grada 2014
• Martin Vališ: Biologická léčiva, LF UK, Hradec Králové
• K. Midthun: Biologicals. A Vision for the Future of Clinical Investigators in
Evaluations of New Biological Products; FDA
• Sobotková M, Bartůňková J. Remedia 2008, 18 (5), 356-364
• Vetchý D., Vetchá M. Biosimilars – podobné biologické léčivé přípravky,
Remedia 20(1) 2010
• Havrdová E. Současné možnosti léčby RS. Remedia 20 (2) 2010.
• Štrbová P., Dostálová E., Mikšová Z. Compliance pacientů léčených
interferony pro sclerosis multiplex. Klin Farmakol Farm 2013; 27(3–4):
106–109
• Havrdová E. Neurologie pro praxi 2011; 12(3) 170-174
• EMA
• SUKL