KLINICKÁ MIKROBIOLOGIE- SHRNUTÍ M.Hanslianová OKM FN Brno Logo Klinická mikrobiologie ¡Zajišťuje diagnostiku infekčních onemocnění vyvolaných baktériemi, viry, parazity a mykotickými agens ¡Stanovuje citlivost/rezistenci mikrobiálních agens k antimikrobiálním látkám ¡Ve spolupráci s klinickými lékaři poskytuje konzultace mikrobiologického nálezu a antimikrobiální terapie ¡Správný výsledek mikrobiologického vyšetření začíná správným odběrem biologického materiálu a jeho správným transportem do mikrobiologické laboratoře ¡Výtěr z krku vAMIES ¡Vyšetření na toxin Clostridium difficile vKusová (tekutá) stolice ¡PCR vyšetření vSuchý tampon ¡Vyšetření biologického materiálu ¡Stanovení pravděpodobného původce infekce ¡Stanovení citlivosti k antibiotikům Vyšetření biologického materiálu ¡Mikroskopie ¡Kultivace ¡Průkaz antigenů ¡Průkaz metabolitů Helicobacter pylorii (ureáza) ¡Průkaz nukleových kyselin (PCR) ¡Průkaz protilátek (nepřímý průkaz) Mikroskopie vNativní preparát ¡Trichomonas vaginalis vBarvený preparát ¡Barvení dle Grama ¡Barvení dle Giemsy ¡Barvení dle Ziehl- Nielsena ¡Barvení spor ¡Barvení pouzder ¡Fluorescenční barvení ¡ ¡ Barvení podle Grama ¡Hans Christian Joachim Gram, 1884 ¡ ¡Dělí bakterie do dvou základních skupin ¡ lGrampozitivní G +, modrofialové lGramnegativní G -, růžovočervené l Dánský bakteriolog Barvení podle Grama-Gramnegativní P1010132 Barvení podle Grama- význam ¡Diagnostické barvení – základ klasifikace a taxonomie bakterií ¡ ¡Možnost okamžité a racionální antibiotické terapie Mikroskopie hemokultur, sputa Fluorescenční barvení ¡Pomocí fluoreskujícího barviva ¡Imunofluorescence lNa hledaný antigen se naváže protilátka označená fluoreskujícím barvivem ¡Pozorování pomocí fluorescenčního mikroskopu Fluorescenční barvení ¡ fapos Kultivační průkaz ¡Základní mikrobiologický postup ¡Cílem je získat mikroba z klinického materiálu v čisté kultuře ¡Identifikovat ho ¡Určit citlivost k antibiotikům ¡ ¡Kultivační půdy (tuhé, tekuté, diagnostické, selektivní, selektivně diagnostické…) ¡Očkování biologického materiálu ¡Diagnostická antibiotika ¡Kalibrované kličky Kultivační půdy vTekuté:masopeptonový bujon vTuhé: ¡Krevní agar ¡Čokoládový agar ¡Levinthalův agar ¡Mc Conkey agar (Endova půda) ¡Sabouraudův agar ¡Desoxycholát – citrátový agar ¡Chromagary ¡ ¡ Podmínky kultivace ¡Dostatečná vlhkost prostředí ¡Optimální teplota - 37° C (4° C, 40° C) ¡Optimální pH půdy – 7,2 – 7,4 ¡Dostatek vhodných živin ¡Vhodné plynné prostředí (aerobní, anaerobní, mikoraerofilní kultivace) Anaerostat P1010162 Identifikace bakterií ¡Podle morfologie ¡Podle růstových vlastností ¡Hmotnostní spektrometrie (MALDI) ¡Podle biochemických vlastností lSelektivní půdy lKomerční diagnostické soupravy ¡Podle antigenní struktury lLatexová aglutinace l ¡ Úskalí dokonalé identifikace ¡Stafylokoky koaguláza negativní a jejich různá jména ¡Jiné- Finegoldia magna Biochemická identifikace bakterií P1010151 Průkaz antigenů ¡Latexová aglutinace ¡Rychlá vyšetřovací metoda l ¡Nález primárního patogena- většinou jednoznačná situace (Neisseria gonorrhoeae) ¡ ¡Nález oportunního patogena- nutná komunikace s klinikem!! ¡ častější situace ¡Stanovení citlivosti agens k antibiotikům (pokud to lze) ¡Disková difúzní metoda ¡Stanovení hodnot MIC antibiotika vůči danému mikroorganismu ¡Semikvantitativní metody (mykoplazmata, ureoplazmata) přelévaný test destička MIC 2 Průkaz nukleových kyselin (PCR) ¡Polymerázová řetězová reakce (Polymerase Chain Reaction) ¡Možnost průkazu mikroba i při kultivační negativitě (meningitidy, infekce TEP) ¡Riziko kontaminace Průkaz protilátek ¡Průkaz odezvy makroorganismu na infekční agens ¡ELISA, komplementfixační reakce, automaty ¡Obtížně kultivovatelné baktérie (chlamydie, borélie) ¡mykologie ¡ ¡Klinická mikrobiologie- poskytuje servis vyšetření klinickým lékařům v úzké spolupráci s nimi!! ¡ ¡Vzájemná komunikace!! ¡ ¡Konzultace mikrobiologického nálezu ¡Konzultace antibiotické terapie ¡ Výsledek obrázku pro pacient Kasuistika ¡ ¡Pacient VCH, 1960 ¡Přijatý v březnu 2015 pro bolesti zad, crp 275, leukocytóza, febrílie ¡Paraplegik po autonehodě, kovový materiál na rozhraní Th a L páteře ¡Bolesti zad: ØRanná infekce ØSpondylodiscitida ØInfekce ledvin ØInfekce v dutině břišní (pankreas) ØInfekce v malé pánvi (gynekologické infekce) Kasuistika ¡Paraplegik po autonehodě, kovový materiál na rozhraní Th a L páteře ¡ ¡Odběr biologického materiálu: ØHemokultivace ØMoč Ø BactAlert 1 Kasuistika ¡ ¡Diagnostikována spondylodiscitida v oblasti Th páteře ¡Hemokultura? ¡Empirická antibiotická terapie? ¡Původce? ¡ •Staphylococcus aureus představuje nejčastější mikrobiální agens vyvolávající spondylodiscitidu. Lze jej předpokládat zejména u spondylodiscitid anamnesticky spojených se stafylokokovou infekční endokarditidou, u pacientů s předchozí katétrovou infekcí krevního řečiště, nebo infekcí kůže a měkkých tkání v anamnéze. Rizikovou skupinu pro spondylodiscitidu vyvolanou Staphylococcus aureus představují také nitrožilní narkomani. •U pacientů s touto předpokládanou etiologií je pro empirickou terapii doporučený oxacilin v kombinaci s gentamicinem. ¡Anamnéza: ¡ ØInfekční fokus (kariézní chrup, abscesy, IE…) ØPředchozí infekce (infekce spojené se zavedením CVK, uroinfekce, jiné infekce spojené a bakterémií…) ¡Anamnéza: Ø11-12/2014 hospitalizován pro absces v ledvině ØNefrektomie ØRevize pro krvácení do lůžka po ledvině Ø11/2014 pozitivní hemokultura s nálezem Klebsiella pneumoniae s ESBL produkcí Kasuistika ¡Vstupně nasazený potencovaný aminopenicilin (Augmentin) ¡Pro vysokou suspekci na klebsielovou etiologii spondylodiscitidy doporučena terapie meropenemem ¡Monoterapie- solitární ledvina s horší funkcí, kreatinin 370 umol/l, alergie na ciprofloxacin Kasuistika ¡Kultivace: půdy, inokulum, antibiotické disky ¡Atmosféra, doba kultivace ¡Hodnocení: identifikace mikroorganismu a stanovení citlivosti Kasuistika ¡Pozitivní hemokultura s nálezem Klebsiella pneumoniae s ESBL produkcí ¡Ponechána terapie meropenem + přidaný amikacin v redukovaných dávkách ¡Pokles hodnot crp i leu, stabilizace stavu Kasuistika ¡Délka terapie? ¡Perorální pokračování terapie? ¡Ertapenem? (OPAT- zatím ne v ČR) ¡P.o. tetracyklin? Kasuistika ¡Hospitalizace pokračuje….. 1582 Kasuistika ¡Opakovaná antibiotická konzultace ØPacient s crp opět 270, zhoršení stavu ØKlindamicin v terapii osteomyelitidy v kombinaci s amikacinem ØPo CDI (Clostridium difficile) ØKl.pneumoniae ESBL ze sputa ØMRSA z hrudních drénů ØPolyrezistentní Pseudomonas aeruginosa z moči Ø Kasuistika ¡Původce spondylodicitidy zřejmě ne S.aureus, tedy zbytečný klindamycin ¡Riziko clostridiové kolitidy ¡Amikacin není vhodný v monoterapii plicních infekcí ¡Amikacin není vhodný v monoterapii stafylokokových infekcí Kasuistika ¡Opět doporučený do terapie meropenem ¡Výhled pacienta? ¡ ¡Klinická mikrobiologie – spolupráce mikrobiologa s klinickým lékařem ¡Na konci/ na začátku každého mikrobiologického vyšetření je nemocný člověk Děkuji za pozornost confused