00207S4949322COINV10.0 ASTL Aspartátaminotransferáza - aktivovaná pyridoxalfosfátem Informace pro objednání cobas® Enzymy HÜ ICONTENT I Analyzátory, na kterých lze cobas c pack(y) použít 20764949 322 Aspartate Aminotransferase (500 testů) Systémové ID 07 6494 9 COBAS INTEGRA 400 plus 10759350190 Calibrator f.a.s. (12x3mL) Systémové ID 07 3718 6 10759350 360 Calibrator f.a.s. (12x3 mL, pro USA) Systémové ID 07 3718 6 12149435122 Precinorm U plus (10x3 mL) Systémové ID 07 7999 7 12149435160 Precinorm U plus (10x3 mL, pro USA) Systémové ID 07 7999 7 12149443122 Precipath U plus (10x3mL) Systémové ID 07 8000 6 12149443 160 Precipath U plus (10x3 mL, pro USA) Systémové ID 07 8000 6 05117003 190 PreciControl ClinChem Mult 1 (20 x 5 mL) Systémové ID 07 7469 3 05947626190 PreciControl ClinChem Mult 1 (4 x 5 mL) Systémové ID 07 7469 3 05947626160 PreciControl ClinChem Mult 1 (4 x 5 mL, pro USA) Systémové ID 07 7469 3 05117216190 PreciControl ClinChem Mult 2 (20 x 5 mL) Systémové ID 07 7470 7 05947774190 PreciControl ClinChem Mult 2 (4 x 5 mL) Systémové ID 07 7470 7 05947774160 PreciControl ClinChem Mult 2 (4 x 5 mL, pro USA) Systémové ID 07 7470 7 20764965 322 Pyridoxal Phosphate (10 x 10 mL) Systémové ID 07 6496 5 Česky Systémové informace Test ASTPL, test ID 0-594 Použití In vitro test pro kvantitativní měření katalytické aktivity AST (EC 2.6.1.1; L-aspartát: 2-oxoglutarát aminotransferáza) v lidském séru a plazmě na systémech COBAS INTEGRA. Tento metodický list popisuje aplikaci pro AST aktivovaný pyridoxalfosfátem (test ASTPL, 0-594). Aplikace pro AST bez pyridoxalfosfátu je popsaná v metodickém listu Aspartátaminotransferáza. Souhrn12 Enzym aspartátaminotransferázaje široce rozšířený v mnoha tkáních, především však jater, srdce, svalu a ledvin. Zvýšené hladiny v séru jsou důsledkem postižení těchto tkání při onemocnění. Hepatobiliární choroby, jako jsou cirhóza, metastázující karcinom a virová hepatitída, rovněž zvyšují hladiny AST v séru. Následkem infarktu myokardu se zvyšuje AST v séru a vrcholu dosahuje druhý den po nástupu. Známejšou2 izoenzymy AST, cytoplazmatickýa mitochondriální. Za běžných podmínek je v séru jen cytoplazmatický izoenzym, zatímco mitochondriální spolu s cytoplazmatickým izoenzymem jsou detekovatelné v séru pacientů s koronárním nebo hepatobiliálním onemocněním. Přidání pyridoxalfosfátu k metodě způsobuje zvýšení aktivity aminotransferáz. Aktivace je vyšší u AST, než u ALT. Aktivace pyridoxalfosfátem předchází falešnému snížení aktivity aminotransferázy ve vzorcích pacientů s nedostatkem endogenního pyridoxalfosfátu (deficit vitamínu B6). Princip testu Metoda dle Mezinárodní federace klinické chemie (IFCC), s pyridoxal-5'-fosfátem.3'4 AST ve vzorku katalyzuje přenos aminoskupiny mezi L-aspartátem a 2-oxoglutarátem za tvorby oxalacetátu a L-glutamátu. Oxalacetát poté reaguje s NADH v přítomnosti malátdehydrogenázy (MDH) a vytváří NAD+. Pyridoxalfosfát slouží jako koenzym při přenosu aminoskupiny v reakci. Zajišťuje úplnou aktivaci enzymů. Reagencie - pracovní roztoky R1 TRIS pufr: 264 mmol/L, pH 7.8 (37 °C); L-aspartát: 792 mmol/L; MDH (mikroorganismus): > 24 ukat/L; LDH (mikroorganismy): > 48 ukat/L; albumin (hovězí): 0.25 %; konzervans SR NADH: > 1.7 mmol/L; 2-oxoglutarát: 94 mmol/L; konzervans R1 je v pozici A a SR je v pozici B a C. Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v části 1 / Úvod této Příručky metod. Pro USA: Varování: Federální zákon omezuje prodej tohoto přístroje pouze lékařem nebo na jeho pokyn. Zacházení s reagenciemi Připravena k použití Uskladnenia stabilita Doba skladování při 2-8 °C Čtěte datum exspirace na štítku balení cobas c pack 12 týdnů L-Aspartát + 2-oxoglutarát Oxalacetát + NADH + H+ AST oxaloacetát + L-glutamát L-malát + NAD+ Rychlost oxidace NADH je přímo úměrná katalytické aktivitě AST. Stanovuje se měřením poklesu absorbance při 340 nm. Na palubě při použití při 10-15 °C Odběr vzorků a příprava Pro odběr a přípravu vzorků používejte pouze vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Pouze níže uvedené vzorky byly testované a jsou přijatelné. Sérum: Sérum odeberte použitím standardních vzorkovacích zkumavek. Plazma: Li-heparinizovaná nebo EDTA plazma. Nepoužívejte jiné antikoagulanty. Sérum bez hemolýzy je vhodným vzorkem. Uvedené druhy vzorků byly testované s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné v té době, tzn., že do testu nebyly zařazené všechny typy zkumavek všech výrobců. Systémy odběru vzorku různých výrobců mohou obsahovat různé materiály, které mohou mít v některých případech zásadní vliv na výsledky. Při zpracování vzorků v primárních zkumavkách (systémy odběru vzorků) dodržujte pokyny jejich výrobce. Vzorky obsahující precipitáty centrifugujte před provedením stanovení. Pro podrobnosti o možné interferenci čtěte část „Omezení a interference". Stabilita:5 4 dny při 20-25 °C 7 dní při 4-8 °C 3 měsíce při -20 °C 2019-03, V 10.0 Česky 1/3 ASTPL 00207S4949322COINV10.0 ASTL Aspartátaminotransferáza - aktivovaná pyridoxalfosfátem Požadavky na stabilitu vzorku byly výrobcem ustanoveny experimentálními údaji nebo na základě referenční literatury a pouze pro teploty/časové rámce uvedené v metodickém listu, Každá laboratoř je odpovědná za stanovení specifických kritérií stability pro svou laboratoř na základě dostupné literatury anebo údajů z vlastních studií, Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky", Potřebný materiál (ale nedodávaný se soupravou) Pyridoxal Phosphate, kat, č, 20764965322, systémové ID 07 6496 5 Roztok pyridoxalfosfátu je připraven k přímému použití a je umístěn do své předdefinované pozice ve stojánku, Jedna nádobka postačuje pro 500 testů a je stabilní na palubě 8 týdnu, Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro příslušný analyzátor, Pokyny ke stanovení specifické pro analyzátor vyhledejte v příslušném návodu k použití, Aplikace pro sérum a plazmu Definování testu co bas Způsob měření Způsob výpočtu abs, Způsob reakce Směr reakce Vlnové délky A/B Výpočet první/posl, Jednotka Absorbance Kinsearch R1-SD»S—SR Pokles 340/378 nm 71/96 U/L ASTPL se měří jako dlouhotrvající analytický test (trvání přibl, 17 minut), Pipetovací parametry Diluent (H20) R1 40 uL 29 uL Vzorek 11 uL 8uL Speciální diluent (SD) 18 uL SR 17 uL 9uL Celkový objem 132 uL Kalibrace Kalibrátor Calibrator f.a.s. Jako nulový kalibrátor použijte deion, vodu, Mód kalibrace Lineární regrese Opakování kalibrace Doporučuje se duplikát Kalibrační interval Každou šarži a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Kalibrační interval lze po přijatelné verifikaci kalibrace laboratoří prodloužit, Návaznost: Tato metoda byla standardizovaná podle originální formulace IFCC pomocí kalibrovaných pipet na manuálním fotometru, stanovením absolutních hodnot a specifické absorptivity substrátu, e,6 Kontrola kvality | Referenční rozmezí | Patologické rozmezí Kontrolní interval Pořadí kontrol Kontrola po kalibraci Precinorm U plus nebo PreciControl ClinChem Multi 1 Precipath U plus nebo PreciControl ClinChem Multi 2 Doporučuje se 24 hodin Určeno uživatelem Doporučena Enzymy Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání", Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál, Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků, Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích, Každá laboratoř by měla mít vypracovaná nápravná opatření pro případ, že hodnoty překročí definované meze, Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality, Výpočet Analyzátory COBAS INTEGRA automaticky vypočítají aktivitu analytu každého vzorku, Pro více informací čtěte, prosím, „Analýza údajů" v Online nápovědě, Převodní faktor: U/L x 0,0167 = ukat/L Omezení - interference Kritérium: Výtěžnost v rámci +10 % počáteční hodnoty, Sérum, plazma Ikterus:7 Bez významných interferencí do hodnoty I indexu 60 pro konjugovaný a nekonjugovaný bilirubin (přibližná koncentrace konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu: 1026 umol/L nebo 60 mg/dL). Hemolýza:7 Bez významných interferencí do hodnoty H indexu 25 (přibližná koncentrace hemoglobinu: 16 umol/L nebo 25 mg/dL). Lipémie (Intralipid):7 Bezvýznamných interferencí do hodnoty L indexu 150. Mezi L indexem (odpovídá zákalu) a koncentrací triglyceridů je slabá korelace, Lipemické vzorky mohou způsobit označení >Abs, Zvolte zacházení s naředěným vzorkem pro automatický rerun, Antikoagulanty: Citrát a fluorid inhibují enzymovou aktivitu, Léčiva: Při terapeutických koncentracích nebyla při použití běžného panelů léků zjištěná žádná interference,89 Výjimky: Dobesilát vápenatý a doxycyklin HCI způsobují umělé nízké hodnoty AST při testovaných hladinách léčiv, Hydroxokobalamin (Cyanokit) může způsobit falešně nízké výsledky, Fyziologické koncentrace sulfasalazinu nebo sulfapyridinu v plazmě mohou vést k nesprávným výsledkům, Ve vzácných případech může gamapatie, především u typu IgM (Waldenstromova makroglobulinémie), způsobit nespolehlivé výsledky,10 Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy, POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Při zpracovávání určitých kombinací testu na analyzátorech COBAS INTEGRA je použití speciálních mycích cyklů povinné, Pro další pokyny a pro nejnovější verzi seznamu Extra mycích cyklů čtěte, prosím, metodický list CLEAN, Tam, kde se to vyžaduje, musí být před vykazováním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení prenosu mezi vzorky (carry-over). Meze a rozmezí Měřící rozsah 2-700 U/L (0,03-11,7 ukat/L) Vzorky s vyššími koncentracemi stanovte použitím funkce rerun, Vzorky ředíme 1:10 pomocí funkce rerun, Výsledky ze vzorků naředěných funkcí rerun jsou automaticky vynásobené faktorem 10, Dolní meze měření Mez detekce testu: 2 U/L (0,03 ukat/L) Mez detekce představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly, Počítá se jako hodnota ležící 3 standardní odchylky od nulového vzorku (nulový vzorek + 3 SD, opakovatelnost, n = 30), Očekávané hodnoty podle IFCC/Standard Method 94 s aktivací pyridoxalfosfátem při 37 °C:11 Muži 10-50 U/L (0,17-0,83 ukat/L) Ženy 10-35 U/L (0,17-0,58 ukat/L) Konsenzuální hodnoty s aktivací pyridoxalfosfátem:12 Muži až do 50 U/L (0,83 ukat/L) Ženy až do 35 U/L (0,58 ukat/L) ASTPL 2/3 2019-03, V 10,0 Česky 0020764949322COINV10.0 ASTL Aspartátaminotransferáza - aktivovaná pyridoxalfosfátem Každá laboratoř by si měla prověřit převoditelnost očekávaných hodnot na svou populaci pacientů, a je-li to nutné, stanovit si vlastní referenční rozmezí, Specifické údaje o využití Reprezentativní údaje o využití pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže, Výsledky získané v různých laboratořích se mohou lišit, Preciznost Preciznost byla měřena použitím lidských vzorků a kontrol podle interního postupu s opakovatelností a mezilehlou precizností (2 alikvoty na sérii, 2 série denně, 20 dní), Byly získány následující výsledky, Hladina 1 Hladina 2 Průměr 48,3 U/L 162 U/L (0,807 ukat/L) (2,69 ukat/L) VK opakovatelnost 2,6 % 1,8% VK mezilehlá preciznost 2,9 % 2,0 % Porovnání metod Hodnoty AST pro vzorky lidského séra a plazmy, získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 700 použitím reagencie COBAS INTEGRA Aspartate Aminotransferase (ASTL) a pyridoxalfosfátu jako speciálního diluentu (y), byly porovnány s výsledky naměřenými komerčně dostupnými reagenciemi pro AST (s pyridoxalfosfátem) na analyzátoru COBAS INTEGRA (x) a systému klinické chemie alternativního výrobce (x), Vzorky byly měřeny v duplikátu, Počet (n) představuje všechny replikáty, Počet vzorků (n) Korel, koeficient (r) (r») Analyzátor COBASINTEGRA 232 0,999 0,998 Alternativní systém 212 0,999 0,997 Lin, regrese y = 1,056x-2,16 U/L y = 1.02x + 0,93 U/L Passing/Bablok13 y = 1,034x -1,04 U/L y = 1,016x + 1,05 U/L Aktivity vzorků byly v rozmezí 12,7 až 604 U/L (0,212 až 10,1 ukat/L), Odkazy 1 Nagy B, Muscle disease, In: Kaplan LA, Pesce AJ, eds, Clinical Chemistry, theory, analysis, and correlation, St, Louis: Mosby 1984;514, 2 Moss DW, Henderson AR, Kachmar JF, Enzymes, In: Tietz NW, ed, Fundamentals of Clinical Chemistry, 3rd ed, Philadelphia, PA: WB Saunders 1987;346-421, 3 Bergmeyer HU, Horder M, Rej R, Approved recommendation (1985) on I FCC methods for the measurement of catalytic concentration of enzymes, Part 2,1 FCC Method for aspartate aminotransferase, J Clin Chem Clin Biochem 1986;24:497-510, 4 ECCLS, Determination of the catalytic activity concentration in serum of L-aspartate aminotransferase (EC 2,6,1,1,ASAT), Klin Chem Mitt 1989;20:198-204, 5 Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations, WHO Publication WHO/DIL/LAB/99,1 Rev, 2: Jan 2002, 6 Schumann G, Bonora R, Ceriotti F, et al, IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 °C - Part 5, Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Aspartate Aminotransferase, Clin Chem Lab Med 2002;40(7):725-733, 7 Glick MR, Ryder KW, Jackson SA, Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation, Clin Chem 1986;32:470-475, 8 Breuer J, Report on the Symposium "Drug effects in Clinical Chemistry Methods", Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996;34:385-386, 9 Sonntag O, Scholer A, Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies, Ann Clin Biochem 2001 ;38:376-385, c o bas Enzymy 10 11 12 Bakker AJ, Mucke M, Gammopathy interference in clinical chemistry assays: mechanisms, detection and prevention, Clin Chem Lab Med 2007;45(9):1240-1243, Klauke R, Schmidt E, Lorentz K, Recommendations for carrying out standard ECCLS procedures (1988) for the catalytic concentrations of creatine kinase, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase and y-glutamyltransferase at 37 °C, Eur J Clin Chem Clin Biochem 1993;31:901-909, Thomas L, Můller M, Schumann G, et al, Consensus of DGKL and VDGH for interim reference intervals on enzymes in serum, J Lab Med 2005;29(5):301-308, 13 Bablok W, Passing H, Bender R, et al, A general regression procedure for method transformation, Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11)783-790, Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla, Oddělení tisíců se nepoužívá, Symboly Roche Diagnostics používá kromě symbolů a znaků uvedených v normě ISO 15223-1 následující znaky (pro USA: pro definici použitých symbolů navštivte stránku https://usdiagnostics.roche.com): ICONTENT I -> IGTINI Obsah soupravy Objem po rekonstituci nebo promíchání Globální číslo obchodní položky Doplnění, odstranění nebo změny textu jsou označeny pruhem podél textu. ©2019, Roche Diagnostics dRoche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com Distribuce v USA: Roche Diagnostics, Indianpolis, IN Zákaznická podpora v 1 -800-428-2336 ^Roche^ 2019-03, V 10.0 Česky 3/3 ASTPL