Katedra laboratorních metod                 Bakalářské studium – Laboratorní diagnostika ve
zdravotnictví

LF MU
        Klinická biochemie – cvičení




Praktické cvičení č.           datum:__________ jméno:______________________



Téma praktika:

Interference (hemolýza, chylozita, bilirubin )


Okruhy k nastudování a dotazy:

1)     Přečtěte si protokol a nastudujte si, jak vypadá hemolytické, chylózní a ikterické sérum.

2)     Co je to hemolyzát?

3)     Které lipidové částice nejčastěji způsobují chylozitu?


Přístroje a pomůcky:

Automatický biochemický analyzátor

Sérové vzorky (hemolytické, chylózní, ikterické)



Úkoly:

1)     Seznámit se s vizuální klasifikací hemolytických, chylózních a ikterických vzorků –

       např. slabá hemolýza

                hemolýza

                silná hemolýza


2)     Z většího počtu (200) vyberte a slovně ohodnoťte hemolytické, chylózní a ikterické vzorky



3)     Seznámení s jinými typy interference:

Léky – např. diuretika a kortikosteroidy zvyšují kreatinin, marihuana a vankomycin kreatinin
naopak

                     snižují

                     estrogeny – zvyšují Cu v séru



 Gamapatie  - ve vzácných případech při této diagnóze může být KM snížena, bilirubin zvýšen.

                      Monoklonální imunoglobuliny jsou u turbidimetrických metod pravidelně zvýšeny
– nelze

                      je správně stanovit jinak než elektroforeticky.


Interference vzniklá nedodržením preanalytických podmínek – zvýšené parametry po podávání Fe, T4,
infuzi, intenzivní fyzické aktivitě (CK).


4)     U vybraného vzorku změřte na biochemickém analyzátoru sérové indexy a zapište je:

                                 L:                H:                I:


5)     Dle následujícího postupu připravte ze dvou vzorků hemolyzát (H1 a H2):

1 ml nestážlivé krve zmrazit, rozmrazit a centrifugovat. Supernatant odpovídá hemolyzátu.

Zbytek krve zcentrifugujte a plazmu označte (P1 a P2).


6)     Připravte si dva vzorky séra. Z každého z nich odpipetujte dva jednomililitrové alikvoty.

Vzorek č.1: K jednomu alikvotu přidejte  20 ul plazmy P1, k druhému 20 ul hemolyzátu H1.

Vzorek č.2: K jednomu alikvotu přidejte  50 ul plazmy P2, k druhému 50 ul hemolyzátu H2.


Dobře promíchejte. V obou alikvotech z každého vzorku změřte na analyzátoru následující parametry:
K, LD, Bil přímý(D-Bil), AST

Výsledky zapište do tabulky a v závěru okomentujte.



                                         LD (ukat/l)             AST (ukat/l)          D-Bil
(umol/l)               K (mmol/l)

Vzorek č.1+ P1





Vzorek č.1+ H1





Vzorek č.2+ P2





Vzorek č.2+ H2








Závěr:








7)     Seznamte se s komentováním interference u vzorků pacientů v LIS, vložení komentáře si
prakticky vyzkoušejte









8)     Proveďte vyčeření lipemického séra (mléčně zkaleného) s využitím zkumavky Lipoclear dle
přiloženého návodu:


Pracovní postup:

1.     Zkumavku Lipoclear po vyjmutí z lednice necháme stát 5 min. při pokojové teplotě

2.     Do zkumavky napipetujeme 0,5 ml séra, dobře promícháme

3.     Necháme stát dalších 5 min. při pokojové teplotě

4.     Zcentrifugujeme na centrifuze 2 min.  při 10 000 ot.

5.     Opatrně odstraníme tukovou vrstvu, která se vytvořila na povrchu

6.     Všechny výsledky vynásobíme faktorem 1,2 ( jako kompenzace ředění originálního vzorku )



Vyčeřování se používá, obsahuje-li mléčně zkalené sérum některou z následujících metod:


                         Mg, Ca, IgG, CB, Krea


Vyčeřování se nepoužívá, ,je-li požadováno vyšetření Chol, TG, HDL-Chol, LDL-Chol, APO A1, APO

B, IgM, CRP, amoniak, alkohol, ionty a osmolalita.

V případě, kdy se jedná o kombinaci vyšetření z obou skupin, stanovuje se část vzorku z vyčeřeného

a část z nevyčeřeného séra.




7)   V původním i vyčeřeném vzorku stanovte na automatickém analyzátoru koncentraci MG, Ca, CB

      a kreatininu. Výsledky vložte do tabulky a v závěru porovnejte.


                                       Mg (mmol/l)             Ca (mmol/l)                   CB
(g/l)               Krea (umol/l)

Bez vyčeření





Po vyčeření x 1,2







Závěr: