,Praktické cvičení č. datum________________ jméno__________________ Téma praktika: Seznámit se dokumentací dle požadavků normy ISO 15 189 pro akreditaci zdravotnických laboratoří. Seznámení se systém interní a externí kontroly kvality ve zdravotnické laboratoři. Požadavky na validace/ verifikace analytických metod. Okruhy k nastudování a dotazy: 1) Seznamte se s protokolem a používanými pojmy 2) Co je to správná laboratorní práce (stručně) 3) K čemu slouží interní kontrola kvality 4) Zopakujte si vzorce pro výpočet bias a variačního koeficientu Přístroje a pomůcky: Vybraná dokumentace oddělení klinické biochemie Automatický biochemický analyzátor Úkoly: 1) Seznámit se s dokumentací podporující činnost akreditované laboratoře ( příručka kvality, směrnice, instrukce, pravidelné audity, záznamy, nápravná a preventivní opatření atd.) 2) Seznámit s dokumenty SLP – SOPV, SOPT , SOPL 3) Vypracujte stručný laboratorní postup (část SOPV) pro laktátdehydrogenasu tak, aby obsahoval princip metody, přípravu chemikálií, j, informace o ředění, kalibraci a kontrole, interferencích. 4) Seznámit se systémem interní a externí kontrolou kvality 5) Na automatickém biochemickém analyzátoru prohlédnout individuální a kumulované výsledky interní kontroly kvality (IKK) a nastavená Westgardova pravidla. Hlavním nástrojem detekce náhodných a systematických chyb je aplikace Westgardových pravidel v laboratorních programech vnitřní kontroly kvality. Tento postup je též založen na statistickém sledování kontrolních měření za použití průměru měření jako střední hodnoty určující centrální – nulovou linii regulačního diagramu (S-grafu). Rozhodovací pravidla pro detekci chyby jsou dána parametrem měření Xz.s, který určuje kontrolní linii a to, kolika násobkům (z) směrodatné odchylky (s) a kolikrát se může kontrolní měření přiblížit či je překročit. Pravidlo 1[2s] je varovné a jeho překročení není důvodem k odmítnutí série, ostatních pět uvedených pravidel je důvodem k odmítnutí série a k zásadním korekcím v postupu měření. Pravidla 1[2s] kontroluje se, jestli alespoň jeden výsledek kontroly překročil ± 2s 1[3s] kontroluje se, jestli alespoň jeden výsledek kontroly překročil ± 3s 2[2s] kontroluje se, jestli dva po sobě jdoucí výsledky kontroly překročily buď 2s nebo –2s R[4s] kontroluje se, jestli rozdíl (variační rozpětí) mezi dvěma výsledky kontrolního vzorku > 4s 4[1s ] kontroluje se, jestli 4 po sobě jdoucí výsledky téhož kontrolního vzorku přesahují buď 4 x 1s nebo 4 x (-1s) 10[x] kontroluje se, zda 10 po sobě jdoucích výsledků stanovení téhož kontrolního vzorku je na jedné nebo druhé straně průměru Nejčastěji je regulační diagram dle Westgarda definovaný podle zavedené symboliky takto: 1[3s]/2[2s]/R[4s]/4[1]s/ 10x 6) Stanovit opakovatelnost měření na automatickém biochemickém analyzátoru pro .......... v kontrolním materiálu: Opakovatelnost je přesnost stanovená za podmínek opakovatelnosti. Podmínky opakovatelnosti měření jsou následující:stejná metoda, stejná laboratoř,stejný přístroj ,stejný operátor ,stejná kalibrace, jediná série měření ,krátký časový interval.Často se pod pojmem opakovatelnost myslí přesnost v sérii (within run, slangově se někdy používá i pojem intraassay). Číslo měření Hladina 1 Hladina 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Průměr SD VK 7) Vypsat reprodukovatelnost měření pro stanovovaný analyt v tomtéž materiálu Reprodukovatelnost je přesnost, stanovená za podmínek reprodukovatelnosti. Obvyklými případy reprodukovatelnosti jsou:laboratorní reprodukovatelnost mezi sériemi, mezi dny. Nejdůležitějším zdrojem dat laboratorní reprodukovatelnosti je vnitřní kontrola kvality. Průměr Hladina 1 Hladina 2 SD VK 8) Vypočítat bias Pravdivost (bias) měření je statistický odhad velikosti systematické chyby měření. Je to rozdíl (obvykle vyjádřený v %) mezi průměrem velkého počtu měření (AM) a cílovou hodnotou (TV). |AM-TV| Výpočet: Bias (%) = -------------- x 100 AM….aritmetický průměr TV TV…..cílová hodnota Vypočítat kombinovanou nejistotu pro naměřenou koncentraci Nejistota měření je definována jako údaj, který charakterizuje rozsah, v němž se výsledek měření nachází (s danou pravděpodobností). Nejistota by měla být součástí výsledku měření. Zdroje nejistot měření v laboratoři: Za předpokladu striktního dodržování zásad preanalytické fáze a při používání moderní analytické technologie, disponující vysokým stupněm automatizace či robotizace (které umožňují i dosažení vynikající reprodukovatelnosti) platí pro soudobou rutinní automatizovanou analýzu, že je možné redukovat zdroje nejistot na zásadní druhy: - náhodné změny a odchylky - úroveň zajištění jakosti - úroveň kalibrace Z toho plyne, že monitorování přesnosti a kvantifikace systematických chyb měření umožní kvalifikovaný odhad nejistot měření. Hlavním zdrojem dat pro odhad nejistot měření jsou proto data vnitřní kontroly kvality a mezilaboratorního porovnávání zkoušek. Preanalytické a biologické zdroje nejistoty je nutno zjistit z dat výrobců, z literatury a certifikátů. Preanalytické zdroje lze redukovat standardizací preanalytických procesů, biologické zdroje, pocházející z biologické variability, pouze zvýšením počtu měření. analyt materiál Hladina 1 Hladina 2 Target Value 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 průměr sm.odch.opakovatelnosti CV opak % Bias % CV repro % U (komb,rel) Odhad relativní kombinované nejistoty (%) zahrnuje: Dlouhodobou přesnost (mezilehlou preciznost, reprodukovatelnost), systematickou odchylku (bias) ur,celk…..celková relativní kombinovaná nejistota (%) ur,repro….dlouhodobá přesnost = reprodukovatelnost (CV %) ur,x……..opakovatelnost (%) Br……...bias (%) ur,ref…....relativní nejistota RM (%) VALIDAČNÍ / VERIFIKAČNÍ PROTOKOL Název metody: ………… Typ metody: …… Experimentální a statistické postupy validace / verifikace v laboratoři jsou dle doporučení ČSKB: Doporučení pro určení odhadů nejistot výsledků měření / klinických testů v klinických laboratořích, Validace a verifikace analytických metod v klinických laboratořích. Opakovatelnost, Bias (Viz záznam kalkulace nejistoty, dokumentace k referenčnímu materiálu) Hladina 1 Hladina 2 Datum měření Měřený materiál (exspirace) Cílová hodnota (jednotky) Nejistota cílové hodnoty Průměr (n=…) CV opak % Bias % Mezilehlá preciznost (reprodukovatelnost) Hladina 1 Hladina 2 Měřený materiál IKK Šarže / exspirace Hodnota (jednotky) Sledované období CV repro % Validační data výrobce: (Viz dokumentace výrobce) Opakovatelnost… Mezilehlá preciznost (reprodukovatelnost)… Mez detekce … Mez stanovitelnosti / funkční citlivost … Linearita / měřící rozsah metody … Odhad nejistoty měření (Viz záznam kalkulace nejistoty) koncentrace Typ nejistoty Standardní nejistota Rozšířená nejistota (k=2) Hladina 1 % % Hladina 2 % % Hladina 3 % % Pozn. Typ nejistoty - RKN (Relativní kombinovaná nejistota) - CV (variační koeficient reprodukovatelnosti) Závěr: Metodu lze/nelze použít pro stanovení ........