Výroba transfúzni ch prípravku Mgr. Jana Tylečková Transfúzni a tkáňové oddelení FN Brno Dárcovství krve, typy odběrů Transfúzni přípravek = léčivo ^ Výběr dárce: o Dotazník DK o Předodběrová vyšetření (KO, TK) o Posouzení způsobilosti Typy odběru o odběry plné krve (do protisrážlivého roztoku) o odběry jednotlivých krevních složek = aferézy (přístrojové odběry) > Plazmaferéza > Trombocytaferéza > Erytrocytaferéza > Granulocytaferéza ❖ Multikomponentní odběr Z čeho se skládá krev? Zpracování odběrů plné krve 1. Odpočinková doba po odběru (min. 1 hod.) o pozvolné zchladnutí odebrané krve na pokojovou teplotu před dalším zpracováním 2. Centrifugace Mean Density (g/ml) Mean Volume (10"15 litre) Plasma 1.026 Platelets 1.058 9 Monocytes 1.062 470 Lymphocytes 1.070 230 Neutrophils 1.0S2 450 Red Cells 1.100 87 ) Jak krevní složky sedimentuj í? Zpracování odběrů plné krve 3. Lisování centrifugované PK na automatických lisech Zpracování odběrů plné krve 4. Deleukotizace erytrocytárního prípravku (deleukotizace = odstranění leukocytu z transfuzního přípravku) Obsah leukocytu: EBR < 1,2 x 109/TU ERD < 1 x 10Ó/TU - toto množství už není schopno u příjemce vyvolat imunologickou odpověď Pre-storaqe (in-line) filtrace = během zpracování, dop. zprac. 6 hod. po odběru Post-storage filtrace - sekundární výroba, provádí se u skladovaných TP - nevýhoda: část leukocytů již rozpadlých (uvolněny vasoaktivní látky...) Zpracování odběrů plné krve 5. Šokové zmrazení plazmy o -30°C v jádru (tj. v celém objemu P) do 1 hod. o aby se zachovala aktivita termolabilních ■ o koagulačních faktoru Karanténa plazmy pro klin. použití Zpracování odběrů plné krve 6. Výroba trombocytů z buffy-coatu o směsné, v náhradním roztoku, deleukotizované o smísením 4-6 buffy-coatů shodné KS, ke kterým se přidá resuspenzní roztok (=1 TD) o Následně centrifugace a separace trombocytů, které jsou resuspendovány ve směsi plazmy (30-40%) a náhradního roztoku (60-70%) Principy značení TP • Adjustace - vaky s TP jsou opatřeny štítky konečného produktu (adjustace) • Obsah štítku: identifikační kód výrobce, číslo odběru, datum odběru, datum exspirace, krevní skupina AB RhD, objem, použité roztoky, výsledky laboratorních testů, skladovací podmínky, atd. • Důležité údaje jsou uvedeny formou čárových kódů Sekundární výroba • dodatečná úprava vyrobených transfuzních přípravků > Post-storage deleukotizace > Promytí (odstranění zbytkové plazmy) > Ozáření (prevence TA-GVHD) o záření gama, ozař. dávka 25-50 Gy - zablokuje proliferační aktivitu lymfocytů > Rozplnění- pediatrická jednotka Transfúzni přípravky (TP) • Léčivé prípravky vyrobené z lidské krve či jejích složek (IVLP, max. 10 dárců) • Pro každý typ TP stanoveny požadavky na kvalitu (objem, obsah účinných složek, obsah kontaminujících složek, swirling fenomén...) • Pro každý typ TP je stanoveno rozmezí teplot pro skladování, pri kterých je garantována doba použitelnosti (monitorovaná teplota) • Príbalový leták - souhrnné informace o TP rocvtové TP • Exspirace - podle použitého antikoagulačního a resuspenzního roztoku: 21-49 dní (nejčastěji 42 dní) • Skladování: od +2°C do +6°C • Shoda ABO i Rh(D) + predtransfuzní vyšetrení (test kompatibility) Indikace: o Úprava anemie o Náhrada krevní ztráty Jaká je funkce červených krvinek? rocytové TP EBR (erytrocyty bez buffy-coatu, resuspendované) o Hb >43g/TU, leu < 1,2 x 109/TU ERD (erytrocyty bez buffy coatu, resuspendované, deleukotizované) o Hb >40g/TU, leu < 1,0 x 106/TU EAD (erytrocyty z aferézy, deleukotizované) o Hb >40g/TU, leu < 1,0 x 106/TU EP (erytrocyty promyté) o CB supernatantu < 0,5/TU Trombocytové TP • Exspirace - 5 dní (lze prodloužit na 7 za predpokladu kontroly sterility) • Skladování od +20°C do +24°C v klimatizované místnosti na agitátoru • Shoda ABO, Rh(D), test kompatibility se neprovádí (pokud není viditelná příměs ery) • Swirling - víření trc (orientačně životaschopnost trc) • Indikace: o trombocytopenie či trombocytopatie • Preventivně • Terapeuticky Trombocytové TP • TBSDR (Trombocyty z plné krve směsné, deleukotizované, resuspendované) • TADR (Trombocyty z aferézy resuspendované, deleukotizované) o Obsah trombocytů více než 200 x 109/ TD o Obsah residuálních leukocytu < 1 x 106/jedn. o pH >6,4 na konci doby skladování • Trombocyty kryokonzervova n é (novinka) o Skladování: do 1 roku < - 80°C, déle než 1 rok < -150°C (v kapalném N) o Použ. co nejdříve po rozmrazení Plazmatické TP Skladování a exspirace: 3 roky při teplotě méně než -25°C 3 měsíce při teplotě -18°C až -25°C o o A. Plazma pro klinické použití Obsahuje koagulační faktory i přirozené inhibitory krevního srážení Karanténa (6M vs. 4M) ABO shoda, test kompatibility se neprovádí Při výrobě z plné krve musí být oddělena do 6 hodin po odběru Indikace: Masivní krvácení Krvácení při DIC Krvácení při získaném nedostatku koagulačních faktorů (V,XI,XIII) TTP Krvácení při deficitu vit. K B. Plazma k frakcionaci o pro výrobu léčiv - krevních derivátů (HVLP) Plazmatické TP Plazma z plné krve (P) Plazma z aferézy (PA) Kryoprotein (KP) o Složka plazmy pripravená ze zmrazené čerstvé plazmy precipitací (srážením) bílkovin při tání ze zmrazeného stavu a následnou resuspenzí precipitovaných bílkovin v malém objemu tekuté plazmy o Indikace: hypofibrinogenémie, DIC s hyperfibrinolýzou Granulocytové TP • Exspirace - 24 hod. • Skladování od +20°C do +24°C v klimatizované místnosti bez agitace • Shoda ABO, Rh(D), test kompatibility (velká příměs ery) • Vždy nutno ozářit • Indikace: omezená pouze na neutropenie < 0,5 x 109/1 se současnými projevy sepse neodpovídající na léčbu ATB a antimykotiky • Granulocyty z aferézy - po stimulaci dárce růst. Faktorem • Granulocyty z plné krve - směsné Autologní TP Co to znamená autologní? • transfúzni přípravky z odběru slouží výhradně k hemoterapii pacienta, kterému byl odběr proveden • význam u plánovaných operačních výkonů s předpokládanou velkou krevní ztrátou, která se velmi pravděpodobně bude muset hradit substitucí • Snižuje rizika přenosu původců transfuzí přenosných infekci aloimunizaci, je žádoucí u pacientů s klinicky významnými protilátkami. é APK plná krev pro autotransfuzi 4 AEBR erytrocyty resuspendované bez buffy coatu pro autotransfuzi é AP zmrazená plazma pro autotransfuzi Další typy TP TP pro intrauterinní transfuzi (IUT) - intraumbilikální o ERD do 5 dnů stáří, ozářené (podat do 24h. od ozáření), Htk 0,70 - 0,85 o KS kompatibilní s matkou i plodem TP pro výměnnou transfuzi (exsangvinace) o ERD do 5 dnů stáří, ozářené (podat do 24h. od ozáření) o Erytrocyty k transfuzi se volí dle ABO kompatibility matky a novorozence, nesmí obsahovat antigén, proti kterému si matka vytvořila protilátku Pediatrické TP - s malým objemem pro transfuzi novorozencům a dětem o Erytrocyty: pediatrickou dávku lze připravit rozdělením 1 TU v množství odpovídajícím váze dítěte o Trombocyty: pediatrická dávka vzniká standardním rozdělením 1 TD na dvě rovnocenné poloviny o objemu cca 100 ml