P10 Klinická mikrobiologie I – obecná. Diagnostika spirochet. K nastudování: Odběr a transport vzorku, indikace a interpretace vyšetření (z učebnic, WWW atd.), spirochety.4 Úkol 1: Indikace mikrobiologického vyšetření Vyplňte tabulku pro následující kazuistiky. Œ Vždy vyplňte popis případu (levý sloupec) � Pak se pokuste nalézt řešení. Pokuste se strukturovat odpověď následujícím způsobem: Mikrobiologické vyšetření: ano/ne v pokud ano, který typ vzorku(-ů) v pokud ne, jaký další postup (přímá léčba – které antibiotikum, atd.) Ž Po dvouminutovém limitu, napište opravu podle výkladu učitele. Popis případu Vaše řešení ( 2 minuty) Oprava podle výkladu učitele a b c d Úkol 2: Odběrovky a nádobky Prohlédněte si odběrovky (odběrové soupravy) v tabulce a vyplňte jejich „průkazy totožnosti“. Název: Suchá odběrovka Suchý tampon čb Tyčinka může být vyrobena z plastu, dřeva či hliníku Tampon je vyroben z umělé bavlny Praktické použití: Název: Odběrovka s Amiesovou transportní půdou Amies a Stuart čb Tyčinka je vyrobena z plastu či hliníku Tampon je vyroben z umělé bavlny Půda Amies (Stuart, Cary Blair) Poznámka: Půda může obsahovat aktivní uhlí (pak je černá); bez něj by byla bezbarvá. Praktické použití: Varianta s hliníkovou tyčinkou se používá pro Název: Odběrovka Fungi-Quick P1010011čb Tyčinka je vyrobena z plastu Barva transportní půdy bezbarvá Barva uzávěru Praktické použití: Název: Odběrovka C. A. T. P1010011čb Tyčinka je vyrobena z plastu Barva transportní půdy bezbarvá Barva uzávěru Praktické použití: Název: Běžná zkumavka pro mikrobiologii Zkumavka sérová čb otočená bez popisu Sterilní? (ano či ne) Popis Vyrobena z polystyrénu, 16 × 100 mm, 10 ml Praktické použití: Název: Sputovka Sputovka čb otočená bez popisu Sterilní? (ano či ne) Popis Vyrobena z polystyrénu či polypropylénu, 26 × 92 mm, 30 ml Praktické použití: Název: Nádobka na stolici Na střevní parazity čb otočený bez popisu Sterilní? (ano či ne) Popis Vyrobena z polypropylénu, 26 × 82 mm, 30 ml Praktické použití: Do toho se vychčije čb Název: Odběrová nádobka na moč Do toho se vychčije čb Sterilní? (ano či ne) Popis Vyrobena z polypropylénu, 45 × 70 mm, 120 ml Praktické použití: Úkol 3: Jiné odběrové metody než odběrovky a nádobky Vyplňte následující tabulku: Metoda odběru Příklad(y) typického použití nátěr na sklíčko otisk na agar otisková metoda (čtvereček) urikult Úkol 4: Žádanka a) Vyplnění žádanky Vyplňte do následující žádanky jméno a údaje pacienta a požadované vyšetření dle kartičky, kterou vám dal učitel (každý má svou vlastní kartičku). Popis případu neopisujte z kartičky, formulujte zato požadavek na vyšetření dle vlastní úvahy tak, jak se domníváte, že by měl být lékařem pro daný případ formulován. Příklady formulace požadavku na žádance (pole „Požadováno“): * Výtěr z krku na bakteriologii * Krev na protilátky proti EB viru a cytomegaloviru * Stolice na parazity (návrat z pobytu v Kongu a Gabonu) Oskenovaná průvodka b) Nejčastější chyby v žádance Pro následující žádanky napište, co je na nich špatně. V některých případech jde o chybnou žádanku, ale všímejte si také nevhodně požadovaných vyšetření. Oskenovaná průvodka chyby CZ Úkol 5: Interpretace a) Interpretace přímého průkazu Pomocí tabulky v prezentaci napište interpretaci pro třináct nálezů, které jsou napsány na kartičkách v praktikárně. Používejte termíny “patogen”, “běžná flora”, “náhodný nález”, “kolonizace”, “kontaminace” Nález Interpretace b) Interpretace nepřímého průkazu Interpretujte několik klinických situací na kartičkách. Nezapomeňte, že pro interpretaci je nutno využít jak klinická data, tak také laboratorní nálezy. Opište z kartičky (věty zjednodušte) Závěr Klinická situace Výsledky serologického vyšetření Poznámky (oprava vašeho závěru učiněná učitelem) c) Interpretace výsledků u lymeské borreliózy S pomocí učitele vyhodnoťte výsledky ELISA a imunoblotu u pěti pacientů. Normálně se blotting provádí pouze ze zvláštního důvodu, ale tentokrát bylo potřeba testovat imunoblotem všechny pacienty. Naopak PCR se provádělo jen u dvou z nich – u těch, kteří mají podezření na neuroboreliózu. Písmeno pacienta Krátký klinický popis ELISA (Task 1) Blot (Task 2) PCR (+/–) Conclusion: final interpretation, recommendation for future therapy IgM IgG IgM (+/–) IgG (+/–) (+/–) (+/–) J Erythema migrans K Únavový syndrome L Pravděpodobná neuroborelióza M “Čtenář webových stránek” N Neuroborelióza?? d) Interpretace výsledků u syfilis S pomocí učitele vyhodnoťte výsledky screeningu a konfirmace u pěti pacientů. Screening syfilis – RRR a TPHA Těhotné ženy a dárci krve jsou screeningově vyšetřováni rychlou reaginovou reakcí (RRR) a Treponema pallidum pasivní hemaglutinací (TPHA). Posuďte výsledky screeningu u předložené skupiny osob a stanovte, u koho je třeba ještě zajistit podrobnější, tzv. konfirmační (potvrzovací) vyšetření. Výsledky zapište přímo do tabulky. RRR: pozitivní je vyvločkování. TPHA: pozitivní je tvorba aglutinátu. Více viz praktikum J08. Konfirmace syfilis – FTA-ABS, ELISA a imunoblotting Vyhodnoťte výsledky FTA-ABS, ELISA a imunoblottingu (WB) u pacientů se suspektní syfilis (viz předchozí úkol). Spočítejte cut-off a porovnejte s ním hodnoty pozitivní a negativní kontroly a výsledky pacientů. V poli/důlku A1 je přítomen blank. Písmeno pacienta Krátká klinická charakterizace případu Sscreening Kkonfirmace Závěr: konečná interpretace, doporučení případné léčby RRR TPHA FTA-ABS ELISA Blot IgM IgG IgM (+/–) IgG (+/–) (+/–) (+/–) A Těhotná žena B Dva dny léze (tvrdý vřed?) C Susp. Syphilis latens D Dárce krve E Novorozenec syfilitické matky Úkol 6: Přímý průkaz syfilis. New Zealand White Rabbit Black And White new zealand Přímý průkaz syfilis je možný pouze v případě zaslání vhodných vzorků do laboratoře. V některých stádiích nemoci však není k mání žádný vhodný vzorek pro tento účel. a) Rabbit infectivity test – RIT Zapište název králíka používaného pro tento test. (Je odvozen z tohoto souostroví: àààààààààà.) Exudát z podezřelého vředu je zpravidla vyhodnocován zástinovou mikroskopií a očkován do králičích varlat. Testované zvíře začíná trpět orchitidou 10 dní po naočkování. Název králíka: b) Mikroskopie v zástinu Podívejte se na mikrofotografii treponemat ze zástinové mikroskopie, zakreslete princip zástinové mikroskopie a zaznamenejte výsledek svého pozorování. c) Přímá imunofluorescence Podívejte se na mikrofotografii treponemat získanou z fluorescenčního mikroskopu. 6b) princip Zástin 6b) výsledek Zástin do protokolu 6c) Přímá imunofluorescence Původce syfilis, Treponema pallidum subsp. pallidum, není kultivovatelný organismus. Diagnostika závisí na stádiu nemoci. Úkol 7: Přímý průkaz Leptospira sp. Podle daného obrázku popište a zakreslete morfologii leptospir kultivovaných na tekutém Korthoffově médiu po dva týdny. Pro test byla použita moč pacienta s podezřením na leptospirózu. Leptospira