Praktické cvičení č.                            datum________________  jméno__________________




Téma praktika:

Automatická imunoanalýza – stanovení tumorových, anemických,

                        kardiálních a dalších markerů;  ROC analýza


Okruhy k nastudování a dotazy:

1)      Seznamte se s protokolem tak, abyste dokázali vysvětlit, k čemu slouží ROC analýza.

2)      Nastudujte princip  přístroje Immulite (Siemens) a princip modulu e801 (Roche).

3)      Stručně vysvětlete kompetitivní a nekompetitivní imunoanalýzu.

4)      Mezi jaké markery patří vitamin B12, folát a ferritin?




Přístroje a pomůcky:

Immulite 2000 (Siemens)

Cobas 8000  - modul e 801 (Roche Diagnostic)



Úkoly:


1.      Na přístroji Immulite 2000:


a)    Proveďte analýzu ß2 mikroglobulinu u několika rutinních vzorků a okomentujte výsledky
z hlediska klinického významu. Nejprve však zjistěte a zapište, zda je interní kontrola kvality
(IKK) měřená daný den ráno v požadovaném rozmezí a na palubě přístroje je dost reagencií.


Pacient č.          Výsledek          Referenční meze                          Komentář

      1


      2


      3




b)      V LIS vyhledejte a okomentujte další čtyři pacientky s IgE (2) a C-peptid (2).



Pacient č.          Výsledek          Referenční meze                            Komentář

      1


      2


      3


      4



c)      Uveďte princip přístroje – v krátkosti.



d)      V LIS vyhledejte a okomentujte pacienta s pozitivními a negativními hodnotami specifického
IgE – stanovení alergenů.  Prostudujte si tabulku rozdělení alergenů      do tříd dle hodnoty
specifického IgE - viz. komentář v LIS.



Pacient č.            Výsledek                  Referenční meze                       Třída
alergenu

      1






2.      Na přístroji cobas 8000 modul e801:


a)    U jednoho vzorku změřte hladinu folátu (sledujte nabírání vzorku, inkubaci i speciální mytí)
– metoda trvá 27 min., neboť se analyt musí nejdříve uvolnit z komplexu.

b)   Doplňte reagencii na modul e801.



c) Uveďte princip modulu e801 – v krátkosti.



d) Dle referenčních mezí nalezených v LIS vyhodnoťte a okomentujte naměřený výsledek.




e)    Vyfiltrujte všechny vzorky, u kterých byl stanoven ferritin na modulu e801 (stanovení se
provádí rutinně v séru).




f) V LIS vyhledejte a z klinického hlediska posuďte několik pozitivních pacientů, u kterých byly
stanovovány následující parametry: vitamin B12, folát, ferritin, PCT a troponinT.




Pacient č.          Výsledek          Ref. rozmezí – Cut off                          Komentář

      1


      2


      3


      4


      5


     Z přiložených dat zpracujte ROC křivku pro ß2 mikroglobulin v programu MedCalc:


Pacienti 60let a starší:

Zdraví: [mg/l]                                              Nemocní: [mg/l]

              2,31                                                                  5,30

              2,41                                                                  3,75

              1,39                                                                  5,48

              1,82                                                                  7,33

              2,47                                                                   3,84

              1,62                                                                 35,22

              1,48                                                                   4,09

              1,17                                                                 10,90

              2,77                                                                   3,73

              3,50                                                                  2,00

              1,81                                                                   3,29

              2,99                                                                   3,38

              4,94                                                                   4,01

              2,24                                                                   1,48

              2,14                                                                   5,37


ROC křivka (operativní charakteristika testu) slouží k posouzení funkce testu – toho, jak test
umožňuje rozlišit nemocné od zdravých. Čím strměji probíhá křivka v počáteční oblasti, tím je lepší
rozlišení mezi nemocnými a zdravými. Záleží i na oblasti pod křivkou, čím je větší tato plocha, tím
je reakce citlivější a specifičtější.

Diagnostická senzitivita (citlivost) – udává procento správně pozitivních výsledků ze souboru
nemocných osob. Čím vyšší je senzitivita, tím méně je falešně negativních výsledků. Udává se jako
zlomek jedné nebo v procentech.

Diagnostická specifita – udává procento správně negativních výsledků ze souboru zdravých osob. Čím
vyšší je specifita, tím méně je falešně pozitivních výsledků. Udává se jako zlomek jedné nebo v
procentech.

Funkcí specifity a senzitivity je Youdenův index - ukazatel diagnostické správnosti. Bodu, ve
kterém dosahuje nejvyšší hodnoty, odpovídá kritérium (hranice rozlišující zdravé od nemocných) a
příslušná senzitivita a specifita.


Postup:

- V programu MedCalc – Data:

- Do prvního sloupečku pod název B2MG vložte data zdravých a pod to data nemocných

- Do druhého sloupečku pod název Stav  ke zdravým napište nulu a k nemocným 1

- Běžte do Statistics – ROC curves – ROC curve analysis – do Variable vyberte B2MG, do
Classification variable vyberte Stav - OK


Uveďte specificitu a senzitivitu  pro nejvyšší Youdenův index. Dále porovnejte kriterium s
rozhodovací mezí (cut off hodnotou) používanou v laboratoři - pro věk 60-110 roků je to3,00 mg/l:


Závěr:

...................................................................................................
...................................................

…………………………………………………………………………………………………..