(I.) Red blood cell count. Estimation of haemoglobin concentration. Calculated parameters of red blood cells (II.) Estimation of blood group by slide method Physiology I – practicals Fyziologický ústav LF MU, 2015 © Michal Hendrych Red Blood Cell (RBC) – erytrocyte • Anucleated cell, the most abundant blood cell • Shape: • Biconcave disc • surface increased by 30% • spectrin • deformation inside the capillaries • Functions: • Transport of oxygen (haemoglobin) • Role in acidobasic balance and CO2 transport • Size: • Normocyte: 7.5 µm • Microcyte: ≤ 7 µm • Macrocyte: ≥ 9 µm • Megalocyte: ≥ 20 µm Reticulocyte • Immature RBC • In peripheral blood: 1% ± 0.5% of RBC • reticulocytosis: increased ratio of reticulocytes in peripheral blood • No nucleus, but residues of membrane organelles in cytoplasm (substantia granulo-filamentosa) • Within 48 hrs. maturation to RBC Alteration of shape: poicylocytosis Anisocytosis: varying size of RBCs RBC count • Number of RBC • Men: 4.3-5.3 * 1012 / l • Women: 3.8-4.8 * 1012 / l • Newborns: 4.4-7.0 *1012 / l • Intersexual differences: • Men: testosteron (male sex hormone) stimulates releasing of erythropoetin • Women in fertile period: relative erythrocytopenia due to menstruation Alterations of RBC count • polyglobulia – increased number of RBCs • erythrocytopaenia – decreased number of RBCs Estimation of RBC count • Automatic methods • Classical method: Bürker´s chamber + Hayem´s solution Haematocrit • Volume percentage of blood cells in blood sample (erythrocyte volume fraction) • Centrifugation of anti-coagulated blood • Plasma • Buffy coat • RBC • Hct (hematocrit) • Men: 42-52% • Women: 37-47% Hemoglobin • Hemoglobin concentration (HGB) • Men: 140-180 g/l • Women: 120-160 g/l • Newborns: 160-240 g/l Estimation of HGB • Spectrophotometric method: • lysis of RBC by transforming solution + stabilisation of haemoglobin (Hb-cyanide) • Measurement of light absorption Haemoglobin - derivatives • Oxyhaemoglobin – haemoglobin + O2 • Carboxyhaemoglobin – haemoglobin + CO • Carbaminohaemoglobin – haemoglobin + CO2 • Methemoglobin = haemiglobin with oxidized Fe (Fe3+) Calculated parameters of RBCs • Average volume of RBC (MCV, mean corpuscular volume) • MCV = HCT/RBC (hematocrit/ red blood count) = 80-95 fl • Average weight of Hb in RBC (MCH, mean corpuscular hemoglobin) • MCH = HGB/RBC (haemoglobin/ red blood count) = 28-32 pg • Average concentration of Hb in RBC (MCHC, mean corpuscular hemoglobin concentration) • MCHC = HGB/HCT (hemoglobin/ hematokrit) = 310-360 g/l • Red cell distribution width (RDW) = 11,5-14,5% • Variation of RBCs size • ↑RDW – anisocytosis Calculated parameters of RBCs HCT RBC HGB MCH = HGB/RBC MCHC = HGB/HCTMCV = HCT/RBC Anaemia • Decreased concentration of Hb in blood • Symptoms • Pale mucose membrane • Fatigue • Tachycardia • Dyspnoe Sideropenic anaemia • Deficiency of Fe2+ → decreased production of RBCs→ hypoxia stimulates releasing of erythropoietin → increased production of RBCs with lack of Hb • Microcytic hypochromic anaemia Pernicious anaemia • Deficiency of B12 of folic acid • Macrocytic, hyperchromic anaemia Krevní skupiny • Ery na svém povrchu nesou různé antigeny, podle kterých je dělíme do krevních skupin. Tyto krevní znaky se dědí a jsou neměnné během celého života • Např. systémy: ABO, Rh, MNs (průkaz otcovství), Kell, Lewis AB0 systém • Aglutinogeny – glykoproteiny: • 0 – pouze struktura H, alela ii, 33% • A – na strukturu H navázaný N-acetylgalaktosamin, alely AA, Ai, 45% • B – na strukturu H navázaná galaktóza, alely BB, Bi, 16% • AB – nese antigeny A + B, alela AB, 6% • Nevyskytují se jen na erytrocytech. • Aglutininy – protilátky IgM: • 0 – anti-A + anti-B • A – anti-B • B – anti-A • AB – nemá • Jejich tvorba je zahájena po příjmu potravy a probíhá po celý život. Nemohou procházet placentární bariérou (kde je přenašeč pouze pro IgG). AB0 systém AB0 systém: dědičnost • Alely: A, B, i • A a B se dědí kodominantně, projeví se obě alely • alela i je vůči nim recesivní Určení krevních skupin sklíčkovou metodou • Sklíčková metoda – na podložní sklíčko kápneme krev a standardní séra skupiny A, B a 0. Dle aglutinace určíme krevní skupinu. Rh faktor • Objeven u opice Makak rhesus • Antigeny C,c,D,d,E,e • Je-li přítomno D → Rh+, dominantní • Rh- jsou recesivní homozygoti • Protilátky IgG se tvoří až po setkání a antigenem D • Procházejí placentou • Možnost imunizace: • Transfuze inkompatibilní krve • Delivery (miscarrige, abortion) Rh+ child Rh- mother, u dalšího těhotenství může nastat fetální erytroblastóza – dochází k prostupu anti-Rh protilátek placentou a k hemolýze fetálních erytroblastů→ hydrops fetalis • Prevence: podání anti-Rh séra matce do 2 hodin po porodu Zdroje obrázků • Slide 3 - https://en.wikipedia.org/wiki/Reticulocyte [cited 30.8.2015] • Slide 4 - http://medicaltreasure.com/poikilocytosis/ [cited 30.8.2015] • Slide 5 - https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Anisocytosis.jpg [cited 30.8.2015] • Slide 7, 21 – Praktická cvičení z fyziologie, Masarykova univerzita 2011 • Slide 8 - http://www.wikiskripta.eu/index.php/Hematokrit [cited 30.8.2015] • Slide 9 – Ganong‘s Review of medical physiology, Ganong, Mc Grow hill, 2010 • Slide 19 - http://www.wikiskripta.eu/index.php/Soubor:Krevni_skupiny.png [cited 30.8.2015]