Praktikum 28. a 29. 4. 2021
Vnitřní mikroflóra zrní ke klíčení
Do erlenky s cca 50 ml sterilního fyziologického roztoku (vyrobíte si sami nalitím
fyziologického roztoku do sterilní Erlenky) přidejte 100+ zrn čočky. Za třepání (na
třepačce) nechte 20 minut zalité. Odeberte 1× 1 ml (automatické pipety, špičky z krabice
na poličce) na Petriho misku (prázdnou) a 4× 1 ml vyhoďte (do „vylévací kádinky na
pracovním stole). Přidejte 5 ml roztoku chlornanu (Sorun) (odměrný váleček). Občas
na stole promíchejte. Po 15, 30, 60, 120 minutách odeberte vždy 25 zrníček (pinzeta),
propláchněte sterilním fyzologickým roztokem a naskládejte pinzetou na povrch půdy
v Petriho misce (červená půda DRBC). Mezi touto prací:
a– Provádějte další úkoly
b– Zalijte (až bude přinesena navařená a zchladlá půda DRBC) 1 ml odpipetovaného
výtřepku ze zrn půdou DRBC
Misky popište a nechte na pracovním místě. Odpočet bude za týden.
Další barvení
Barvení na spory
◦ Kultura: Bacillus cereus na živném agaru, starší. Nebo sporuláty ze stré kon-
zervy.
◦ Postup: Fixovaný preparát převrstvíte malachitovou zelení o koncentraci (5%)
a zahřejete třikrát do výstupu par (dolévat barvu, aby nevyschlo). Potom
slejete a krátce opláchnete vodou nebo fyziol. roztokem, nalijete na několik
sekund eosin slijete, opláchnete vodou nebo fyziol. roztokem, necháte za-
schnout.
◦ Mikroskopický obraz: Špinavě zelené až zelené spory, ostatní útvary „starorů-
žové
• Barvení acidoresistentní
◦ Kultura: Starší kulturA Saccharomyces cerevisiae
◦ Postup: Jako předchozí, k moření se užije karbolfuchsin (může vzplanout),
odbarvuje se kyselým alkoholem proto „acidorezistentní , dobarvuje se 1,2%
malachitovou zelení
◦ Mikroskopický obraz: Červené – červenohnědé askospory uvnitř šedozeleně
vybarvených buněk + buňky beze spor
• Barvení na pouzdra
◦ Kultura: maz z povrchu Romadůru
◦ Postup: Kousek mazu rozetřete kličkou na podložním sklíčku v kapce tuše. Potom
roztáhnete do plochy, rovněž kličkou. Nechte zaschnout a fixujte. Barvíte
3 – 5 minut metylénovou modří s KOH, opatrně opláchněte, nechte zaschnout.
◦ Mikroskopický obraz: V místech preparátu, která nejsou ani moc hustá, ani
moc řídká jsou modrofialové oválné bakterie, kolem nich bílá místa a vně těch
prázdných míst zrníčka tuše. Bílá místa odpovídají pouzdrům.