Praktikum 5. a 6. 5. 2021 Auxanogram Definice: Auxanogramy umožňují zjistit, zda organismus je schopen využít danou látku jako výživový zdroj (stavební materiál). Nejčastěji se užívají pro dusíkaté látky (jako zdroj N do metabolismu) a uhlíkaté látky (jako zdroj C). Půda: Půda na uhlíkaté auxanogramy obsahuje 1 % (NH4)2SO4, 0,1 % KH2PO4, 0,05 % MgSO4.7H20, 0,15% yeast extractu a 1,5 % agaru. Půda na dusíkaté auxanogramy neobsahuje (NH4)2SO4, ale místo toho 2 % glukózy. Provedení: 2 kličky z kultury kvasinek dáme do .5 ml fyziologického roztoku (zkumavka), suspendujeme a vylijeme na povrch agaru na auxanogramy. Rozprostřeme po povrchu a slijeme, misku necháme otočenou a pootevřenou vyschnout. Na vyschlý povrch půdy nanášíme malé hromádky sacharidů (špička skalpelu, nebo klička). Nanášíme na vrcholy myšleného rovnostranného šestiúhelníku , cca 2 – 2,5 cm od okraje misky. Mezi jednotlivými sacharidy kličku vypalujeme, abychom je vzájemně nekontaminovali, musíme nechat kličku / skalpel vždy vychladnout. Místa položení sacharidu označíme jeho zkratkou nebo jinou značkou. Misky označíme a necháme ke kultivaci. Obyvyklou začátečnickou chybou je, že se nanese sacharidu moc. Hodnocení a interpretace Za 14 dní v rámci praktika hodnotíme růst (zakalení povrchu půdy na misce, případně pigmentace) kolem jednotlivých hromádek. Kde je nárůst, tam může kvasinka využít daný sacharid jako zdroj C. Termorezistentní plísně Definice: Některé mikroskopické houby jsou s to produkovat askospory, schopné přežít i několik desítek minut při teplotě 80 – 90 ◦ C, případně přelití vroucí vodou. Takovéto houby jsou s to se ve vitálním stavu dostat prostřednictvím čajovin nebo koření i k finálnímu konzumentovi. Představují i riziko pro okamžitě nespotřebovávané potraviny (např. u kompotů). Provedení: Do kádinky s půdou, bezprostředne vytaženou z autoklávu, o teplotě cca 90 - 95 ◦ C (dostanete všichni naráz) vsypeme obsah čajového sáčku, zakroužíme, aby se omyl prach ze stěn a necháme stát. Občas promícháme (zpočátku je nutno oplachovat i stěny) a odhadem (ruka) necháme chladnout na teplotu 45 – 50 ◦ C (= horké, ale nepálí). Potom po promíchání rozlijeme (odhadem rovnoměrně) na tři Petriho misky, na poslední „vyklepneme i zbytek čaje (co jde). Misky označíme a necháme ke kultivaci. Hodnocení a interpretace V dalším společném (za 14 dní) praktiku počítáme vyrostlé kolonie, počet ze tří misek vztahujeme na gram čaje. Odpočet úkolu se semeny • Miska se zalitým oplachem semen: ◦ Spočítat kolonie • Misky se semeny ◦ Na všech 4 spočítat klíčící semena ◦ Vynést počty a čas do grafu ◦ Na misce před začátkem úbytku klíčících zrn je už potlačena mikroflóra povrchu, počet plesnivých zrnek z ní brát jako počet vnitřně kontaminovaných zrn • Vyočkovat jehlou jednu z kolonií po dohodě s vedením praktika na misku s CYA (Czapek Yeast Agar dle Pitta). Malé misky.