Praktikum 11
26. 10. a 2. 11. 2021
11.1 Mikroskopování hub
11.1.1 Definice
Mikroskopická morfologie kombinovaná s růstovými vlastnostmi patří k základním postupům
při určování hub.
11.1.2 Půdy
Receptury jsou poněkud složitější:
Czapek-Doxův agar, modifikovaný podle Pitta CYA):
Stopové prvky pro Czapek-Doxův agar:
Složka Množství [g nebo ml]
CuSO4.5H2O 0,5
ZnSO4.7H2O 1,0
voda 100,0
Lze uchovávat neomezeně bez sterilizace.
Koncentrovaný Czapkův roztok:
Složka Množství [g nebo ml]
NaNo3 1,0
KCl 5,0
MgSO4.7H2O 5,0
FeSO4.7H2O 0,1
voda 100,0
Lze uchovávat neomezeně bez sterilizace. Případné sraženiny Fe2O3 nejsou na závadu,
jen se musí roztřepat (vhodné je mít tento roztok v lahvičce se sklenenými kuličkami).
Samotná půda:
Složka Množství [g nebo ml]
K2HPO4 1,0
Koncentrovaný Czapkův roztok 10,0
Roztok stopových prvků 1,0
Yeast extrakt 5,0
Sacharóza 30,0
Agar 15,0
Voda 1000,0
Sacharóza nemá obsahovat siřičitany, pH půdy je 6,7, sterilizovat při 121 ◦
C 15 minut.
Poznámka: Komerční Czapek-Doxovy agary od různých výrobců mají odlišné složení
a morfologie hub na nich může být odlišná.
MEA (malt extract agar)
Složka Množství [g nebo ml]
Malt extract 20,0
Pepton 1,0
Glukóza 20,0
Agar 20,0
Voda 1000,0
Poznámky: Jako Malt extract lze použít sladové výtažky z obchodů se „zdravou
výživou“. pH 5,6, sterilizovat 15 minut při 121 ◦
C, ne déle, nebo je moc měkká. Půda
by se neměla opakovaně autoklávovat (pokud se nevylije všechny), jen rozvařit ve vroucí
vodě, jinak vůbec neztuhne. Některá pracoviště tuto půdu jen rozvařují ve vroucí vodě.
G25N
Složka Množství [g nebo ml]
K2HPO4 0,75
Koncentrovaný Czapkův roztok 7,5
Yeast extrakt 3,7
Glycerol analyticky čistý 250 g
Agar 12
Voda 750
Poznámka: Starší a delší dobu otevřený glycerol obsahuje vodu a v takovém případě
půda neztuhne. pH 7,0. Sterilizovat při 121 ◦
C 15 minut.
11.1.3 Nasazení
Poznámka: Bylo provedeno.
CYA se (pro jeden kmen) vylévá na jednu Petriho misku 9 cm a dvě 5 cm. MEA se
vylévá na jednu Petriho misku 9 cm a G25N na jednu Petriho misku 5 cm.
Všechny misky se vyočkují bodově do středu.
Velká miska CYA a misky s MEA a G25N se inkubují 5 dní při 26 - 28 ◦
C, jedna
malá miska CYA se inkubuje v chladničce a jedna při 37 ◦
C.
Zaznamenává se nárůst (průměr kolonie) na jednotlivých půdách a teplotách. Morfologie
se sleduje u CYA inkubovaného při 26 - 28 ◦
C, na MEA tvoří některé druhy lépe
plodničky.
1. na G25N dobře rostou plísně, napadající sušší výrobky (pečivo, sladkosti, sušené
mléko apod.)
2. při chladničkové teplotě vyrostou plísně, schopné napadat takto uskladněné potraviny
3. při 37 ◦
C vyrostou potenciálně patogenní houby (i makroskopické), jejichž „úspěšnost“
závisí na imunitě pacienta
Tj. už jen nárůst na jednotlivých půdách a při jednotlivých teplotách dává určitý
obraz vlastností houby s praktickým dosahem.
11.1.4 Mikroskopování
Do kapky Melzerova činidla na podložním sklíčku dáme kousek mycelia z nárůstu na
CYA při 26 - 28 ◦
C, jemně roztáhneme kličkou a jehlou. Zakryjeme krycím sklíčkem a
pozorujeme při zvětšení 100 – 400 × (tedy objektivy 10 – 40).
Snažíme se najít rozmnožovací orgány a další význačné útvary a popsat je.
11.1.5 Materiál
A) Mikroskopické houby od Dr. Kubátové, na misce je jen číslo sbírkového kmene
1. Alternaria alternata CCF 2671 viz brožura
2. Botrytis cinerea CCF 4807 viz xerox
3. Aspergillus flavus CCF 3194 viz brožura
4. Penicillium viridicatum CCF 3214 viz xerox
5. Penicillium digitatum CCF 3270 viz xerox
6. Aspergillus chevalieri CCF 3291 viz brožura
7. Fusarium cerealis CCF 5706 hledat srpkovité makrokonidie
8. Fusarium solani CCF 2967 hledat srpkovité makrokonidie
Udělejte preparát ze tří kmenů od Dr. Kubátové nebo zachyceného. Zdařilé preparáty
si prohlížejte vzájemně a zdokumentujte do protokolu.
11.2 Do protokolu
A) Co jste mikroskopovali, co jste tam viděli, případně obrázky
11.3 Odběrovky na sliny
Na příští praktikum dostanete odběrovky na sliny. V odběrné nádobce je kousek parafinum
durum. Požvýkáte jej v den následujícího praktika se mnou hned ráno, před ústní
hygienou a i se slinou po cca pětiminutovém žvýkání vyplivněte do odberovky. Ta slina
je důležitá, ta se analyzuje!
Slinu s odběrovkou doneste do praktika. Odběrovku popište, nejlépe obyčejnou tužkou,
mějte ji v plastovém sáčku (kdybyste ji málo utáhli).