Praktikum 19. a 20. 5. 2021
Určení biochemických vlastností zadaného kmene bakterií
na „pestré řadě
Pestrá řada
• Živný bujon s jedním procentem testovaného sacharidu a indikátorem
kvašení (případně plynovkou)
◦ Sacharidy s plynovkou: glukóza a manitol (= 10 ml bujonu a
plynovka) (G, bez označení)
◦ Sacharidy bez plynovky: sacharóza, sorbitol, maltóza, laktóza
(= 3 – 5 ml bujonu) (SA, SO, M, L)
• TSI – detekce tvorby H2S s indikátorem v půdě, červenožlutý šikmý
agar
• SC – detekce utilizace citrátu zelený šikmý agar
• MIU – detekce pohybu, štěpení urey a produkce indolu, oranžová
rosolovitá půda
Postup práce:
• Do bujonů stačí namočit kličku s kmenem a zamíchat
• Do MIU zapíchnout kličku a vytáhnout, nemíchat, nepropíchnout
dno!
• TSI udělat „hádek na šikmý povrch a následně vpich do hloubky
agaru, až na dno zkumavky (nepropíchnout)
• Do zkumavky s TSI následně zavěsit proužek papíru s octanem olov-
natým
• SC masívně vyočkovat „hádek na šikmý povrch, bez vpichu
Odečítání bude dle domluvy.
Stanovení citlivosti zadaného kmene difuzní metodou
Na povrch živného agaru vyočkujeme kmen (ten samý, co jste si
vybrali na pestrou řadu) a rozetřeme sterilním tamponem na špejli po
povrchu půdy. Následně pomocí pinzety nebo jehly (vypalovat před každým
nabíráním disku) nasadíme na povrch půdy antibiotické disky (6
různých) cca na 2/3 vzdálenost mezi středem misky a okrajem a tak,
aby se jejich pozice blížily rovnostrannému šestiúhelníku. Tampon hodíme
do kontejneru na infekční odpad (boční stolek).
Misky označit (skupina, kalendářní den).
Odečítání dle domluvy.
Odečtení termorezistentních mikroskopických hub
Spočítáme kolonie na všech třech miskách a vyjádříme napočítané
dle hmotnosti čaje jako KTJ.g−1
(zaokrouhleno nahoru na celá čísla).
Kultivace aerobní, anaerobní, detekce spor
Materiál
Kádinka se zalitou půdou.
Metodika
Z kádinky odeberete cca 1 ml suspenze nad usazenou půdou do
sterilní zkumavky.
1 Na první misku uděláte křížový roztěr a označíte (skupina, první
miska)
2 Zkumavku dáte na půl hodiny do vodní lázně 85 ◦
C.
Po tomto zákroku zůstanou v půdě pouze spóry.
3 Uděláte křížový roztěr na tři misky, jedna z nich s „loužičkou půdy
na víčku
4 Jednu misku označíte jako svou misku č. 2 a nic dalšího s ní neděláte
5 Další misku označíte jako svou misku č. 3 a připravíte ji na umístění
do anaerostatu
6 Jako poslední misku použijete tu, která má na víčku loužičku půdy.
Na tuto loužičku masivně a po celé ploše vyočkujete Serratia marcescens
a potom okraje misky a víčka u vodní lázně spojíte parafinem
(bude vám ukázáno), označíte jako svou misku č. 4.
Do protokolu
Do protokolu dáte nebo zadokumentujete popis všech čtyř misek.
Odečtení dle domluvy.