Praktické cvičení č. datum________________ jméno__________________ Téma praktika: Automatická imunoanalýza – stanovení tumorových, anemických, kardiálních a dalších markerů; ROC analýza Okruhy k nastudování a dotazy: 1) Seznamte se s protokolem tak, abyste dokázali vysvětlit, k čemu slouží ROC analýza. 2) Nastudujte princip přístroje Kryptor compact plus (ThermoScientific) a princip modulu e801 (Roche). 3) Stručně vysvětlete kompetitivní a nekompetitivní imunoanalýzu. 4) Mezi jaké markery patří vitamin B12, folát a ferritin? Přístroje a pomůcky: Brahms Kryptor compact plus (ThermoScientific) Cobas 8000 - modul e 801 (Roche Diagnostic) Úkoly: 1. Na přístroji Cobas 8000 – modul e801: a) Proveďte analýzu ß2 mikroglobulinu u několika rutinních vzorků a okomentujte výsledky z hlediska klinického významu. Nejprve však zjistěte a zapište, zda je interní kontrola kvality (IKK) měřená daný den ráno v požadovaném rozmezí a na palubě přístroje je dost reagencií. Pacient č. Výsledek Referenční meze Komentář 1 2 3 b) V LIS vyhledejte a okomentujte další čtyři pacienty s IgE (2) a C-peptid (2). Opět ověřte a zapište, zda je interní kontrola kvality (IKK) měřená daný den ráno v požadovaném rozmezí a na palubě přístroje je dost reagencií. Pacient č. Výsledek Referenční meze Komentář 1 2 3 4 b) Uveďte princip přístroje – v krátkosti. c) V LIS vyhledejte a okomentujte pacienty se změřeným volným a celkovým PSA, případně i p2PSA. Vypočítejte poměr freePSA/tPSA a výsledek interpretujte. U pacientů s dostupnými hodnotami p2PSA vypočítejte index zdraví prostaty PHI a interpretujte výsledek. Pacient č. free PSA total PSA Poměr free/total p2PSA PHI 1 2 3 2. Dále na přístroji cobas 8000 modul e801: a) U jednoho vzorku změřte hladinu folátu (sledujte nabírání vzorku, inkubaci i speciální mytí) – metoda trvá 27 min., neboť se analyt musí nejdříve uvolnit z komplexu. b) Dle referenčních mezí nalezených v LIS vyhodnoťte a okomentujte naměřený výsledek. c) Vyfiltrujte všechny vzorky, u kterých byl stanoven ferritin na modulu e801 (stanovení se provádí rutinně v séru). d) V LIS vyhledejte a z klinického hlediska posuďte několik pozitivních pacientů, u kterých byly stanovovány následující parametry: vitamin B12, folát, ferritin, PCT a troponinT. Pacient č. Výsledek Ref. rozmezí – Cut off Komentář 1 2 3 4 5 3. Dále na přístroji Brahms Kryptor compact plus: a) V LIS vyhledejte a z klinického hlediska posuďte několik pacientů, u kterých byl opakovaně stanovován kopeptin. Pacient č. Výsledek Ref. rozmezí – Cut off Komentář 1 a) b) 2 a) b) 3 a) b) b) Dle referenčních mezí nalezených v příbalovém letáku vyhodnoťte a okomentujte naměřený výsledek. c) Uveďte princip přístroje – v krátkosti. Z přiložených dat zpracujte ROC křivku pro ß2 mikroglobulin v programu MedCalc: Pacienti 60let a starší: Zdraví: [mg/l] Nemocní: [mg/l] 2,31 5,30 2,41 3,75 1,39 5,48 1,82 7,33 2,47 3,84 1,62 35,22 1,48 4,09 1,17 10,90 2,77 3,73 3,50 2,00 1,81 3,29 2,99 3,38 4,94 4,01 2,24 1,48 2,14 5,37 ROC křivka (operativní charakteristika testu) slouží k posouzení funkce testu – toho, jak test umožňuje rozlišit nemocné od zdravých. Čím strměji probíhá křivka v počáteční oblasti, tím je lepší rozlišení mezi nemocnými a zdravými. Záleží i na oblasti pod křivkou, čím je větší tato plocha, tím je reakce citlivější a specifičtější. Diagnostická senzitivita (citlivost) – udává procento správně pozitivních výsledků ze souboru nemocných osob. Čím vyšší je senzitivita, tím méně je falešně negativních výsledků. Udává se jako zlomek jedné nebo v procentech. Diagnostická specifita – udává procento správně negativních výsledků ze souboru zdravých osob. Čím vyšší je specifita, tím méně je falešně pozitivních výsledků. Udává se jako zlomek jedné nebo v procentech. Funkcí specifity a senzitivity je Youdenův index - ukazatel diagnostické správnosti. Bodu, ve kterém dosahuje nejvyšší hodnoty, odpovídá kritérium (hranice rozlišující zdravé od nemocných) a příslušná senzitivita a specifita. Postup: - V programu MedCalc – Data: - Do prvního sloupečku pod název B2MG vložte data zdravých a pod to data nemocných - Do druhého sloupečku pod název Stav ke zdravým napište nulu a k nemocným 1 - Běžte do Statistics – ROC curves – ROC curve analysis – do Variable vyberte B2MG, do Classification variable vyberte Stav - OK Uveďte specificitu a senzitivitu pro nejvyšší Youdenův index. Dále porovnejte kriterium s rozhodovací mezí (cut off hodnotou) používanou v laboratoři - pro věk 60-110 roků je to3,00 mg/l: Závěr: ................................................................................................... ................................................... …………………………………………………………………………………………………..