Praktické cvičení č. datum:__________ jméno:______________________ Téma praktika: Interference (hemolýza, lékové interference), ověření rozsahu měření metody, jiný biologický materiál Okruhy k nastudování a dotazy 1. Trinderova reakce 2. Od jaké koncentrace hemoglobinu může docházet k významným interferencím hemolýzou u metod LD, AST, Bil-D, K? 3. Jakými způsoby/mechanismy může hemolýza interferovat při stanovení? 4. Jaké jsou některé další časté interferenty? 5. Jaký je analytický rozsah metody GLUC3 uváděný výrobcem? Přístroje a pomůcky: Automatický biochemický analyzátor Vzorky Úkoly: I. Interference způsobená hemolýzou 1) Připravte si hemolyzát - ze vzorku plné nesrážlivé krve přepipetujte 1 000 ul do zkumavky a zmrazte. 2) Připravte vzorky o celkovém objemu 240 ul s přídavky hemolyzátu (H) a blanku (deionizovaná voda) dle uvedených tabulek 1 a proveďte analýzu vyšetření LD, AST, BILD a K na analyzátoru c8000. 3) Výsledky zapište do tabulky 2 a v závěru okomentujte. Tabulka 1 – Přídavky blanku (deionizovaná H[2]O) a hemolyzátu: Směsné sérum (ul) Přídavek hemolyzátu (ul) Přídavek deionizované vody (ul) Vzorek 1 200 0 40 Vzorek 2 200 10 30 Vzorek 3 200 20 20 Vzorek 4 200 40 0 Tabulka 2 – naměřené výsledky: LD (ukat/l) AST (ukat/l) BilD (umol/l) K (mmol/l) Vzorek 1 Vzorek 2 Vzorek 3 Vzorek 4 4) Změřte spektrum připraveného hemolyzátu 100x a 200x naředěného do 2 ml celkového objemu v rozmezí vlnových délek 380-700 nm a vytiskněte absorpční spektrum. Závěr:_____________________________________________________________________________________________ _____________________________________ II. Interference způsobená léky – (vysokou koncentrací analytu) 1) Připravte si zásobní roztok Dicynonu (D) o koncentraci 500 mg/l z komerčně dostupného Dicynonu o koncentraci 125 mg/ml. 2) Ze zásobního roztoku Dicynonu o koncentraci 500 mg/l připravte vzorky séra o celkovém objemu 200 ul s přídavkem Dicynonu (D) tak, aby celková koncentrace Dicynonu byla 0, 40, 80 a 160 mg/l. 3) Dobře promíchejte. V připravených vzorcích změřte na analyzátoru c8000 kreatinin, kyselinu močovou, triglyceridy a cholesterol. 4) Výsledky zapište do tabulky a v závěru okomentujte. Tabulka 1 – s přídavkem blanku (deionizovaná H[2]O): Kreatinin Kys. močová Triglyceridy Cholesterol (umol/l) (umol/l) (mmol/l) (mmol/l) Vzorek 1: 0 mg/l H[2]O Vzorek 2: 40 mg/l H[2]O Vzorek 3: 80 mg/l H[2]O Vzorek 4: 160 mg/l H[2]O Tabulka 2 – s přídavkem dicynonu (D): Vzorek 1: 0 mg/l D Vzorek 2: 40 mg/l D Vzorek 3: 80 mg/l D Vzorek 4: 160 mg/l D ΔKreatinin (%) ΔKys. močová (%) ΔTriglyceridy (%) ΔCholesterol (%) Vzorek 2 Vzorek 3 Vzorek 4 Závěr: III. Ověření rozsahu měření metody 1. sledování průběhu reakce metody použité pro stanovení glukózy · v databázi analyzátoru prohlédněte průběh reakce vzorku sérové glukózy o koncentraci cca 13,3 mmol/l · z průběhu reakční závislosti určete o jaký typ reakce se jedná 2. vymezení horní hranice pracovního rozsahu metody · Připravte zásobní roztok glukózy 200 mmol/l ve 100 ml odměrné baňce, M[r] (glu)=180,16 g/mol. · Ze zásobního standardu glukózy koncentrace 200 mmol/l připravte ředěním deionizovanou vodou řadu vzorků o koncentracích uvedených v tabulce 1 tak, aby výsledný objem naředěných vzorků byl 2,0 ml. · Vzorky dobře promíchejte a analyzujte a změřte na analyzátoru. · Naměřené hodnoty koncentrací zapište do tabulky 1 (bez opakování, bez ředění). · V Excelu sestrojte graf závislosti průměrných koncentrací glukózy nalezených ve vzorcích na teoretických koncentracích z tabulky 1; ze znázorněné závislosti odhadněte horní hranici pracovního rozsahu analytické metody. Tabulka 1 Číslo vzorku Koncentrace glukózy Naměř. Konc. gluk. (mmol/l) (mmol/l) (teoretická) 1 200 2 100 3 50 4 25 5 12,5 6 6,25 Závěr:_____________________________________________________________________________________________ _____________________________________ ____________________________________________________________ IV. Jiný biologický materiál 1) Připravit vzorky JBM, seznámit se se zadáváním požadavků na vyšetření JBM do LIS, seznámit se s metodami pro vyšetření JBM. 2) Posoudit výsledky vzorků (transsudát x exsudát), pokuste se zjistit, jaký jiný biologický materiál je obsažen v analyzovaném vzorku. Závěr:_____________________________________________________________________________________________ _____________________________________ ____________________________________________________________