5. Přednáška Orální histologie a embryologie DEHY 18. 10. 2023 Periodoncium Sklovina Cement Mikroskopická stavba periodoncia, jeho funkce a klinický význam periodont (3) závěsný aparát (2+3+4) parodont 1+(2+3+4) gingiva cement ozubice alveolus • Zubní lůžko (alveolus) každý zub má samostatné • Ozubice (periodoncium) - husté kolagenní vazivo, které upevňuje kořen zubu v lůžku • Závěsný aparát zubu = ozubice + cement zubního kořene + stěna zubního lůžka tvoří anatomickofunkční celek • Parodont = závěsný aparát zubu + dáseň • Závěsný aparát odděluje od dutiny ústní dáseň (gingiva), která pevně přirůstá k povrchu krčku zubu a vytváří kolem něj Gottliebovu epitelovou těsnící manžetu Závěsný aparát zubu Fixuje zub v alveolu, pružný závěs zubu který vyrovnává a kompenzuje síly působící na zub během mastikace Transformuje tlakové síly při žvýkání v tahové, kterým zubní lůžko lépe odolává a je na ně také lépe přizpůsobeno Vyplňuje prostor mezi kribriformní ploténkou zubního lůžka a kořenem zubu Charakter – husté kolagenní vazivo uspořádaného typu Kolagenní vlákna - snopečky vláken – periodontální vazy (ligamenta) Tloušťka periodontia – 0,18 – 1,0 mm, nejtenčí ve střední části kořene Konce ukotveny v zubním cementu a lamelózní kosti kribriformní ploténky (jako Sharpeyova vlákna) Ozubice – periodontium Vzniká z dentálního vaku záhy po zahájení vývoje zubního kořene Buněčné složení: Fibroblasty a Fibrocyty ECM: Kolagenní vlákna (I, III a XII) Jsou rychle obnovována Uspořádána do svazečků Elastická vlákna Oxytalanová vlákna (nedospělá elastická vlákna) Mikroskopická stavba Uspořádání (průběh) periodontálních ligament 3 skupiny: Gingivální vlákna Transseptální (interdentální) vlákna Alveolární vlákna (fibrae principales) Gingivální vlákna – poutají gingivu ke krčku zubu nejsou ve skutečnosti součástí periodoncia, neboť leží v lamina propria dásně 4 směry průběhu (skupiny): Dentogingivální - od cementu krčku k volné a připoutané gingivě (vějíř), nejpočetnější Alveologingivální - od okraje alveolu k volné a připoutané gingivě Cirkulární - uložena ve volné gingivě a kruhovitě objímají krček zubu Dentoperiostální - od krčku přes okraj alveolu na povrch vestibulární nebo linguální ploténky Dentogingivální Dentoperiostální Mesiodistálně nad interalveolárními septy Zpevňují lineární seřazení zubů v oblouku a tvoří podklad pro interdentální papily Modelují tvar hřebenů interalveolárních sept Konfigurace na rtg snímcích (při inklinaci sešikmení septa a deprese) Transseptální vlákna - spojují krčky sousedních zubů Mezi kořenem a kribriformní ploténkou zubního lůžka (os alveolare) Jsou nejpočetnější Hřebenová, horizontální, šikmá, apikální a interradikulární Alveolární vlákna Hřebenová – od zubního krčku k periostu interalveolárního septa nebo k periostu koronálního okraje zubního lůžka. Funkce: Zabraňují vylézání zubu (někdy chybějí) Horizontální - v koronální třetině kořene a zubního lůžka Jsou postavena kolmo k podélné ose zubu Funkce - Brání laterálním (horizontální) pohybům zubů Alveolární vlákna Šikmá - vyplňují střední a apikální třetinu lůžka Diagonální průběh – úpony na cementu leží více apikálně než inzerce v kribriformní ploténce Funkce - Brání vtlačování kořene do lůžka Apikální – od apexu ke dnu zubního lůžka Radiální průběh Funkce – brání vylézání zubu z lůžka Interradikulární - pouze u vícekořenových zubů Odstupují z místa větvení zubu a inzerují na vrcholu mezikořenového kostěného septa fce - zabraňují vylézaní zubu a jeho rotaci interradikulární septum interradikulární septum Intermediální pleteň Část vláken má pouze jeden úpon - buď v cementu nebo na kribriformní ploténce, kdežto druhý konec je volný Z nich se splétá tzv. intermediální pleteň: plexus intermedius Slouží jako morfologická a funkční rezerva pro potenciální přestavbu zubního závěsu Intersticiální oblasti Okrsky řídkého kolagenního vaziva, oddělují skupiny vláken Prochází zde cévy a nervy – odpovídají za vitalitu a výživu periodoncia Na preparátech se jeví jako světlejší buněčná ložiska s hojnými cévami a amorfní základní hmotou Arterioly z gingiválních, pulpárních a interalveolárních tepen V intersticiálních prostorách se rozpadají v kapilární síť, jejíž větve zasahují i mezi vlákna závěsu Prokázána lymfatická drenáž Cévní a nervové zásobení periodontia Inervace Senzitivní zakončení 3 typů: • Volná (bolest) • Knoflíkovitá a • Keříky (taktilní podněty) Ostrůvky epitelových buněk: epitelové perly Malassezovy ostrůvky (ERM = Epithelial rests of Malassez) Jedná se o zbytky rozpadlé Hertwigovy epitelové pochvy (HERS = Hertwig Epithelial Root Sheath) Tvoří zásobu kmenových buněk. Mohou se podrobovat EMT (Epithelial to Mesenchymal Transition) Granulomy a cysty epitelového původu Cementikly Příležitostné útvary v periodonciu ERM = Epithelial rests of Malassez Změny při ztrátě antagonisty (nonfunkce): • Zúžení periodontia • Prořídnutí a rozvolnění vláken • Tloustnutí cementu • Ztenčení kribriformní ploténky Změny následkem nadměrného zatěžování: Akutní (trauma) – krevní výrony, ruptura vláken, nekróza a rezorbce, ankylóza Chronické – hypercementóza Změny v periodonciu během života Periodontální vazy (ligamenta) - terminologie Gingivální vlákna - fibrae gingivales (fibrae gingivodentales, fibrae gingivales circulares) Transseptální vlákna - fibrae interdentales Alveolární vlákna - fibrae alveolodentales (fibrae principales) Hřebenová - lig. dentale superius Horizontální - fibrae alveolodentales transversae Šikmé - lig. dentale inferius Apikální - fibrae apicales Interradikulární - fibrae interradiculares Gingiva Dáseň (gingiva) • Oddíl sliznice dutiny ústní mastikačního typu, okolo zubních krčků ke kterým je pevně přirostlá • Křehká a tuhá, bledě růžová barva, velmi odolná vůči tlaku a tření • Neposunlivě spojena s podkladem (mukoperiost) Mukogingivální linie • Tvoří hranici mezi dásní a sliznicí pokrývající zbytek alveolárního výběžku • Je patrna na vestibulární straně horní a dolní čelisti a na linguální straně dolní čelisti Topografie dásně: 2 oddíly Gingiva volná – gingiva libera (gingiva supraalveolaris nadalveolární dáseň) Gingiva připoutaná – gingiva affixa (gingiva alveolaris) Paramarginální rýha 0,5 - 1,5 mm od okraje volné dásně patrna jen na histologických řezech Dáseň (gingiva) (Záchovná stomatologie a parodontologie, Elmar Hellwig et al.) Gingiva libera má hladký povrch. Mezi ní zubem je cirkulární brázdička – 1-2 mm hluboká – sulcus gingivalis (fyziologická kapsa) Gingiva affixa - hrbolatý povrch – a tvoří pod paramarginální rýhou pruh šířky 4-6 mm Mezi sousední zuby volná gingiva vybíhá do trigonum interdentale ve výběžky tvaru stříšky Mezizubní - interdentální papily (papilae gingivales) Každá má vestibulární a linguální část, spojeny interdentálním sedlem Trigonum interdentale Sulcus gingivalis • Cirkulární rýha, žlábek hluboký 1-2 mm • Na dno žlábku prosakuje z cév v dásni tekutina podobná plazmě - liquor gingivalis • Tekutina má antimikrobiální a protizánětlivé vlastnosti, obsahuje proteiny a sacharidy Mnohovrstevný dlaždicový epitel • Zrohovatělý • Na straně přivrácené k zubu nerohovatí - Sulkulární epitel • Zde si uchovává znaky nediferencovaného epitelu, který sroste s tvrdými tkáněmi zubu epitelový úpon, Gottliebova manžeta Mikroskopická stavba dásně Epitelový úpon, těsnicí epitelová manžeta (Gottliebova manžeta) Brání průniku sliny, bakterií, toxinů a částic potravy ze sulcus gingivalis do periodoncia Vyznačuje se srůstem sulkulárního epitelu s tvrdými tkáněmi zubu v oblasti zubního krčku Zóna srůstu leží pod úrovní sulcus gingivalis Šíře 0,25 - 1 mm Doba obnovy je cca 4-6 dnů: dobře regeneruje po mechanickém poškození Epitel se neustále aktivně obměňuje. Aktivní kmenové buňky Buňky manžety jsou v několika vrstvách a jsou orientovány delší osou s povrchem zubu Gingivodentální uzávěra (junctional epithelium) Následek: uvolnění zubu, viklavost, v těžších případech vypadnutí zubu Gingivální recese u paradentózy Norma: u dočasné dentice a zdravých trvalých zubů do 2-3. decenia - apikální konec manžety v úrovni cementoemailové hranice S věkem se manžeta přesouvá stále více apikálně, až nakonec se přesune na cement zubního krčku Ve stáří může dojít i k obnažení cementu a stavu, kdy se klinická korunka stane větší než korunka anatomická Sestup manžety = gingivální recese SKLOVINA (enamelum, enamel, email, substantia adamantina, s. vitrea) Sklovina Sklovina (enamelum, enamel, email, substantia adamantina, s. vitrea) - Nebuněčná hmota, která kryje anatomické korunky - Ektodermálního původu - Nejtvrdší tkáň (křehká) v těle obratlovců - Acelulární Tloušťka: U trvalých zubů +- 2,5 mm (na řezacích hranách nebo kousacích ploškách) U dočasných zubů +- 1,3 mm Na zubním krčku jen +- 0,1 mm Fyzikální vlastnosti - Mohsova stupnice tvrdost 5 (nejtvrdší tkáň lidského těla) - Průsvitná, barva - odstíny bílé - závisí na tloušťce a stupni mineralizace Šedobílá - na okluzních plochách Bílá - ve středním oddílu korunky Nažloutlá - poblíž krčku – prosvítá barva dentinu - Velmi odolná k abrazi - Povrchová sklovina tvrdší, hustší a méně porézní (aprizmatická) - Tvrdost se snižuje směrem k dentinosklovinné hranici a od kousacích plošek ke krčku Chemické složení Anorganická část 96 - 97 % • Hydroxyapatit tvořící hexagonální krystaly • Fluoroapatit je spíše na povrchu skloviny, je tvrdší • Hlavní prvky ve sklovině: Vápník, fluor, hořčík, fosfor (a jiné). • Ukládání dalších látek (např. olovo) vlivem znečištěného prostředí – co se jednou uloží, tak ve sklovině zůstane. Voda 2 - 3 % Organická část 1 % Proteiny nekolagenové povahy a) Amelogeniny - 90 % - Hlavní produkt sekretorní fáze ameloblastů - kulovité polymery, regulace růstu sklovinných hranolů b) Proteiny ne-amelogeninové povahy : - Enamelin - Nukleace a usměrnění růstu krystalů - Ameloblastin – adhezivní molekula - Kalikrein 4 – Proteasa secernovaná ameloblasty na konci sekretorní fáze - Tuftelin – stabilizuje spojení s dentinem c) Enzymatické proteiny - Metaloproteinázy (MMP20) – degraduje amelogenin - alkalická a kyselá fosfomonoesteráza a serinproteináza1 Chemické složení Anorganická část 96 - 97 % Voda 2 - 3 % Organická část 1 % Mikroskopická stavba Složitá vnitřní, druhově specifická organizace Sklovinné hranoly – prizmata a interprizmatická hmota probíhají od dentinosklovinné hranice k povrchu skloviny, asi 8,5 milionu (řezáky) Ultrastruktura hranolů Skládají se z podélně řazených krystalků hydroxyapatitu, vložených do proteinové matrix (amelogeniny, Proteiny ne-amelogeninové povahy) Struktura interprizmatické substance stejná, krystaly postaveny šikmo nebo kolmo na prizmata Enamel decussation pattern (rodents) • Very precise and homogeneous organization of enamel microstructure • Little differences within different species • Fundamental mechanisms controlling decussation pattern formation are evolutionary conserved Daniela C. Kalthoff, 2007 Wood Mouse (Apodemus sylvaticus) Daniela C. Kalthoff Goldberg et al, 2014 Mus musculusHeterosminthus gansus (late Miocene) Vnější znaky skloviny Retziusovy proužky Perikymata Hunterovy - Schregerovy proužky Neonatální linie Enamel tuffs Vnější znaky skloviny Hunterovy - Schregerovy proužky • Důsledek změn směru procházejících sklovinných prismat • Průběh sklovinných prismat se mění ve všech směrech, zejména u premolárů a molárů. • Opticky se jeví jako střídající se světlé a tmavé proužky Lynch et al., British dental journal, 2010 Inkrementální (přírůstkové) linie skloviny Sklovina přirůstá periodicky: vliv cirkadiálních rytmů Projev periodické aktivity ameloblastů nebo společné mineralizace většího počtu denních přírůstků Na základě přírůstkových linií rozlišujeme charakteristické proužkování skloviny a) Denní linie - Způsobují příčné pruhování prizmat (cross-striation), velmi tenké 2,5 - 6 μm - Střídání fáze intenzivní sekrece s fází odpočinkovou - Souvisí s cirkadiálními rytmy b) Retziusovy linie (sklovinné striae) - Pozorovatelné v optickém mikroskopu na zubních výbrusech, vzdálenost 25-35 μm - Od dentinosklovinné hranice k povrchu skloviny - Tvoří perikymata (labiální plošky předních zubů - incisivi, caninus) c) Neonatální linie - Výrazný pruh méně mineralizované skloviny - Vzniká v důsledku náhle změny příjmu potravy při narození - U zubů primární dentice a M1 - Patří mezi Retziusovy linie (Timothy G. Bromage et al., 2015, American Journal of Physical Anthropology; Hard Tissue Biology, Metabolomics, and Life History) Denní linie Denní – cirkadiální přírůstkové linie (krátké šipky) jsou patrné mezi Retziusovými – vícedenními proužky (dlouhé šipky) Počet příčných proužků mezi sousedními Retziusovými liniemi se nazývá „repeated period“. U lidského moláru je to 5-10 proužků. (Timothy G. Bromage et al., 2015, American Journal of Physical Anthropology; Hard Tissue Biology, Metabolomics, and Life History) Denní linie Prasečí sklovina Denní – cirkadiální přírůstkové linie (krátké šipky) jsou patrné mezi Retziusovými – vícedenními proužky (dlouhé šipky) Retziusovy linie Retziusovy linie Perikymata Neonatální linie Inkrementální (přírůstkové) linie skloviny projev periodické aktivity ameloblastů nebo společné mineralizace většího počtu denních přírustků prizmat a) Denní linie - Způsobují příčné pruhování prizmat (cross-striation), velmi tenké 2,5 - 6 μm - Střídání fáze intenzivní sekrece s fází odpočinkovou - Souvisí s cirkadiálními rytmy b) Retziusovy linie (sklovinné striae) - Pozorovatelné v optickém mikroskopu na zubních výbrusech, vzdálenost 25-35 μm - Od dentinosklovinné hranice k povrchu skloviny - Tvoří perikymata (labiální plošky předních zubů - incisivi, caninus) c) Neonatální linie - Výrazný pruh méně mineralizované skloviny - Vzniká v důsledku náhle změny příjmu potravy při narození - U zubů primární dentice a M1 - Patří mezi Retziusovy linie Aprizmatická sklovina • 20-70 um tlustá vrstva na povrchu korunky bez prizmat • Tvrdší a více mineralizovaná, obsahuje více fluoru, • Tvoří se před ukončením aktivity ameloblastů • Krystaly hydroxylapatitu uspořádány souběžně a kolmo k povrchu emailu Dentinosklovinná hranice • Hranice mezi sklovinou a dentinem, tvoří funkční napojení těchto dvou tvrdých tkání. • Vývojově se nachází v místě bývalé bazální membrány ameloblastů • Na podélných preparátech má vroubkovaný průběh (girlandy) • Sklovinná prizmata Sklovinná vřeténka (fuzus enameli) až 100 um dlouhá prodloužení dentinových tubulů do skloviny Regenerace skloviny Sklovina neregeneruje! Ameloblasty zanikají během erupce Hypoplazie skloviny Sklovina je měkká a drobivá etiologie: • Poškození ameloblastů a předčasné ukončení jejich činnosti • Genetické příčiny (amelogenesis imperfecta) • Dlouhodobě zvýšený přísun fluoridů (5 násobné zvýšení fluoridů v pitné vodě) • Tetracyklinová antibiotika - inkorporována do skloviny během kalcifikace • Horečnaté stavy Reparace skloviny Dochází ke zpětné remineralizaci poškozené skloviny působením slin Věkové změny skloviny - Obrušování – v pokročilejších stádiích může dojít až k expozici dentinu - Změna chemického složení – zvyšování obsahu fluoridů, snižování obsahu vody a organických sloučenin - Změna pigmentace skloviny – inkorporace organického materiálu do skloviny, tloustnutím dentinu a jeho tmavnutí - Změny permeability – s věkem se snižuje, krystaly během života rostou a zmenšují se póry mezi nimi Zubní cement (cementum, substantia petrosa) • Tvrdá, kosti podobná tkáň, kryjící kořen zubu • Nažloutlá barva • Avaskulární hmota • Nedochází v něm k přestavbě (na rozdíl od kostní tkáně) • Může být resorbován cementoklasty - v období výměny zubů • Je tvořen stále v průběhu života apozicí nových vrstev vitální tkáně. Přirůstání probíhá periodicky – inkrementální linie. • Vývojově pochází z ektomezenchymu • Tvoří ho: • Buněčná hmota • ECM Zubní cement • Kolagenní vlákna (zejména kolagen 1) periodontálních ligament, která jsou zanořena na jedné straně v cementu a na straně druhé v periostu alveolární kosti • Tvoří funkční uchycení zubu v zubního alveolu • Probíhají až do acelulárního cementu, kde plně mineralizují Sharpeyova vlákna Mikroskopická stavba cementu Cementocyty, Cementoblasty, Cementoklasty (výměna zubů) Mezibuněčná hmota (ECM) = Cement Cementoblasty Buňky, které se aktivně podílí na tvorbě ECM Cementocyty Buňky obklopené cemenózní tkání, těla uložena v dutinkách (lacunae), výběžky v chodbičkách (obdoba osteocytů v kosti) – canaliculi cementi Cementoklasty Podílí se na resorbci cementu dočasných zubů Acelulární (primární) Celulární (sekundární) Podle typu ECM Buňky Cementová matrix Tvoří ji kolagenní vlákna a zvápenatělá amorfní extracelulární hmota Kolagenní vlákna probíhají ve snopečcích jejichž orientaci určují síly, které za zub působí Cement podle vzniku dělíme na: Primární (acelulární) Neobsahuje cementocyty V rozsahu celého zubního kořene Nasedá přímo na zubovinu Tloušťka: 10 do 200 um Sekundární (celulární) Obsahuje cementocyty V místech zatížení nebo v důsledku stárnutí Zejména na zubních apexech Dorůstá až do tloušťky 500 um Hyperplasie cementu (hypercementóza) Abnormální ztluštění cementu Nejčastější příčinou hypercementózy bývá dlouhodobé a nadměrné zatěžování zubů Cementikly – v PDL Porovnání tvrdých zubních tkání (a lamelózní kosti) sklovina zubovina cement lamelózní kost barva bílá (až namodralá) slonová kost žlutohnědá žlutohnědá anorganická komp. váh. % (obj. %) organická komp. H20 96 (86) 1 (2) 3 (11) 70 (45) 20 (30) 10 (25) 61 (33) 27 (31) 12 (36) 45 (23) 30 (37) 25 (40) kolagenní vlákna nejsou ano (kolmo na dentinové tubuly) ano (plsť) ano (v lamele stejná orientace) buňky Ameloblasty (v dospělosti chybí) Odontoblasty (na pulpárním povrchu dentinu) Cementoblasty (cementocyty) Osteoblasty osteocyty krevní cévy ne ne ne ano (v Haversových kanálcích) nervy ne ano (penetrují do dentinových tubulu) ne ano (v Haversových kanálcích) Postupy užívané ke studiu mikroskopické stavby zubů ve světelné mikroskopii se užívají 2 způsoby zpracování: 1. zubní výbrusy 2. obarvené řezy zhotovené z odvápněného zubu 1. Zubní výbrusy 50 - 70 µm silné ploténky zhotovené broušením (Pomůcky: pilka, karborundový kotouček, jemné brousky, brusné prášky a pasty během broušení se musí ploténka svlažovat vodou hotový výbrus se uzavře do kanadského balzámu, který se při montování nad plamenem ohřeje - tak ve výbrusu zůstanou zachovány všechny dutinky a kanálky příprava výbrusu vyžaduje velkou zručnost) 2. Obarvené řezy z odvápněného zubu příprava zdlouhavá: odvápnění zubu, zalití zubu, zhotovení a obarvení řezů Odvápnění - dekalcifikace zubu: odvápňovací činidla převedou nerozpustné vápenaté soli (fosfát a karbonát) na soli ve vodě rozpustné doba potřebná k odvápnění závisí na velikosti objektu a na druhu dekalcifikační tekutiny a činí několik dnů, týdnů až měsíců dekalcifikační tekutiny: ➢ kyseliny (např. 5 % kyselina dusičná, 5 % kyselina trichlóroctová a 22 - 23 % kyselina mravenčí) - 1 týden ➢ komplexotvorné sloučeniny - EDTA - etyléndiamintetraoctová kyselina (Chelaton, Komplexon) - 4 týdny – 3 měsíce velmi dobře zachovávají strukturu tkáně i její barvitelnost zalití - celoidin nebo celoidin-parafin krájení - sáňkový mikrotom (odvápněný zub lze zmrazit a krájet na cryotomu); řezy se barví Harrisovým hematoxylinem a eozinem Obarvený řez z odvápněného zubu ! na výbrusech - nejsou zachovány měkké tkáně na odvápněných zubech schází sklovina Zub – kořen Predentin odontoblasty Cement Periodontium Dentin Pulpa Gingiva libera (1) Paramarginální rýha Gingiva affixa (2) Gingivodentální uzávěra (Gottliebova těsnící epitelová manžeta) Sulcus gingivalis 1 2 Šikmý řez dentinem s dentinovými kanálky. SEM, primární zvětšení 1 500x Dentin na lomu: vlevo dentinové tubuly podélně, vpravo–dentinové tubuly příčně se i zbytky Tomesových vláken. SEM, primární zvětšení 1 500x