Katedra laboratorních metod Bakalářské studium – zdravotní laborant LF MU Klinická biochemie – cvičení Praktické cvičení č.1a datum:__________ jméno:______________________ Téma praktika: Absorbční spektrum barevného produktu reakce (glukóza) Stanovení absorbčního maxima Přístroje a pomůcky: Spektrofotometr Helios b Stojánky, zkumavky, mikropipety, dávkovače, špičky, standardní roztok glukózy, souprava BLT Glukóza Úkoly: 1) Připravte vzorky pro analýzu o objemu 1 ml a koncentracích 5,0 a 10,0 mmol/l ředěním standardního roztoku glukózy o c = 20 mmol/l. Tabulka ředění: Vzorek č. 1 2 Koncentrace (mmol/l) 5,0 10,0 Standard – 20 mmol/l (ml) Destilovaná voda (ml) 2) Současně zpracujte blank a naředěné vzorky tak, že smícháte 20 ml vzorku (do blanku 20 ml destilované vody) a 2,00 ml činidla ze soupravy. Reakční směs nechejte inkubovat 25 minut při laboratorní teplotě bez přístupu přímého slunečního světla. 3) Manuální proměření absorbčního spektra a stanovení absorbčního maxima: u jednotlivých vzorků proměřte absorbční spektrum po 20 nm v rozmezí vlnových délek 380 – 700 nm. 4) Výsledky měření zaznamenejte do tabulky, sestrojte graf (absorbční spektrum) a z grafu stanovte absorbční maximum produktu stanovení glukózy. l (nm) A vzorek 1 (5,0 mmol/l) A vzorek 2 (10,0 mmol/l) 380 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700 5) Proveďte plně automatické proměření absorbčního spektra v daném rozmezí vlnových délek pomocí programu „INTELLISCAN“ (měření se provádí po 2 nm), vytiskněte graf absorbčního spektra a výsledky manuálního i automatického měření porovnejte. Závěr: Katedra laboratorních metod Bakalářské studium – zdravotní laborant LF MU Klinická biochemie – cvičení Praktické cvičení č.1b datum:__________ jméno:______________________ Téma praktika: Vliv vlnové délky na měřící rozsah Přístroje a pomůcky: Spektrofotometr Helios b Stojánky, zkumavky, mikropipety, dávkovače, špičky, standardní roztok glukózy, souprava BLT Glukóza Úkoly: 1) Připravte kalibrační standardy o objemu 1,00 ml a koncentracích 2,5 5,0 7,5 10,0 15,0 20,0 mmol/l ředěním standardního roztoku glukózy o c = 20,0 mmol/l. Tabulka ředění: Standard č. 1 2 3 4 5 6 c (mmol/l) 2,5 5,0 7,5 10,0 15,0 20,0 st.r.20 (ml) Dest.H[2]O(ml) 2) Současně zpracujte blank a naředěné standardy tak, že smícháte 20 ml standardního roztoku (do blanku 20 ml destilované vody) a 2,00 ml činidla ze soupravy. Reakční směs nechejte inkubovat 25 minut při laboratorní teplotě bez přístupu přímého slunečního světla. 3) Měření proveďte při vlnových délkách 380, 500, 600 a 700nm proti blanku. 4) Výsledky měření zaznamenejte do tabulky. Standard A l380nm Standard A l500 nm Standard A l600 nm Standard A l700 nm 2,5 2,5 2,5 2,5 5,0 5,0 5,0 5,0 7,5 7,5 7,5 7,5 10,0 10,0 10,0 10,0 15,0 15,0 15,0 15,0 20,0 20,0 20,0 20,0 5) Pro každé měření sestrojte kalibrační graf a určete při které vlnové délce má metoda nejvyšší citlivost. Závěr: