Nové parametry Nové parametry •Uplatnění nových klinických markerů je přímý důsledek základního a aplikovaného výzkumu •Nový analyt musí předčit zavedené metody specificitou a sensitivitou (AUC křivka) oNapř. vysoce sensitivní kardiální troponiny téměř nahradily ostatní markery pro AIM •Dostupností oPřevedení řady analytů do POCT režimu •Doplňují stávající markery oNapř. aktivní formy markerů (vitamínu D, B12) •Cenou oToxikologický screening pomocí separačních metod vs. Imunochemické proužky Nové parametry •Jedná se především o • •Zánětlivé markery •Specifické proteiny NGAL •Neutrofilní s gelatinázou asociovaný lipocalin • •Přítomen v tkáni plic, žaludku, tenkého střeva a ledvin •Při poškození ledvin NGAL vylučován do moči a plazmy •Časný ukazatel akutního poškození ledvin - hladina stoupá v moči a krvi během dvou hodin od vzniku poškození ledvin • NGAL •Metody: •Imunoanalýza – Abbott, Roche •Imunoturbidimetrie – zesílená na polystyrénových • částicích •ELISA – firma Bioporto (dodává Lab Mark) • •Materiál: U,P,S NGAL • • •Cut off - moč:132 ng/ml Presepsin •nový specifický marker septických stavů •rozpustný N-terminální fragment CD14 •CD14 je glykoprotein exprimovaný na povrchu membrány monocytů a makrofágů •CD 14 je receptorem pro lipopolysacharidy bakterií, navázáním se aktivuje TLR4 prozánětlivá signalizační kaskáda a zánětlivá reakce •mechanizmus vzniku presepsinu – rozštěpení membrány CD14 lysozomálními enzymy granulocytů •CD14 je uvolňován do krve a vlivem plazmatických proteáz štěpen na sCD14-ST = PRESEPSIN • • https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcR6FwKoJs9RiYS1pw17URl5KBcvW-okZZjRXHoz1hNWhcx odLKiPg Presepsin •zvyšuje se při systémové i lokální bakteriální infekci • •rychlý vzestup hladiny v krvi (cca za 2 hodiny) • •důležitá je dynamika koncentrace • •uplatnění trendu ve dnech 1-7 při předpovědi 30 denní mortality • https://encrypted-tbn2.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcShCBuN0atoEmBMd1TstfnFnXbJ6_AW7rjyATyiaV_Ae5r 7itXdGg Použitý princip • • •stanovení presepsinu na přístroji PATHFAST, Mitsubishi Chemical (dodává Medesa) ochemiluminiscenční enzymová imunoanalýza o s MAGITRATION technologií oodběrový materiál – heparinát litný ocena 350 Kč/test, souprava 21000 Kč na 60 testů • Referenční rozmezí • • Presepsin 0 - 337 pg/ml • Presepsin • •marker sepse pro diagnostiku, monitorování i prognózu podobně jako PCT • •presepsin a PCT se nechovají zcela totožně • •snižuje se pomaleji než PCT, při špatné prognóze zůstává vysoký • •jeví se jako lepší ukazatel negativní prognózy • •důležitý je trend, ne absolutní hodnota (uplatnění při • předpovědi 30 denní mortality) • •výhodné kombinovat více markerů sepse dohromady • • • • Lp-PLA2 •- fosfolipáza A2 asociovaná s lipoproteiny • •- výskyt plazma nebo sérum, •- enzym hydrolyzující oxidované fosfolipidy • uvolňuje lyzofosfatidylcholin s prozánětlivými účinky • podporuje protržení aterosklerotického plátu •- vázána na lipoproteiny o nízké hustotě • • -vysoká hladina Lp-PLA2 poukazuje na nestabilní • atrosklerotický plát, může vést k IM nebo CMP •- nízká hladina Lp-PLA2 - stabilní aterosklerotický plát • prokázána negativní prediktivní hodnota • • Stanovení Lp-PLA2 - PLAC test • •ELISA a) •Fotometrická metoda Cut off •Hodnoty Lp-PLA2 menší než 200ng/ml - nízké riziko • •Hodnoty Lp-PLA2 v rozmezí 200-235ng/ml – hraniční •riziko • •Hodnoty Lp-PLA2 větší než 235ng/ml - považovány za •vysoké riziko • Predikční markery preeklampsie, Roche •PlGF - placentární růstový faktor •zodpovědný za normální funkci placenty •u fyziologické gravidity koncentrace PlGF narůstá během • prvních dvou trimestrů a klesá na konci gravidity •u preeklampsie nižší • •sFlt-1 - rozpustná tyrozinkináza-1 •má vliv na ukončení těhotenství •hladina zůstává stabilní v prvních dvou trimestrech, pak narůstá až do porodu •u preeklampsie se sFlt-1 zvyšuje již v časných fázích gravidity •zvýšení je spojeno s ischémií a hypoxií • •Poměr sFlt-1/PlGF •citlivější ukazatel •při preeklampsii vyšší • • • Aktivita sFlt-1 a PlGF na endotelu cév během normálního těhotenství a při preeklampsii Sdělte stručný přehled prezentace. Popište hlavní záměr prezentace a v čem spočívá její důležitost. Uveďte každé z hlavních témat. Aby se posluchači dokázali v prezentaci orientovat, můžete tento snímek s přehledem opakovat během celé prezentace vždy se zdůrazněním konkrétního tématu, které se chystáte probírat jako další. Princip stanovení sFlt-1, PlGF •Heterogenní nekompetitivní imunoanalýza na systémech Roche •Protilátka značená rutheinovým komplexem •Separace na mikročásticích •Elektrochemiluminiscenční reakce - substrát tripropylamin •Oxidace na platinové elektrodě •Vznik chemiluminiscenčního záření • • • Princip stanovení sFlt-1 ROC křivka pro poměr sFlt-1/PlGF – 16.-20. týden gravidity Zdravé 81 Preeklamptičky 39 AUC = 0,863 Časná PE Zdravé 81 Preeklamptičky 16 AUC = 0,970 Očekáváné hodnoty, Roche Očekáváné hodnoty – 16.-20. týden gravidity Údaje firmy Roche Vypočítané hodnoty OKB FN Brno (81 zdravých) sFlt-1 (pg/ml) 5. perc. 708 527 95. perc. 2807 2333 PlGF (pg/ml) 5. perc. 66,2 56,6 95. perc. 289 252 sFlt-1/PlGF 5. perc. 3,5 4,4 95. perc. 25,7 22,9 Žlučové kyseliny •Hlavním produkt metabolismu cholesterolu •Různé hydroxyderiváty kyseliny cholanové •Základními žlučovými kyselinami jsou cholová a chenodeoxycholová •V organismu se zapojují do trávení, vstřebávání a metabolismu lipidů • Transportují se společně se žlučí do střeva, kde jsou z 95 % znovu resorbovány a vrací se do jater •Jsou ukazatelem správné funkce hepatocytů •Zvýšený obsah žlučových kyselin v séru je zaznamenán u pacientů s akutní hepatitidou, chronickou hepatitidou, jaterní steatózou a rakovinou jater • Indikace k vyšetření žlučových kyselin (S) • •Význam pro diagnostiku intrahepatální cholestázy těhotných (poruchu vylučování žluči do duodena) • •Ta zvyšuje riziko předčasného porodu či intrauterinní úmrtí plodu • •Sleduje se u pacientů s jaterní cirhózou • •Stanovení lze použít při studiu exkreční schopnosti jater nebo při studiu vrozených defektů metabolismu žlučových kyselin • Metody stanovení •Fotometrické stanovení o 3-α-hydroxysteroiddehydrogenasa (3-α-HSD) •žlučové kyseliny + NAD+ -->3-oxo žlučové kyseliny + NADH + H+ • NADH + NBT --> NAD + + formazan • •Formazan je měřen fotometricky při 405 nm, je přímo úměrný koncentraci žlučových kyselin •(NBT - nitrotetrazoliová modř) • •ELISA • Referenční rozmezí •M, Ž: 0-150 let do 8 µmol/l •Těhotné: do 11 µmol/l • • proGRP •Pro-Gastrin-Releasing Peptide • •Nádorový marker pro malobuněčný karcinomem plic (SCLC) •SCLC představuje agresivnější formu plicních karcinomů •ProGRP je prekurzorem GRP (GRP je neuropeptid) • proGRP - nejvhodnější marker SCLC •: •Uvolňován jen ve velmi malém množství u lidí, kteří trpí nenádorovými plicními chorobami a jinými zhoubnými nádory •Uvolňování proGRP stoupá již v ranném stádiu SCLC --> význam pro časnou detekci tumoru •Dále sledování průběhu choroby, účinnosti terapie a odhalení recidivy •Lepší než embryonální antigen (CEA) • • Rozdíly v koncentracích ProGRP u různých klinických stavů: Zdraví lidé 2 – 60 pg/ml Benigní onemocnění Většinou < 100 pg/ml (nejčastěji 15 – 80 pg/ml) Výjimka: pacienti s poruchou funkce ledvin - ProGRP zvýšeny i výrazně nad 100 pg/ml, a vzácně u některých onemocnění gastrointestinálního a urogenitálního traktu Nemalobuněčné plicní karcinomy a ostatní tumory (vyjma SCLC) < 100 pg/ml Malobuněčné plicní karcinomy > 100 pg/ml (za předp. norm. fce ledvin) při hodnotách kolem 150 pg/ml je téměř 100% jistota existence tumoru při hodnotách > 200 pg/ml se v 99% případů jedná právě o SCLC Metody stanovení •Imunoanalyticky - analyzátor Architect i 2000 SR firmy Abbott • •Dvoukroková chemiluminiscenční analýza, separace pomocí paramagnetických mikročástic • •Materiál pro analýzu: plazma, sérum • AMH (Anti- Műllerianní hormon) •Műllerian inhibiting faktor •Glykoprotein, patří mezi růstové transformující faktory (regulace tvorby a růstu malých ovariálních folikulů) •Produkován granulózními buňkami folikulů •Jeho role a množství se mění v závislosti na pohlaví a věku • Stanovení AMH •Biochemický ukazatel ovariální rezervy– hladina v krvi je odrazem „biologického věku“ vaječníků •Predikce nástupu menopauzy •Diagnostika polycystického ovariálního syndromu •Tumormarker některých typů karcinomů •Vyšetření u nejasného genitálu u novorozenců • • Význam v asistované reprodukci •Korelace hladiny AMH s počtem rostoucích folikulů a ziskem oocytů ve stimulovaných cyklech •Predikce odpovědi na kontrolovanou ovariální stimulaci (COS) •Vyšetření potenciálních dárkyň oocytů • • Metody stanovení •Automatická imunoanalýza – systémy Beckman • •ELISA Příklad interpretace hodnot AMH Prognosticky špatné AMH < 0,7 ng/ml Zdroj: www.advancedfertility.com SARS-CoV, RSV, Influenza Obsah obrázku text, vzdálené, regulátor, interiér Popis byl vytvořen automaticky Obsah obrázku monitor, tiskárna, elektronika, bílá Popis byl vytvořen automaticky Děkuji za pozornost •