Speciální vyšetření
Bourková L., OKH, FN Brno
substrát
↓
inkubační roztok
+
enzym
↓
buňka

obarvené precipitáty
↓
v místech přítomnosti enzymu
v buňce (v granulích)
Cytochemická reakce
hodnocení:
intenzita zbarvení granulí (precipitátu)
je úměrná množství enzymu
Myeloperoxidáza
•Princip:
Peroxidáza přenáší vodík z vhodného donoru na peroxid.
Donor je oxidován a přeměněn na nerozpustnou sraženinu.
•Hodnocení:
•v azurofilní granulaci leukocytů
•intenzita pozitivity: 0 až +++
•také se sleduje přítomnost Auerových tyčí (nemusí být při
panoptickém barvení viditelné přes jádro).
•fyziologická pozitivita:
myeloidní buňky 0 / +++
monocyty 0 / +
lymfocyty 0
•Klinický význam:
Rozlišení myeloblastické nebo monoblastické leukemie od
lymfoblastické leukemie
Lymfoblasty - negativní
Auerovy tyče
AML
Nespecifické esterázy
•Princip:
Buněčná esteráza reaguje se substrátem (např. alfa-naftyl-acetát nebo
alfa-naftyl-butyrát ) a nebo je reakce blokovaná NaF.
• inkubece jednoho nátěru bez NaF
• inkubece druhého nátěru s NaF
•Hodnocení:
• pozitivita v granulích v cytoplazmě leukocytů
• intenzita pozitivity: 0 až +++
• pozitivita bez NaF:
monocyty + až +++
myeloidní buňky, lymfocyty 0 až ++
• pozitivita po NaF:
monocyty zeslabení na 0 nebo +.
ostatních buňky: pozitivita stejná nebo snížená maximálně o (+)
•Klinický význam:
• k rozlišení AML M4 a AML M5
• ↑ NE + ↓ NE/NaF → monocytární buňky
• NE + NE/NaF – srovnatelná → myeloidní, lymfoidní buňky
Mono: ++/+++
Granulo: +
NE+NaF: 0
PAS (Periodic Acid Schiff)
•Princip:
sacharidy+kys.jodistá→aldehydy+Schiffovo barvivo→růžový precipitát
•Hodnocení:
• intenzita: 0 až +++
• vzhled (typ) pozitivity:
fyziologická pozitivita:
myeloidní buňky: difúzní zbarvení cytoplazmy
monocyty: jemně granulární pozitivita
lymfocyty: negativní, ojediněle výraznější granula
trombocyty a megakaryocyty: výrazně pozitivní
NRBC : negativní
patologická pozitivita.
lymfocyty - CLL: ve většině lymfocytů výrazná zrnitá pozitivita
blasty - ALL, nedif. leukémie: hrubozrná pozitivita
NRBC - patologické: hrubozrná pozitivita
•Klinický význam:
leukémie, MDS, anémie
VZHLED POZITIVITY
difúzní jemně granulární hrubozrnná/bloková pozitivita
……..…
……….
………..
●●●
●●●
●●●
AML - M6
pozitivita: difúzní, granulární
ALL
Typy pozitivity PAS
Poznámky
Cytochemická vyšetření hodnotit v souvislosti s:
•ostatním cytochemickým vyšetřením
•morfologickým hodnocením a rozpočtem kostní
dřěně
•stádiem vyzrávání buněk
S každým cytochemickým vyšetřením pacienta je
nutné vyšetřit i kontrolní preparát.
Cytochemické reakce
MPOX NE NE+NaF PAS
(typ pozizivity)
myeloid. b. -/+++ -/+ -/+ -/+
monocyt. b. -/+ +/+++ -/+ -/+
erytrocyt. b. - -/+ -/+ -/+
lymfoc. b. - -/+ -/+ -/+
MGK b. - -/+ -/+ -/+
Kyselá fosfatáza
•Princip:
Fosfatáza reaguje se substrátem nebo je reakce blokovaná kyselinou vinnou
(tartarátem). Reakce není blokována pokud je přítomen izoenzym 5. V místě
aktivity enzymu vzniká v cytoplazmě obarvná sraženina.
• inkubece jednoho nátěru bez kyseliny vinné
• inkubece druhého nátěru s kyselinou vinnou
•Hodnocení:
- pozitivita je úměrná množství enzymu v cytoplazmě
- fyziologická pozitivita:
lymfocyty, plazmatické buňky
granulocyty, monocyty, trombocyty
- pozitivita po kyselině vinné (tartaric acid):
pouze v lymfocytech (HCL) s izoenzymem 5 .
•Klinický význam:
- některé T - ALL, CLL
- pozitivita po kyselině vinné pouze v lymfocytech u
klasické formy HCL s přítomností izoenzimu 5
HCL - KF
Mikroskopické vyšetření retikulocytů
•V retikulocytech se barví supravitálně (bez fixace)
brillantcresylovou modří zbytky RNA.
•Pozitivita se hodnotí v 1000 erytrocytech
• normální hodnoty: 0,5 – 2,5 %
Cytochemické vyšetření zásobního Fe
• Zásobní (nehemové) železo ve formě Fe3+ (feritin, hemosiderin)
 v erytrocytech
 NRBC
 makrofázích
• Princip:
Fe3+ tvoří s ferrokyanidem draselným a kyselinou
chlorovodíkovou barevný komplex – berlínskou modř
•Hodnocení:
zelenomodrá granula
v erytrocytech (siderocyty)
v NRBC (sideroblasty)
zrnka v NRBC okolo 2/3 jádra (prstenčité sideroblasty)
v makrofázích (siderofágy)
•Normální hodnoty:
20 – 60 % pozitivních NRBC
2 - 4 siderofágy ze 6 nalezených makrofágů
•Klinický význam:
anémie
např.: sideropenické (nízké hodnoty)
sideroblastické (přítomné prstenčité sideroblasty,
zvýšené zásobní Fe)
hemolytické anémie (vysoké hodnoty)
refrakterní anémie (vysoké hodnoty)
Barvení Fe 3+
prstenčitý
sideroblast
siderofágy
Barvení Fe 3+
Hemoglobin F
• Princip
Nafixované, zaschlé nátěry se ponoří do pufru pH 3.3.
Hemoglobin A (adult hemoglobin) je v buňce rozpuštěn
a vyplaven, hemoglobin F (fetální hemoglobin) je ke
kyselému prostředí rezistentní a v erytrocytu zůstává.
Zbylý hemoglobin F se potom barví a odečítá
mikroskopicky.
• Hodnocení
procentuelní hodnocení sytě zbarvených erytrocytů
novorozenci: 50 - 90 % HbF
věk < 2 roky: 0 - 4 % HbF
věk > 2 roky: 0 - 2 % HbF
Hemosiderin v moči
•Princip
Fe3+ v hemosiderinu reaguje s kyselým
roztokem ferrokyanidu draselného na
ferrokyanid železitý, který vytváří krystalky
berlínské modři.
•Hodnocení
přítomnost modrých krystalů v moči
• normální nález: negativní
• pozitivní nález: + až +++
Osmotická rezistence
normální výsledek inkubace
příprava
fyziologický
roztok – kontrola
(bez hemolýzy)
0,9% voda
voda – kontrola
(absolutní hemolýza)
0,9% voda
kontrolní prostředí
patologický výsledek inkubace
snížená rezistence
zvýšená rezistence snížená rezistence