CYTOCHEMICKÁ
VYŠETŘENÍ
Vytisková Soňa
substrát
↓
inkubační roztok
+
enzym
↓
buňka

obarvené precipitáty
↓
v místech přítomnosti enzymu
v buňce (v granulích)
Cytochemická reakce
Alkalická fosfatáza v neutrofilech
•Princip: reakce substrátu v inkubačním roztoku s leukocytárním enzymem
(ALP) v neutrofilních granulích.
V místě reakce vzniká obarvený precipitát.
•Hodnocení: periferní krev, sekundární granulace v cytoplazmě
- neutrofilní segmenty
- neutrofilní tyče
- Intenzita zbarvení enzymu v cytoplazmě: 0 až ++++
•Klinický význam: odlišení leukemoidní reakce od CML
- zvýšená ALP: těhotenství, infekce s neutrofílií, polycytemie, aplastické
anemie, MDS, mnohočetný myelom
- snížená ALP: CML, PNH, sférocytární anemie a sideroblastické anemie.
2+ 3+
1+
2+1+
3+
4+
Myeloperoxidáza
• Peroxidáza je lysozomální kataláza a je přítomna v primárních azurofilních granulích neutrofilů, eozinofilů a
monocytů. Peroxidáza nevykazuje aktivitu v erytrocytech a v lymfocytech. S postupným vyzráváním
myeloidních buněk přibývá v cytoplazmě peroxidázové aktivity s nejvyšší pozitivitou v neutrofilních
segmentech. Eozinofily vykazují také peroxidázovou aktivitu, bazofily jsou negativní. V monocytech je aktivita
jemně granulární. Enzym není přítomen v červených krvinkách a lymfocytech.
• Princip: peroxidáza přenáší vodík z vhodného donoru (4-chlor-1-naftol) na peroxid. Donor je oxidován a
přeměněn na nerozpustnou sraženinu, ta vzniká v místě peroxidázové aktivity a je následně obarvena.
• Hodnocení: pozitivita v cytoplazmě leukocytů (primární granulace)
- Intenzita pozitivity se zvyšuje s vyzráváním buněk
- Hodnotí se procentuální zastoupení určité pozitivity (0 až +++)
- Kromě intenzity se sleduje také barvení Auerových tyčí (nemusí být při
panoptickém barvení viditelné, především pokud jsou přes jádro).
- Blastické buňky bez granulace mohou vykazovat přítomnost
peroxidázy, která není ještě zabudována do granulí
myeloidní buňky - granulárně pozitivní na + až +++
monocyty - jemná pozitivita
lymfocyty - negativní
• Klinický význam:
pomáhá rozlišit myeloblastickou nebo monoblastickou leukemii od lymfoblastické leukemie
AMMoL Lymfoblasty - negativní
Auerovy tyče
AML – M2 AML – M3
AML – M5b
ALL
Barvení lipidů sudanovou černí B
• Princip: sudanová čerň B barví různé typy lipidů (steroly, fosfolipidy, neutrální
tuky).
• Hodnocení: pozitivita v granulích leukocytů
- Intenzita pozitivity se zvyšuje s vyzráváním buněk
- Kromě intenzity se sleduje také barvení Auerových tyčí (nemusí být při
panoptickém barvení viditelné, především pokud jsou přes jádro).
- NH: myeloidní buňky - pozitivita + až +++
monocyty - jemná pozitivita
lymfocyty - negativní
• Klinický význam:
pomáhá rozlišit myeloblastickou nebo monoblastickou leukemii od lymfoblastické
leukemie
AML
AML
Auer.t.
Nespecifické esterázy
alfa-naftyl-acetát esteráza, butyrát esteráza
• Princip: Esteráza reaguje se substrátem nebo je reakce blokovaná NaF. V místě aktivity enzymu vzniká v
cytoplazmě obarvená sraženina.
• Hodnocení: pozitivita v cytoplazmě leukocytů (primární granulace)
- intenzita pozitivity se zvyšuje s vyzráváním buněk
- hodnotí se procentuelní zastoupení určité pozitivity (0 až +++)
- NH: monocyty - pozitivita + až +++
myeloidní b., lymfocyty - pozitivita 0 až ++
- po NaF: monocyty - zeslabení na + nebo 0.
ostatních b. - pozitivita stejná evt. snížená maximálně o +
• Klinický význam:
- k rozlišení AMLM4 a AMLM5.
- zvýšené hodnoty NE a zablokování NE - monocytární charakter buňky
Mono+++ Granulo+
NE + NaF
AML – M4
NE
AML – M4
NEF
AML – M5
NE
AML – M5
NEF
Chloracetátesteráza
specifická esteráza
• Princip: enzym (primární garanulace) reaguje se substrátem, vznik
barevné sraženiny v cytoplazmě
• Hodnocení: pozitivita v cytoplazmě leukocytů (primární granulace)
- intenzita pozitivity se zvyšuje s vyzráváním buněk
- hodnotí se procentuální zastoupení určité pozitivity (0 až +++)
- NH: myeloidní b. - od 0 do +++
monocyty - 0 až +
často pozitivní Auerovy tyčky.
• Klinický význam:
- většinou doplňující vyšetření
- u M4 pomáhá k odlišení granulocytární řady od monocytární.
(lze kombinovat dvojité barevní s butyrátesterázou)
M3
M3-Auer.tyče
PAS
PAS - Periodic Acid - Schiff
• Princip:
Průkaz polysacharidů
Kyselina jodistá rozkládá polysacharidy na dialdehydy, které dávají specifickou červenou
barvu se Schiffovým leukoprusinem.
• Hodnocení:
- procentuální hodnocení typu pozitivity
- intenzita pozitivity se zvyšuje s vyzráváním buněk
- hodnocení typu pozitivity
- typy pozitivity:
myeloidní buňky: difúzní zbarvení cytoplazmy
monocyty: jemně granulární pozitivita
lymfocyty - fyziologické: negativní nebo ojediněle výraznější granula
lymfocyty - CLL: ve většině lymfocytů výrazná zrnitá pozitivita
blasty - ALL, nedif. leukémie: hrubozrná pozitivita
NRBC - fyziologické: negativní
NRBC - patologické: hrubozrná – kapkovitá pozitivita
trombocyty a megakaryocyty: výrazně pozitivní
• Klinický význam:
leukémie, MDS, anémie
ALL
M6
CLL
difuz, granul, mgk
Typy pozitivity PAS
AML-M3
difúzní p.
B – ALL
bloková p.
ALL
jemně gran. p.
Kyselá fosfatáza
• Princip:
Fosfatáza reaguje se substrátem nebo je reakce blokovaná kyselinou vinnou.
Reakce není blokována pro izoenzym 5. V místě aktivity enzymu vzniká v
cytoplazmě obarvná sraženina.
• Hodnocení:
- pozitivita je úměrná množství enzymu v cytoplazmě
- fyziologická pozitivita:
lymfocyty, plazmatické buňky
granulocyty, monocyty, trombocyty
- pozitivita po kyselině vinné (tartaric acid): pouze v lymfocytech s
izoenzymem 5.
• Klinický význam:
- některé T - ALL, CLL
- pozitivita v lymfocytech po kyselině vinné pouze u
klasické formy vlasaté leukémie (HCL)
pozit.
negat.
mnohočetný myelom
HCL
Poznámky
Cytochemická vyšetření hodnotit v souvislosti s:
• ostatním cytochemickým vyšetřením
• morfologickým hodnocením a rozpočtem kostní
dřěně
• stádiem vyzrávání buněk
• nutné barvení kontrolních nátěrů
Cytochemické reakce
MPOX NE NE+NaF PAS
myeloid. b. -/+++ -/+ -/+ -/+
monocyt. b. -/+ +/+++ -/+ -/+
erytrocyt. b. - - - -/+
lymfoc. b. - -/+ -/+ -/+
MGK b. - + + +