SEDIMENTACE ČERVENÝCH KRVINEK
(SUSPENZNÍ STABILITA KRVE)
Klíčová slova
Sedimentace, suspenzní stabilita krve, suspenze, Helmholtzova elektrická dvojvrstva, FW, SE, šikmá
sedimentace, faktory ovlivňující sedimentaci, nesrážlivá krev.
Pracovní část
Potřeby
Stojan se sedimentačními pipetami, sada pro určení sedimentace (plná lidská krev, lidská krev – plazma
nahrazena fyziologickým roztokem), plná hovězí krev, plná koňská krev, koňská krev – nahrazená plazma
fyziologickým roztokem).
Postup práce
1. Pomocí kapátka doplníme do zkumavka přibližně 2 ml krve (po černou rysku); každý vzorek má svoji
zkumavku i svoje kapátko.
Striktní zásada pro práci s krví: pracujeme pouze v gumových rukavicích!
Obrázek 1-1 Je velice důležité promíchat každou krev těsně před použitím. Zvláště koňská krev
sedimentuje velice rychle, a proto při nedostatečném zamíchání by docházelo k hodnocení v podstatě
pouze plazmy. Krev míchejte pomalými krouživými pohyby, v opačném případě dojde ke vzniku směsi
krve a vzduchu, která ovlivní průběh pokusu.
2
2. Levou rukou uchopíme naplněnou zkumavku a pravou rukou pipetku mírným tlakem zasuneme kolmo
dovnitř zkumavky (kalíšku)s krví. Vytvoří se tak podltlak.
3. Při správném postupu sloupec krve postupně vystoupá po značku 0. Zkumavku „zacvakneme“ do
příslušného stojanu.
4. V časových intervalech odečítáme v milimetrech rychlost sedimentace krevního sloupce erytrocytů,
zapíšeme do grafu v protokolu.
Obrázek 1-2 Správné nasátí krve do Westergrenovy pipety.
Komentář: Automatickou pipetu přitlačíme ke kalíšku se vzorkem tak, aby vznikl v kalíšku přetlak. Při
plnění kalíšku je potřeba věnovat pozornost zvláště vhodnému množství krve. Při přeplnění kalíšku může
dojít po vsunutí pipety k vylití vzorku.
3
Hodnocení a výsledky
Tabulka 1-1 Zapište typy hodnocené krve a sedimentaci v mm po uplynutí dané doby.
Vzorky
Čas
…………….. …………….. …………….. …………….. ……………..
15 minut
30 minut
45 minut
60 minut
Tabulka 1-2 Fyziologické hodnoty sedimentací po odečtu nejméně 1 h.
Typ Sedimentace
Muži: 2 - 8 mm/h
Ženy: 7 - 12 mm/h
Novorozenci: 2 mm/h
Kojenci: 4 - 8 mm/h
Závěr
Popište rozdílné průběhy sedimentací a zdůvodněte příčinu.
4
OSMOTICKÁ REZISTENCE
ERYTROCYTŮ
Klíčová slova
Osmotický tlak, izotonicita, hypotonicita, hypertonicita, hemolýza.
Pracovní část
Potřeby
stojan s 13 zkumavkami, nesrážlivá krev, destilovaná voda, fyziologický roztok, 1 % roztok NaCl, 0,9 % NaCl,
kapátko, 2 pipety, emitní miska.
Postup práce
1. Do 12 zkumavek napipetujte 1 % roztok NaCl v následujících množstvích: 6,3; 6,0; 5,7; 5,4; 5,1; 4,8; 4,5;
4,2; 3,9; 3,6; 3,3; 3,0 ml.
2. Doplňte zkumavky destilovanou vodou do celkového objemu 10 ml.
3. Do 13. zkumavky napipetujte 10 ml fyziologického roztoku (0,9 %NaCl).
4. Zkumavky s roztoky mírně zamíchejte.
5. Krev v lahvičce opatrně promíchejte a pomocí kapátka do každé zkumavky kápněte 2 kapky krve.
Zkumavky palcem v rukavici uzavřete, pomalu překlopte a vraťte do původní polohy (opravdu pomalu,
nechceme vytvořit fyzilkální hemolýzu). Nechejte minimálně 30 minut reagovat.
6. Po daném čase subjektivně stanovte přítomnost hemolýzy. Jako kontrolu použijte zkumavku
s fyziologickým roztokem.
Hodnocení a výsledky
Zakreslete do zkumavek stav hemolýzy Tabulka
2-1.
• Nepřítomnost hemolýzy: Nehemolyzované erytrocyty tvoří neprůhlednou suspenzi. Nad touto
suspenzí v důsledku sedimentačního efektu se nachází tenká čirá do žluta zbarvená vrstva čisté
plazmy
• Částečná hemolýza: Hemolyzované erytrocyty mění barvu vrstvy plazmy ze žluté na jemně
růžovou. Její intenzita závisí od úrovně hemolýzy v roztoku
• Úplná hemolýza: Zkumavka obsahuje průhledný, rovnoměrně růžově zabarvený roztok. Není
patrná žádný zákal na dně zkumavky.
5
Určení minimální, maximální rezistence a rezistentní šíře
• Minimální osmotická rezistence: Odečítá se na první zkumavce s načervenalým zbarvením plazmy
nad neprůhledným sedimentem. V této zkumavce dochází k hemolýze nejméně odolných
erytrocytů.
• Maximální osmotická rezistence: Odečítá se na poslední zkumavce se zákalem u dna. Ten je tvořen
nejvíce odolnými erytrocyty.
• Osmotická rezistentní šíře: Jedná se o rozmezí mezi hodnotou minimální a maximální osmotické
rezistence.
Obrázek 2-1 Stav hemolýzy ve zkumavkách.
Komentář: Vlevo nepřítomná hemolýza. Uprostřed částečná hemolýza. Vpravo úplná hemolýza. Tip:
Položte za zkumavky list s textem a sledujte, zda lze přes zkumavku text číst. Pokud ano, znamená
to, že v této zkumavce již probíhá hemolýza (nejčitelnější text je ve zkumavce s úplnou hemolýzou,
žádné membrány odolných erytrocytů nebrání viditelnosti textu).
6
Tabulka 2-1 Zaneste do tabulky přítomnost hemolýzy v jednotlivých zkumavkách
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Koncentrace
Roztoku NaCl
[%]
0,63 0,6 0,57 0,54 0,51 0,48 0,45 0,42 0,39 0,39 0,33 0,3 0,9
Přítomnost
hemolýzy
[ANO/NE]
Závěr
Shrňte všechny naměřené výsledky a stručně popište fyziologické jevy, které se s nimi pojí. Popište, zda
naměřené hodnoty byly ve fyziologickém rozmezí. Jaké nemoci jsou spojeny se zvýšenými nebo sníženými
hodnotami osmotické rezistence?
7
URČENÍ KREVNÍ SKUPINY
SKLÍČKOVOU METODOU
Klíčová slova
Antigen, protilátka, aglutinogen, aglutinin, aglutinace, Rh faktor, fetální erytroblastóza.
Pracovní část
Potřeby
Standardní séra skupiny anti A, anti B a anti AB, nesrážlivá krev, emitní miska, miska s dezinfekčním
roztokem.
Postup práce
1. Před začátkem práce zkontrolujte baňky se séry (datum výroby, průhlednost, souhlasné označení a
barvy sér).
2. Na podložní sklíčko aplikujte jednotlivá séra. Každé sérum je rozlišitelné podle svého barevného
označení (modrá – anti A sérum, žlutá – anti B sérum, průhledná – anti AB sérum). Ujistěte se, že na
sklíčku nedochází k mísení sér (Obrázek 3-1 vpravo).
3. Krev v lahvičce opatrně promíchejte a pomocí kapátka aplikujte 1-2 kapky krve na další separátní sklíčko
(Obrázek 3-1). Uzavřete lahvičku s krví a odložte.
Striktní zásada pro práci s krví:
Pracujte pouze ve vyhrazeném prostoru. S krví se manipuluje pouze v gumových rukavicích.
Obrázek 3-1 Počáteční příprava krve a sér na oddělená sklíčka. Dejte pozor, aby na sklíčku s jednotlivými
séry nedošlo k jejich vzájemnému promíchání.
8
4. Připravte si další podložní sklíčko pro přenos krve do sér. Do kapky krve namočte roh podložního sklíčka
a přeneste jej na první sérum. Krouživým pohybem obě kapaliny smíchejte. Poté pootočte sklíčko a
dalším čistým rožkem přeneste krev na další sérum (Obrázek 3-1, Obrázek 3-2). Množství krve a séra by
mělo být v poměru asi 1:10.
5. Pozorujte reakci na jednotlivých sérech a výsledky překreslete do připravených obrázků.
Hodnocení a výsledky
Překreslete výsledky pokusu a určete typ testované krevní skupiny. Popište probíhající děje.
Pokus A
Zakreslete výsledky reakce na sérech.
Sérum Anti A Sérum Anti B Sérum Anti AB
Výsledek pokusu:
(Reakce/bez reakce)
Krevní skupina:
………………………………………………
Obrázek 3-2 Pro míchání séra a krve použijte vždy jiný rožek tak, aby nedocházelo k promíchání
jednotlivých sér.
Vždy použijte čistý rožek tak, aby nedošlo ke smíchání sér.
9
Jakou krevní skupinu mohli mít rodiče majitele této krevní skupiny:
Pokus B
Zakreslete výsledky reakce na sérech.
Sérum Anti A Sérum Anti B Sérum Anti AB
Výsledek pokusu:
(Reakce/bez reakce)
Krevní skupina:
………………………………………………
Jakou krevní skupinu mohli mít rodiče majitele této krevní skupiny:
Závěr:
Shrňte všechny naměřené výsledky a stručně popište fyziologické jevy, které se s nimi pojí.