o patologie květoslava matulova upa fn brno bioanalytik - osnova predmetu TEORIE - 6x 1 2:00-14:05 HOD CVIČENI - 4x 08:30 - 11:50 HOD ODBORNÁ LABORATORNÍ PRAXE ukončení předmětu KOLOKVIUM KOLOKVIEM SE ROZUMÍ UKONČENI PREDMETU ROZPRAVOU O PROBLEMATICE PŘEDMĚTU, NEBO VYPRACOVÁNÍM PÍSEMNÉ PRÁCE ZABÝVAJÍCÍ SE DÍLČÍ TÉMATIKOU PŘEDMĚTU, PŘÍPADNĚ OBOJÍM ZPŮSOBEM. KOLOKVIUM SE HODNOTÍ SLOVY "PROSPĚL(A)", NEBO "NEPROSPĚL(A)" VYZNÁM HISTOLOGICKÉHO VYŠETŘENÍ TKÁNĚ vyznám histologického vyšetřeni tkaní patologie nauka o chorobách (pathos = choroba/utrpení logia = věda/studium) 2 polovina 1 8. století studuje: příčiny chorob mechanismy jejich rozvoje změny v buňkách a tkáních (morfologie buněk) - klinické (pacient) - makroskopické - mikroskopické diagnostika - diagnostika -nádorových a nenádorových ^ onemocnení morfologická proteinová molekulární d a lsi vyznám r r predikce biologického chovaní v /■ • typ nádoru • stádium onemocnení • stupeň diferenciace • přítomnost lymfangioinvaze, postižení lymfatických uzlin v r pooperační nádorové rezíduum indikace k cilene lecbe Breast cancer diagnosticky servis pro: GASTROENTEROLOGIE - ENDOSKOPIE H E PATO PATO LO GIE - PUNKČNÍ BIOPSIE JATER PNEUMOLOGIE -PRŮDUŠKOVÉ A PUČNÍ NÁDORY NEFROLOGIE - GLOMERULOPATIÍ, TEM -POŠKOZENÍ FILTRAČNÍ BARIERY ENDOKRINOLOGIE - STRUMA, ZÁNĚT, NÁDOR CHIRURGIE - RESEKÁTY ORGÁNŮ A TKÁNÍ GYNEKOLOGIE - VÝŠKRAB, EXO-ENDOCERVIX, POLYPY, KONIZÁTY ONKOLOGIE - ROZSAH NÁDORU - STAGING, DIFERENCIACE- GRADING HEMATOLOGIE - TREPANOBIOPSIE PEDIATRIE - TKÁŇOVÉ ODLIŠNOSTI DERMATOVENEROLOGIE - KOŽNÍ EXCIZE charakter materiálu Nekropsie o Biopsie Cytolog le v I i nekropsie - vzorky mrtvých pacientů - stanovit příčinu smrti - objasnit její okolnosti BIOPSIE • VZORKY ODEBRANÉ ZIVYM PACIENTŮM • DEFINITIVNÍ DIAGNOSTIKA CHOROB • ZÁKLAD MIKROSKOPICKÉHO VYŠETŘENÍ • DLE VÝSLEDKU - POSTUP LÉČBY • EXCIDOVANÉ KOŽNÍ ZNAMÉNKA • ENDOSKOPICKÝ MATERIÁL • KYRETÁŽ • RESEKÁT probatorní excize = vyříznutí části tkáně o JEDNOTLIVÉ BUNKY ODDELENE OD TKANÍ CHYBÍ TKÁŇOVÁ SOUVISLOST POSOUZENÍ CYTOLOGIE BUNĚK JEDNODUCHOST RYCHLEJŠÍ DOSTUPNOST NEVÝHODY - ZTRÁTA STRUKTURY TKÁNĚ ČASTO ORIENTAČNÍ - PREBIOPTICKÁ METODA PERIFERNÍ KREV ASCITES STERY Z POVRCHOVÝCH ČÁSTÍ - SLIZNIC AS PIRÁTY LAVÁŽE ODBĚRY - MOZKOMÍŠNÍHO MOKU, MOČE SPUTUM OTISKY CYTOLOGIE ster z delozniho cipku J as pi rat o upngrii and loarioo on ub'o vnlh excess fiud Fh*d coisecw i rt; j1 štítná \ jdušnice žláza hrran hltan i VYZNÁM HISTOLOGICKÉHO VYŠETRENÍ TKANÍ ZÁVĚR g diagnostický servis pro všechna klinická odvětví medicíny zásadní význam pro léčbu pacientů modifikuje proces léčby k. informace pro obory transplantační medicíny hffps://nafic.cz/fransplanface-tkani/ ZPRACOVANÍ TKÁNÍ -PREANALYTICKÁ + ANALYTICKÁ ČÁST zpracovaní tkaní -preanalytická a analytická část LIDSKÉ TELO OKO STŘEVA KUZE )ATR'> PLÍCE ZUB SRDCE-irt^ZEK LEDVINY ŽALUDEK Jlifeandlearning.com https:ucenisradosti.blO! materiál nativní — bez ixacni tekutiny fixovaný nejčastěji formolem biologicky materiál tkáně fixované^ histologické řezy^ přehledné barvení, speciální barvení, IHC, ISH tkáně nativní -^-hluboké zmrazení —> izolace DNA, RNA, —> peroperační biopsie, průkaz lipidů, enzymová histochemie —> homogenizace -^-průtoková cytometrie buněčné tekutiny —> průtoková cytometrie, izolace DNA, RNA, cytospin, cytoblok, nátěr, otisk —> cytologická vyšetření transport nativní materiál rychlý transport materiálu do laboratoře nevhodná potrubní pošta osobní donáška zabránit oschnutí tkáně malé vzorky — nevhodné pokládat na suchý filtrační papír ponoření do H2O — osmotické artefakty zmrazení materiálu — průtoková cytometrie, per, enzymová histochemie fixovaný materiál optimální transport materiálu do laboratoře potrubní pošta osobní donáška pokojová teplota Q j průvodní listy a zadanky • OZNAČENÍ NÁDOBY S MATERIÁLEM • PRŮVODNÍ LIST K MATERIÁLU: JMÉNO, PŘÍJMENÍ, RODNÉ CISLO, POHLAVÍ, ZP, DATUM, ODD, HODINA ODBĚRU • SPECIFIKACE LOKALIZACE ODBERU ANAMNÉZU ZÁKLADNI KLINICKOU DIAGNOSTICKOU ROZVAHU • INFORMACE O PŘEDCHOZÍ LECBE • CHIRURGICKÉ VÝKONY - JEDNO ZDRAVOTNÍCKE ZAŘÍZENI- NE VZDY • SOUČASNOST - CAROVÉ KODY Q chyby při odběru a zasílání materiálu ODBER NEADEKVÁTNE MALÉHO VZORKU TKANÉ ZHMOŽDĚNÍ TKÁNĚ PŘI NEŠETRNÉM ODBĚRU MALÉ MNOŽSTVÍ FIXAČNÍ TEKUTINY CHYBĚJÍCÍ TOPOGRAFICKÉ OZNAČENÍ ODBĚRY Z RŮZNÝCH MÍST V JEDNÉ NÁDOBCE NEVHODNÝ ZPŮSOB ZASLÁNÍ MATERIÁLU PRO SPEC. VYŠETŘENÍ (FIXOVANÝ) ZASLÁNÍ MATERIÁLU V POZDNÍCH HODINÁCH (LIKVOR) 0 odběr nativní tkáň hlubokomrazící box dewarova nádoba fixace ^ • VČASNÉ ZABRÁNĚNÍ ROZKLADU TKÁNĚ - AUTOLÝZE • CHEMICKÉ METODY • RYCHLÁ A ŠETRNÁ DENATURACE BÍLKOVIN V BUŇCE • ALDEHYDOVE FIXAČNÍ PROSTŘEDKY- VYTVAŘI MEZI BÍLKOVINNÝMI ŘETĚZCI MŮSTKY, COZ VEDE K ZESÍŤOVATĚNÍ BÍLKOVIN. FIXATIVA MUSI BYT NADBYTEK • ZACHOVAT STRUKTURU A BARVITELNOST Q typy chemických fixativ ^ O • PRINCIP -KOAGULACE PROTEINU- CHLORID RTUŤNATÝ, KYSELINA PIKROVÁ - DEHYDRATACE TKANÍ - ETHANOL, METHANOL, ACETON - VZÁJEMNÉ ZESÍŤOVÁNÍ PROTEINŮ - FORMALDEHYD, GLUTARALDEHYD Formaldehyd vzniká oxidací methanolu, při této reakci se používá atomární kyslík: CH3OH + 1/2 02 HCHO + H20. Může být připraven také ze syntézního plynu za přítomnosti katalyzátorů: CO + H2 —► HCHO. karcinogén pro člověka Q formalín, alkohol, oxid osmičelý Aldehyde fixative , Alcohol s—^ Water molecule is AlCOhol removed: Dchydartion and coagulation of protein Formaldahydc Hydroxymethyl Protein Cross linking with protein Formaldehyde Osmium tctroxidc Glycol /osmate AAA/* Lipid m tctrox AAAA Cross linking with lipid Osmium tetroxide doba fixace v j koncentrovaný (100%) formalín 35-37% formaldehydu 1 0% FORMOL = FORMALIN = 4% FORMALDEHYD CCA 24 HOD 1 MM ZA HODINU NEVÝHODY: 10% formalín (3,5 - 3,7%) » 4% formaldehydu KREVNATE ORGANY - SLEZINA, JÁTRA, KD, PLÍCE - HNEDE FORMOLOVE PIGMENTY FORMOL - FRAGMENTU J E NUKLEOVÉ KYSELINY Q • JINE FIXAČNÍ TEKUTINY - BAKEROVA, BOUINOVA, SUSA, ZENKEROVA prikrojeni tkáně c odvětrávací box prikrojeni tkané • PRIKROJIT NA MENŠI ČASTI • PATOLOG, LABORANT, ZAPISOVATEL • MAKROPOPIS: ANATOMICKÁ ČÁST ODEBRANÉ TKÁNĚ VELIKOST BARVA KONZISTENCE PŘÍPADNĚ HMOTNOST PATOLOGICKÉ STRUKTURY CÍL: VYBRAT REPREZENTATIVNÍ ČÁSTI TKÁNĚ PARAFÍNOVÝ BLOK DŮLEŽITÉ: ORIENTACE ŘEZU MIKROSKOPICKÉ VYŠETŘENI SPÍ 9* ■ ... ' ô odvodnění, prosycení, parafinový bloček • PO FIXACI TKANÉ VYPRAT V H2O • ODVODNĚNÍ-ETHANOL • ORGANICKÉ ROZPOUŠTĚDLO - XYLEN • PROSYCENÍ TKÁNĚ PARAFÍNEM 56 -58 °C • ZALITI PARAFÍNOVÉHO BLOKU 0 krájí se průřez orgánu krájí se pouze pouzdro krájí se střed vyšetřované ! tkáně (např. lymfatické uzliny) krájí se pouze okrajové části tkáně krájí se celý punkční váleček tkáně (např. punkční biopsie) krájí se pouze část punkčního válečku y krájení histologických řezů • mikrotomy - sankove - žiletka je pohyblivá - rotační - žiletka je stacionárni • sila - 3-5 mikrometru • ukrojeny rez se přenese na hladinu vody • ponor skla- zachyceni rezu napnuti rezu Q usušeni rezu barvicí metody • NEOBARVENE TKANÉ - MIKROSKOP S FÁZOVÝM KONTRASTEM • PŘEHLEDNE BARVENI - HE O ' ava a a RUZNA BARVIVA SE VAZI NA KONKRÉTNI MOLEKULY A ČASTI BUNĚK y barvení hematoxylin a eozin • HEMATOXYLIN - DREVO- KREVENE OBECNE - HEMATEIN - MORIDLO-BAREVNY LAK - BARVÍ JÁDRA (NUKLEOVÉ KYSELINY) A V CYTOPLAZMĚ BARVÍ OBLASTI BOHATÉ NA RNA • EOZIN - EOZIN Y, ETHYL EOZIN, EOZIN B - ROZPUSTNÝ VE VODĚ NEBO ALKOHOLU - BARVÍ CYTOPLASMU, RŮZNÉ EXTRACELULÁRNÍ PROTEINY - K ROZLIŠENÍ - (VAZIVOVÁ VLÁKNA, AMYLOID, GLYKOGEN A DALŠÍ) - SPEC.BARVENÍ hematoxylin-eozin jádra buněk modře vazivo růžově svalstvo červeně fialově erytrocyty oranžově chrupavka modře HE- močový měchýř svalovina vazivo vazivo speciální barvení • KOLAGENNI VLÁKNA- MASSONOVY TRICHROMY • KOLAGENNÍ VLÁKNA A FIBRÍN - WEIGERT VAN GIESON • ELASTICKÁ VLÁKNA - ORCEIN A RESORCIN-FUCHSIN • RETIKULÁRNÍ VLÁKNA - IMPREGNACE DLE GÔMÔRIHO • AMYLOID- KONŽSKÁ ČERVEŇ • POLYSACHARIDY A GLYKOKONJUGÁTY -PAS REAKCE • GLYKOGEN - PAS S DIASTÁZOU • KYSELÉ MUCÍNY A PROTEOGLYKANY - ALCIÁNOVÁ MODŘ • KYSELÉ MUCÍNY EPITELIÁLNÍHO PŮVODU - MUCIKARMÍN • LIPIDY - OLEJOVÁ ČERVEŇ, SUDANOVÁ ČERŇ • HEMOSIDERIN - PEARLS MODŘ (BERLÍNSKÁ MODŘ) • BILIRUBIN - GMELINOVA REAKCE • MELANIN - IMPREGNACE MASSONA- FONTÁNA CA- IMPERGNACE DLE VON KOSSY methacarn SLOŽENI; • ABSOLÚTNI METHANOL 60 ML (C 1) • CHLOROFORM: 30 ML • KYSELINA OCTOVÁ LEDOVÁ: 10 ML • DOBA FIXACE: 1 - 4 HODINY DOPORUČENE APLIKACE PŮSOBÍ RYCHLE, POSKYTUJE DOBROU NUKLEÁRNÍ OCHRANU A ZACHOVÁVÁ GLYKOGEN. LYŽUJE ERYTROCYTY A ROZPOUŠTÍ LIPIDY, ALE ZPŮSOBUJE SMRŠŤOVANÍ A ZTVRDNUTÍ. Q CKAE 1 /3 uzlina s HIER Methacarn - vhodný pro HE - záludný pro proteiny a molekulární metody CKAE 1 /3 uzlina bez HIER Q peroperační biopsie • V PRŮBĚHU OPERACE • DLE VÝSLEDKU UPRAVEN POSTUP OPERACE • RYCHLE VYŠETŘENÍ • INDIKACE: ODUŠENÍ REAKTIVNÍCH PROCESŮ A PSEUDOTUMORŮ OD NÁDOROVÝCH PROCES ODUŠENÍ BENIGNÍCH NÁDORŮ OD MALIGNÍCH BLIŽŠÍ SPECIFIKACE MALIGNÍHO PROCESU OKRAJE RESEKÁTŮ SENTINELOVÉ LYMFATICKÉ UZLINY operační obory CHIRURGIE GYNEKOLOGIE UROLOGIE ORTOPEDIE NEUROCHIRURGIE SPONDYLOCHIRURGIE OTORINOLARYNGOLOGIE MAKROPOPIS ORIENTACE ZMRAZENÍ REZU PRIKROJENI BARVENI ZAMONTOVANÍ HODNOCENI metodika Bakerův Mayerův hematoxylin roztok vodovodní H20 vodovodní H20 teplá Eozin vodovodní H20 96% alkohol 1 96% alkohol 3 osušení podložního skla filtračním papírem xylen 1 xylen 2 Montování o oplach 1 - 1,5 min 1 min 4x - 7x oplach oplach oplach 2x oplach 1 min. oplach 1 min. q Mikropopis: Peroperační biopsie: 4/ 2 vzorky tuk. vazivové tkáně bez zřejmé neoplazie. 5/1 vzorek tuk. vazivové tkáně bez zřejmé neoplazie. Hlásil dr. Mazanec ad doc. Horváthľ 29.1.2019, 14:17. 7/ V. s. nekróza, bez známek infiltrace tumorem. 8/ Bez známek infiltrace tumorem. Hlásil dr. Macháček ad doc. Horváth, 29.1 2019, 14:53 Diagnóza: D383 Pojišťovna: 211 Nároky: R IČP: 72100261 Žadatel: B CHK Chirurgie-lůžková odd.C Doc.MUDr. Teodor Horváth CSc. , Jihlavská 20,62500 Brno Datum a čas odběru: 29.0 1.2019 16:00_Datum a čas příjmu: 30.01.2019 10:10_ Použité metody vyšetření: SOPV-01 Histologické vyšetření tkání a diagnostika*: SOPV-02 Peroperačni vyšetření buněk a tkání a diagnostika* Předmět a klinická diagnóza: Předmět a klinická diagnóza: 1/ LEVOSTRANNÁ RESEKČNÍ LINIE 21 ČÁST PŘEDNÍHO SEGMENTU HORNÍHO LALOKUNALÉHAJÍCÍ NA TUMOR 3/ NATIVNÍ RESEKÁT-TUMOR MEZIHRUDi RESP JEHO PODSTATNÁ ČÁST 41 PŘEDNÍ HORNÍ RESEKCÍ LINIE / KRYOPREPARÁT STATÍM 5/ CENTRÁLNÍ RESEKČNÍ LINIE Ú / KRYOPREPARÁT STATÍM 6/ ESEKČMNÍ LINIE MEDIASTINÁLNÍ 7/ RESEKČNÍ LINIE DX. STŘEDNÍHO PLICNÍHO LALOKU 8/ RESEKČNÍ LINIE DX. HORNÍHO PLICNÍHO LALOKU 9/ INTERLOBÁRNÍ LYMFATIKA 10/ KRAJINA PARATRACHEÁLNÍ LYMFATICKÉ LIŠTY DX. 11/ bIFURKAČNÍ LYMFATIKA DĚKUJEME ZA SKVĚLOU PEROPERAČNÍ STATÍM KRYO - SPOLUPRÁCI PANU KOLEGOVI CTARADOVI MACHÁČKOVI . PROSÍME DEFINITIVNÍ HISTOPATOLOGICKÉ VYŠETŘENÍ PREPARÁTŮ. S POZDRAVY VESKRZE PŘÁTELSKÝMI Vaši chirurgičtí thorvath a spol Fixační roztok (nepotřebné umazat): 10% neutrální formalín (tj.4% formaldehyd) Lówyho roztok Bouinův roztok Methacam Cytofixativ Makropopis: NATIV : 29.1.2019 HLKulovitý tumor vel. 10x8x9 cm, při jednom z pólu částečně odstraněné měkké tkáně (viz foto). Po naříznuti vytéká hnědá tekutina a žlutavé hmoty. (MUDr. Jakub Vlažný) 31.01.2019 I ovOKJni utvař 15x10x8 mm. tvořený tukovou tkáni (blok 1-2) II kliivovitý r es piicniho parenchynui 8x5x2 cm. povrch hladký, bez patrné nádorové infiltrace, na fezu prekrvený plieni parenchym bez ložiskových změn . náhodné (blok 3-4) lil po fixaci na řezu je tumor tvořený cysiami různé vel. tukovou tkáni .tuhou chrupavčitou o kostní tkání Cysty jsou vyplnené gelatinoznl hmotou, dírou tekutinou nebo mazlavými žlutými hmotami K tumoru přiléhá Část pticního párenchymu (blok 5-14). / blok 14 • přiléhajíc! plieni parenchym a blok 7.8.9. k OOV IV kryoparafinovy blok A (blok 15) kryoparafinovy blok B (blok 16) zbytek po peroperačni biopsii (blok 17-19) V kryoparafinovy blok (blok 20) zbytek po peroperačni biopsii (Blok 21) VI nepravidelný fragment 19x18x15 mm. tvořený tužsl vazivové tukovou tkáni (blok 22-23) VII kryoparafinovy blok (blok 24) zbytek po peroperačni biopsii nepravidelný fragment tkané 30x28x5 mm. žiutobéiavé barvy, tužsi konzistence (blok 25-26) VIII kryoparafinovy blok (blok 27) IX 4 LU (blok 28-31) X 4 LU (blok 32-35) XI. 1 LU (blok 36) Mikropopls: Peroperačni biopsie 4/ 2 vzorky tuk vazivové tkané bez zřejmé neoptázie 5' 1 vzorek tuk vazivové tkané bez zřejmé neoplazio Hlásil dr Mazanec ad doc Horváth. 29 1 2019. 14:17. 7/ V s nekrózo. bez známek infiltrace tumorem 8' Bez známek infiltrace tumorem Hlásil dr Macháček od doc Horváth. 29 1 2019. 14 53 Permanentní preparáty: 1/ bl.1,2: Struktury thymu přiměřené stavby vzhledem k věku. Při okraji odberové artefakty. Bez známek tumoru. 2/ bl.3,4: Plieni parenchym s difúzními hemoragiemi. Alveoly distendované krevními kolaguly a místy také edémovou tekutinou, intersticium také parciálně prokrvácené, stejně tak viscerální pleura. Bez známek tumoru. 3/ bl.5-14: Tumor má pestrou stavbu a je organoidně uspořádaný. Je tvořen deriváty všech třech zárodečných listů. V solidních oblastech přítomny převážné struktury tnezenchymálních derivátů (vazivo, tuková tkáň, svalovina, chrupavka, kost včetně hernatopoetické tkáně). Dále zastiženy okrsky pankreatu, bj. také nervové tkáně. Cystické partie variabilně lemovány skvamóznim či glandulárním epitelem respiračního typu. V okolí často drobné mucinózní či smíšené žlázky. Úsekovitě struktury kůže včetně kožních derivátů. Všechny tkáně jsou zralé, somatického typu. Fokálně v periferii nekróza a resorptivně reparativní změny v.s. po předchozím odběru. Bez nálezu nezralé komponenty či struktur jiného germinálního tumoru. 4/ bl.'15-19: Tukově vazivová tkáň s odběrovými artefakty v periferii. Úsekovitě překrveni, edematózni prosáknutí, mírná smíšená zánětlivá celulizace a periferní lem z akumulovaných makrofágů. Fokálně i granulační tkáň V bl 18,19 také lymfatické uzliny s lehkými reaktivními změnami. Bez známek tumoru. 5/ bl.20,21: Hypocelulámí, mírně prosáklá vazivová tkáň s drobnými fokusy lymfatických agregátů, v periferii lymfatická tkáň až charakteru lymfatické uzliny s odběrovými artefakty. Úsekovitě silné trámce kolagenu charakteru tkáně jizvy, oj. s agregáty pěnitých buněk vč. hematogenního pigmentu. Bez známek tumoru. 6/ bl.22,23: Tukově vazivová tkáň s fibrezou jizevnatého typu, s drobnými fokusy lymfatických agregátů, oj. s agregáty pěnitých buněk vč. hematogenního pigmentu. Úsekovitě přítomny tkáně thymu. Bez známek tumoru. 7/ bl.24-26: Převážně nekrotická tkáň s insudací fibňnem, se zbytky jaderného chromatinu a hematogenním pigmentem. Dále přechod do resorptivni reakce s akumulovanými makrofágy, zčásti pěnité morfologie, s hojnou účastí smíšeně zánětl i vě celulizované granulační tkáně. Zastižena také obrovsko buněčná reakce kolem amorfního materiálu. Úsekovitě přechod do nezralé jizvy. Bez známek vitálního tumoru. 8/ bl.27: Drobná částečka tvořená granulační tkání s přechodem do nezralé jizvy. Bez známek tumoru. 9/ bl.28-31: Celkem 4 lymfatické uzliny s reaktivními změnami, bez známek malignity. 10/ bl.32-35: Celkem 3 drobné lymfatické uzliny s reaktivními změnami, bez známek malignity. 1V bl.36: Lymfatická uzlina s reaktivními změnami, bez známek malignity. Závěr: 1/ levostronná resekčni linie: Struktury thymu. Bez známek neoplázie. 21 část předního segmentu horního laloku naléhající na tumor: Prokrvácený plicní parenchym. Bez známek neoplázie. 3/ resekát - tumor mezihrudí: Teratom mediastina - histologický zralý teratom. 4/ přední horní resekční linie: Reparativní změny v měkkých tkáních. Bez známek neoplázie. 5/ centrální resekční linie: Reparativní změny v měkkých tkáních. Bez známek neoplázie. 6/ resekční linie medíastinální: Struktury thymu a reparativní změny. Bez známek neoplázie. 7/ resekční linie dx středního plicního laloku: Nekróza s demarkační resorptivně reparativní reakcí, v.s. po předchozím zákroku. Bez známek vitální neoplázie. 8/ resekční linie dx. horního plicního laloku: Reparativní změny. Bez známek neoplázie. 9/ interlobární lymfatika: Celkem 4 lymfatické uzliny bez známek malignity. 10/ krajina paratracheálni lymfatické lišty dx.: Celkem 3 lymfatické uzliny bez známek malignity. 1 ľ bifurkačni lymfatika: Lymfatická uzlina bez známek malignity. q © sentinelové uzliny ihc Lymfatické zásobeni mléčné žlázy Zdroj: http:/Ann\:rakovinaprsu.cz/o-rakovine-prsu/anatomie-prsu/ TECHNIKY VYUŽÍVAJÍCÍ MONO NEBO POLYKLONÁLNÍ PROTILÁTKY, KTERÝMI LOKALIZUJEME A VIZUALIZUJEME PRÍSLUŠNE TKÁŇOVÉ ANTIGÉNY. PŘEDMĚTEM ZKOUMÁNÍ JE DETEKCE ANTIGÉNU SDRUŽENÝCH S NÁDOROVÝMI BUŇKAMI A MOŽNOSTI IMUNOHISTOCHEMICKÉ KLASIFIKACE NÁDORU PODLE PŮVODU Q 1 Carcinoma Cytokeratins Selected antibodies Hepatocellular carcinoma 8 13 VvtCkeraliľl í Adenocarcinoma of colon, type 1 8, 18, 19 Cvtnkeralin IS Adenocarcinoma of colon, type 2 8, 17, 18. 19 Cvtokeialin 17 Adenocarcinoma of stomach 7, 8, 18, 19 Cvtokeralin 7r 17 Adenocarcinoma of esophagus 8, 13, 19 Cvtokeralin 19 Adenocarcinoma of pancreas 7, 8, 17, 18, 19 Cytokeratin 15 Ductal (adeno-) carcinoma of breast, type 1 7, 8, 18, 19 Cytokeratin 19 Basal cell epithelioma 5, 6, 8,14,15, 17 Cytokeratin 5 18 Squamous cell carcinoma of skin 5, 6, 11, 14, 1S: 17 Ovtokeraljn pan Squamous cell carcinoma of tongue 5, 6,14, 16,17 Cvtokeralin 14 Ductal carcinoma of breast, type 2 6, 7, 8,11, 14.18,17. 18,19 Cytokeratin IS Undifferentiated carcinoma of bronchus {large-cell type) 6, 7, 8.17.18, 19 Cytokeratin 18 Solid carcinoma of maxillary sinus 5, 8, 17,18,19 SytCKťf-rf-n 17 Adamantinoma a, 5, Ů, 14,15, 16,17,19 Cytokeratin 19 Squamous cell carcinoma of epiglottis 4, 5,6.8.14.15. 16.17. 18.19 Cytokeratin 18 Squamous cell carcinoma of esophagus 4, 5,8,14,15,16,17,19 Cvtokeralin 14 Squamous cell carcinoma of rectal-anal region 4, S, 6,3, 10, 11, 14, 15, 16,17,18, 19 Cytokeratin 10 Cloacogenic carcinoma 1, 5, 6,7, 8, 10, 11, 13, 14, 15, 17, 19 Cytokeratini 10. 13 Seznam karcinomů a k nim odpovídajících keratinových markem Zdroj: https./Avww. antibodies-on line, com/rs sources/1 S/624/cytokeratiiis-in-th e-detectio ti-of-t amors/ ihc - ^ peroperační biopsie • MONOKLONÁLNÍ PROTILÁTKA ANTI - PAN CYTOKERATIN AE1 /AE3 JE KOKTEJL PROTILÁTEK VYUŽÍVANÝCH K DETEKCI CYTOKERATINŮ PŘÍTOMNÝCH V EPITELIÁLNÍCH BUŇKÁCH I JEJICH KOMPLEXECH. CK AE1 REAGUJE S CYTOKERATINY 10, 14-16, 19, ZATÍMCO CK AE3 S CYTOKERATINY 1-8 IHC - PAN CK AEl /AE3 i i Krok č. Úkon Teplota/čas 1 Fixace vymraženým acetonem 1 minuta 2 Promytí v promývacím roztoku 15 sekund 3 Překrytí skla „ihc Blocker" 1 minuta při 30 °C 4 Odklepnutí blokovacího roztoku z preparátu 5 Překrytí tkáně „PanCK-4 Abs pHRP" 3 minuty při 30 °C 6 Promytí v promývacím roztoku 15 sekund 7 Aplikace pracovního roztoku DAB 1-3 minuty při 30 °C 8 Promytí v promývacím roztoku 15 sekund 9 Mayerův hematoxylin 20-60 sekund 10 Promytí v promývacím roztoku 15 sekund 11 Montování preparátu \HC -rozlíši—-^aetastá^oď prim. nádoru ADENOKARCINOM - NÁDOROVÉ B. JSOU TTF-1 POZITIVNÍ SKVAMOZNI KARCINOM - NÁDOROVÉ B. JSOU P63 POZITIVNÍ KRYOREZY SUSENE PROUDEM VZDUCHU FIXACE ACETONEM OLPACH TBS PUFREM PH 7,4 - 7,6 APLIKACE PRIMÁRNÍ PROTILÁTKY PŘI TEPLOTĚ 37°C 4 MINUTY OLPACH TBS PUFREM PH 7,4 - 7,6 APLIKACE SEKUNDÁRNÍ PROTILÁTKY 4 MINUTY OLPACH TBS PUFREM PH 7,4 - 7,6 VIZUALIZACE DAB+ 4 MINUTY MAYERŮR HEMATOXYLIN 1 0 SEKUND MODRÁNÍ JADER, ODVODNĚNÍ, SOLAKRYL NEGATIVNÍ A POZITIVNÍ KONTROLA U Adenokarcinom TTF-1 + inovace The Histolog® Scanner The Histolog Scanner (CE mark since 2018) is a digital microscopy scanner for high-resolution imaging of the surface of fresh tissue. It is based on a novel ultra-fast confocal microscopy technology invented in EPFL in 2010. Its innovative design makes it highly practical for quick assessment on the point-of-care and the clinician is one touch on the screen away from visualizing cancerous cells immediately on a surgical specimen ^~J. https://youtu.be/wso-CW9w4Y8 shrnuti výhody RYCHLOST nevýhody • HURE ODEČITATELNÁ MORFOLOGIE TKANÉ • SPOLUPRÁCE S OPERATÉREM • NELZE VYŠETŘOVAT TVRDÉ TKANÉ • BĚHEM 1 OPERACE I NĚKOLIK PEROPERAČNÍCH BIOPSII • ZKUŠENY PATOLOG IHC Q RYCHLÉ ZHOTOVENÍ HISTOLOGICKÝCH PREPARÁTŮ peroperační biopsie stereotaktická biopsie - tenkojehlové biopsie otisky crash biopsie pomocí mikrovln peroperacni biopsie tenkojehlová biopsie • SRDCE • LEDVINY • STEREOTAKTICKÁ BIOPSIE- MOZEK • DO CHOROBNÉHO LOŽISKA JE ZAVEDENA BIOPTICKA SONDA NEBO JEHLA A TOUTO SONDOU JSOU VZÁPĚTÍ ODEBRÁNY MALÉ VZORKY TKÁNĚ K DALŠÍMU VYŠETŘENÍ (URČENÍ DIAGNÓZY). Q metodika • FIXACE - 10% FORMOL • AUTOTECHNIKON - TLAK/VAKUUM • TEPLOTA 37°C • PROGRAM CCA 60 MIN • ZRYCHLENÁ- FIXACE, ODVODNĚNÍ, PROSYCENÍ cil TRVALY PARAFINOVÝ BLOK TRANSPLANTACE - RYCHLÁ DIAGNOSTIKA REAKCE - STEPU PROTI HOSTITELI (GVHD ) I ZÁNĚTEM V RŮZNÝCH ORGÁNECH SE SPECIFIČNOSTÍ APOPTÓZY A EPITELIÁLNÍCH BUNĚK. • KOŽNÍ ŠTĚP • GVHR STUPNĚ I (S MINIMÁLNÍ VAKUOLIZACÍ V POKOŽCE) • GVHR STUPNĚ II (S VAKUOLIZACÍ A D YS K E R ATOTIC KÝM I TĚLY) • GVHR STUPNĚ III (S TVORBOU ROZŠTĚPU POD EPIDERMY) • GVHR STUPNĚ IV (S ODDĚLENÍM DERMIS OD EPIDERMIS). Epidermis Epidermis Epidermis Grade t Dermis t Grade III >»- Dermis^ •i« Epidermis Deptnis* íl í.; • • ^ Gradie-R <4 Grade IV * » u \ í OTISKY BARVENÍ - MG G, HE crash biopsie E 2 l ROZDRCENÍ MEZI BARVENÍ HE, PŮVOD NEJČASTĚJI SKLY - NÁTĚR GIEMZA METASTÁZ MOZKOVÁ TKÁŇ Q ____I ra 1 í 1 mikrovlny- tkáňový procesor urychlí - odvodnění - od vápnění - pro IHC metody U zpracovaní tvrdých tkaní fixace vyrezaní reprezentativního vzorku demineralizace cil - změknuti tkané dekalcifikace - neni presny název -neodstraňujeme jen vápenaté soli O DEMINERALIZACE • ROZPUŠTĚNÍ MINERÁLNÍCH SOLÍ VE ZŘEDĚNÝCH KYSELINÁCH • SILNÉ ANORGANICKÉ - KYSELINA DUSIČNÁ • SLABÉ ORGANICKÉ - KYSELINA TRICHLOROCTOVÁ - KYSELINA MRAVENČÍ • RYCHLÉ - HODINY • SNIŽUJE BARVITELNOST JADER BUNĚK • OVLIVŇUJE PROTEINY DEMINERALIZACE ROZPUSTENÍ MINERÁLNÍCH SOLI POMOCI CHELATACNIHO ČINIDLA EDTA - KYSELINA ETYLENDIAMINTETRAOCTOVA POMALÉ - DNY- TÝDNY ŠETRNÉ BARVITELNOST ZACHOVÁNA PROTEINY - OK 500g E57O2O-5OO.0 RPI RESEARCH PRODUCTS IMTIDNATIOMAt se edta Sodium Salt ■ i hukaakc. ■ f i Q metodika FIXACE MAKROPOPIS PRIKROJENI ODVAPNOVACI ROZTOK ZMĚKNUTÍ - KONTROLA - HMAT, VPICH • HISTOLOGICKÉ ZPRACOVANÍ i I odvapnovaci roztok Comrol EDTA Christenserťs buffer with microwave ChrislenserVs buffer . j ERa PR ■ŠÍJ** íř 7"»* *** i-j Děkuji za pozornost