Úvod k třetímu praktiku Mikrobiologie a imunologie – RV2BP_MIKR Ondřej Zahradníček zahradnicek@fnusa.cz, 777 031 969 Kostka Přehled mykologické diagnostiky lMikroskopie – zásadní, hlavně u vláknitých hub lKultivace – důležitá lBiochemická identifikace – zásadní u kvasinek, u vláknitých hub se nepoužívá lPrůkaz antigenu – možný lPrůkaz protilátek – hlavně u tkáňových mykóz (aspergilóza například) lCitlivost na antimykotika možná u kvasinek lMikroskopie vláknitých hub se poněkud liší od diagnostiky kvasinek. lMikroskopie tu má větší význam. Lze pozorovat různé typy spor a konidií. lProhlížíme bez imerze, objektivem zvětš. 4× či 10×, 20×, popřípadě 40 × lV úkolu A1 si vyberte čtyři druhy vláknitých hub (Rhizopus, Aspergillus niger, Aspergillus fumigatus, Microsporum gypseoum) a pokuste se je zakreslit Mikroskopie vláknitých hub C:\Documents and Settings\Obdržálek Vlastimil\Plocha\Houby\26 moldcartoon.jpg 65.254.85.56 Jak popsat obrázky mikroskopie hub lBlastokonidie je oválná nebo kulatá buňka, charakteristická pro kvasinky. Často vidíme pučící blastokonidie (blastospory) lHyfa je vlákno. Může být větvené, může být septované či bez přepážek. Soubor hyf se nazývá mycelium, které může být –vegetativní, ukotvující houbu v substrátu –generativní neboli vzdušné, nesoucí rozmnožovací struktury houby Některé morfologické útvary hub C:\Documents and Settings\Obdržálek Vlastimil\Plocha\Houby\15 Fungi_Pic.gif C:\Documents and Settings\Obdržálek Vlastimil\Plocha\Houby\14 pseudohyfy a hyfy.jpg gsbs.utmb.edu education.med.nyu.edu Jak se jmenují jednotlivé části hub C:\Documents and Settings\Obdržálek Vlastimil\Plocha\Houby\18 části houby.jpg www.mc.uky.edu Životní cyklus jedné houby C:\Documents and Settings\Obdržálek Vlastimil\Plocha\Houby\19 cyklus houby.jpg /media.wiley.com lTaké vzhled výsledků kultivace se u vláknitých hub liší od kvasinek i od bakterií, a to jak na Sabouraudově agaru, tak případně i na agaru krevním lNěkteré z nich, zejména dermatofyty, rostou velmi pomalu. To kvůli nim se Sabouraudův agar nalévá do zkumavek (v Petriho miskách by za tu dobu vyschl). lÚkol A2: Vyberte si libovolný kmen a pokuste se jej zakreslit Kultivace vláknitých hub Chromogenní půda při diagnostice kandid lPoužívají se různé chromogenní půdy. Některé odliší pouze Candida albicans od ostatních, jiné rozliší vzájemně několik druhů kandid. lNa půdě CHROMagar, momentálně používané v našich podmínkách je C. albicans zelenavá, C. tropicalis modrá, C. glabrata hladká růžová a C. krusei drsná růžová. lV první části úkolu A3 se pokuste určit kmeny I a II (třetí řádek vynechejte) podle vzorových kmenů na zbylých šestinách cakru caal cagla catro C. albicans C. glabrata C. tropicalis C. krusei www.medmicro.info Difúzní diskový test citlivosti na antimikrobiální látky lNetestuje se citlivost na antibiotika, ale na antimykotika (tedy speciální látky proti houbám) lHouby v tomto testu nekultivujeme na MH, ale na Sabouraudově agaru, jinak se ale test podobá testu citlivosti u bakterií (látka difunduje z kulatého disku, zóna větší než referenční = citlivost, žádná nebo malá zóna = rezistence) lMimo to existují i soupravy umožňující stanovení hodnoty MIC (kvantitativní) K odečtu testů na antimykotika lU amfotericinu B se za citlivý považuje i kmen, který má malou zónu, pokud uvnitř této zóny nejsou viditelné kolonie lU ostatních antimykotik (těch, co končí na „-konazol“) naopak musí být zóna dost velká, ale připouští se i přítomnost „čehosi“ uvnitř zóny, pokud to „cosi“ svou intenzitou nepřesahuje 20 % intenzity růstu kolem zóny lV druhé části úkolu A3 se pokuste určit citlivost kmene I nebo II na antimykotika (vyberte si jeden z nich) Diagnostické metody lékařské parazitologie Na parazity Odběrová souprava na střevní parazity Ze stránek dodávající firmy Odběr materiálu lNa střevní parazitózy se posílá kusová stolice velikosti lískového oříšku lNa trichomonózu se posílá buďto sklíčko na barvení Giemsou (samotné nebo společně se sklíčkem na barvení Gramem, tj. jako klasický MOP), nebo výtěr v soupravě C. A. T. swab lNa průkaz akantaméb se zasílají použité kontaktní čočky ve své tekutině, případně lze provést seškrab rohovky lU tkáňových parazitóz se posílá sérum lU ostatních podle situace (moč, obsah cysty…) Diagnostika střevních parazitů lMikroskopie je v každém případě základem lU vajíček červů, popř. článků tasemnic: –Používá se nativní preparát v různých modifikacích lMetody dle Kato s dobarvením pozadí malachitovou zelení lFaustova metoda je koncentrační lGrahamova metoda se používá jen u roupů (viz dále) lU střevních prvoků (améb, lamblií) –Používá se barvení, nejčastěji tzv. trichrom Grahamova metoda v diagnostice roupů lSpočívá v tom, že pacient se předkloní, roztáhne „půlky“, načež je mu na anální otvor (a hlavně perianální řasy) nalepena speciální průhledná lepicí páska. Ta je pak odlepena a nalepena na podložní sklíčko lPrůhlednost pásky je zásadní, jinak dost dobře nelze mikroskopovat (Jsou i experti, kteří zasílají pásku neprůhlednou, anebo ji celou přelepí štítkem) lJe jednodušší než vyšetření stolice. Používá se však častěji u dětí – dospělí totiž mívají příliš chlupatou řiť, takže provedení metody by bylo obtížné a bolestivé Roup s vajíčky accroup superroup Obrázky: Milada Dvořáčková a Ondřej Zahradníček Morfologie nejběžnějších vajíček parazitů eggs Škrkavka Tenkohlavec bičíkový taenia1 Roup Enterobius Škrkavka Ascaris Tenkohlavec Trichuris Tasemnice Taenia Obrázky převzaty z CD-ROM „Parasite-Tutor“ – Department of Laboratory Medicine, University of Washington, Seatle, WA Entamoeba histolytica, trichrom 1 www.medmicro.info C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z internetu\Labouši\T23 paraziti\39 ecolcyst.jpg Entamoeba coli (cysta) www.msu.edu/course/zol/316/ameba.htm. Entamoeba coli (cysta) C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z internetu\Labouši\T23 paraziti\42 Entamoeba coli.jpg www.ksu.edu/parasitology/546tutorials/ProtQuery30 C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z internetu\Labouši\T23 paraziti\80 cryptosporidum.jpg Kryptosporidia http://www.scientificdevice.com/intl_product_pages/icryptosporidium_stains.htm Diagnostika krevních parazitů: Tlustá a tenká kapka lV diagnostice krevních parazitů je důležité provedení nátěru metodami tzv. tenkého nátěru a tlusté kapky. lPro obě metody se používá čerstvá, nebo (provádí-li se nátěr až v laboratoři) nesrážlivá krev. Tenký roztěr se fixuje, tlustá kapka ne. Oboje se pak barví Giemsovým barvením. lProhlédněte si obrázky na následující obrazovce a krátké videoklipy, z CD-ROMu „Parazite Tutor“. Tlustá kapka Tenká kapka Tenký nátěr Tlustá kapka Obrázky převzaty z CD-ROM „Parasite-Tutor“ – Department of Laboratory Medicine, University of Washington, Seatle, WA Trofozoit a gametocyt Plasmodium falciparum – „prstýnky“ (trofozoity) a gametocyt Obrázek převzat z CD-ROM „Parasite-Tutor“ – Department of Laboratory Medicine, University of Washington, Seatle, WA Diagnostika trichomonád lTrichomonády se v poslední době diagnostikují zejména kultivačně-mikroskopickým vyšetřením: –odebere se výtěr na tamponu v médiu C. A. T. –médium se nechá kultivovat do druhého dne –kapka média se mikroskopuje jako nativní preparát. lTyto preparáty však nelze uchovat lProto v praktiku máme druhý možný způsob – nátěr na sklíčku barvený dle Giemsy. 04 Trichomonas%20vaginalis1 http://medschool.sums.ac.ir/users/parasto/Intestinal%20and%20luminal%20protozoa/Trichomonas%20vagin alis1.JPG Modul B – pozorování parazitů lProhlédněte si následující parazity: lRoup – z Grahamovy metody, pozoruje se jako nativní preparát bez imerze (mikroskop Ba) lTrichomonas vaginalis – Giemsovo barvení, pozoruje se imerzním objektivem (100×, mikroskop Bb) lPlasmodium falciparum – Giemsovo barvení, tenký roztěr, mikroskop Bb) lEntamoeba histolytica – barvení trichromem, pozoruje se imerzním objektivem (100×, mikroskop Bc) lCryptosporidium parvum – barvení Ziehl-Neelsenem, pozoruje se imerzním objektivem (100×, mikroskop Bc) l Modul C – další úkoly k parazitům lC1 – vyberte si dva parazity naložené v lihu a pokuste se je popsat nebo alespoň napsat název parazita) lC2 – vývojová stádia plasmodií: viz další obrázek a pomocný text na stole lC3 – doplňte vývojová stádia parazitů podle pomocných textů lC4 – dopište k jednotlivým obrázkům parazitů české, anglické a latinské názvy dle pomocného textu Pozdní trofozoit Různá vývojová stádia plasmodií Častný trofozoit Schizont Merozoiti Trofozoit a gametocyt Obrázky převzaty z CD-ROM „Parasite-Tutor“ – Department of Laboratory Medicine, University of Washington, Seatle, WA Hezké léto! Rád vás případně uvítám u nás na ústavu. Také budu rád za zpětnou vazbu Toxoplasmóza v uměleckém ztvárnění 12 toxoplasma_by_chocko http://tn3-2.deviantart.com/300W/fs7.deviantart.com/i/2005/189/1/9/toxoplasma_by_chocko.jpg