Mikroby lidského těla – téma P1 – protokol pro praktické cvičení Modul A: mikroskopie A1 – Mikroskopie kmenů bakterií a kvasinek Zakreslete a popište pozorované kmeny Kmen Nákres (5 až 10 buněk) Popis Kmen Nákres (5 až 10 buněk) Popis A D B E C Případné poznámky: A2 – Mikroskopie pacientských vzorků Zakreslete a popište dva různé vzorky od pacientů Vzorek Popis Obrázek Popisky nalezených útvarů F Sputum, vykašlané pacientem (materiál z dolních cest dýchacích) G Hnis z mužské urethry od pacienta s kapavkou Modul B: kultivace a PCR B1 – Nejdůležitější kultivační půdy Prohlédněte si předložené kultivační půdy a zapište jejich barvu a použití. Tekuté půdy z technických důvodů nelze demonstrovat, proto jsou údaje, které k nim patří, již vyplněny Název půdy Tekutá/pevná, miska/zkumavka Barva Typ půdy (selektivní, …) Baktérie, pro něž je půda určena 1. bujon tekutá žlutá pomnožovací Všechny běžné striktně aerobní i fakultativně anaerobní bakterie 2. VL-bujon tekutá žlutá, přelita vrstvou parafinu pomnožovací Striktně anaerobní bakterie 3. selenitový bujon tekutá světle žlutá selektivně pomnožovací salmonely 4. Sabouraudův agar 5. Löwenstein-Jenssen 6. Krevní agar (KA) 7. Endova půda 8. Müllerův Hintonové agar 9. KA s 10 % NaCl 10. VL krevní agar 11. Půda XLD 12. Čokoládový agar 13. Levinthalův agar 14. Slanetz-Bartleyho agar B2 – Kultivace běžné flóry z povrchu těla Prohlédněte si kultivační výsledek otisků různých částí lidského těla na plotnu s krevním agarem a zapište, kde jsou přítomny mikroby a případně jak přibližně vypadají jejich kolonie (bílé, šedé, velké, malé apod.) Místo Popis výsledků Palec Rty Jazyk Penis B3 – Kultivace běžné flóry z tělních otvorů Prohlédněte si kultivační výsledek výtěrů z různých otvorů zdravého dobrovolníka na krevním agaru, případně i na Endově půdě, a zapište, jak vypadají mikroby, které jsou přítomny Místo Popis výsledků Krk Nos Ucho Řiť B4 – PCR U PCR je nutno izolovat ze vzorku DNA, poté provést její amplifikaci a pak ji prokázat například gelovou elektroforézou, jako máme na obrázku. V případě reakce PCR je důležité nejen vyhodnotit pozitivitu či negativitu, ale také zabránit falešné negativitě. Ta může být způsobena tím, že vzorek obsahuje nějakou složku, která brání jakékoli amplifikaci DNA. To se pozná tím, že negativní je nejen reakce vzorku, ale i reakce interní kontroly. Pokud je reakce interní kontroly přítomna a reakce vzorku negativní, jde o negativní výsledek. Pokud přítomna není ani jedna reakce, jde o inhibici reakce. Pozor, pokud je pozitivní reakce vzorku, jde o pozitivní výsledek, dokonce i v případě, že reakce interní kontroly je negativní (u výrazně pozitivních vzorků může vzorek spotřebovat veškeré nukleotidy tak, že na interní kontrolu žádné nezbudou). Prohlédněte si následující obrázek, a dle uvedeného textu vyhodnoťte výsledky (zapište „pozitivní“, „negativní“ nebo „inhibice reakce“). Modul C: identifikace bakterií C1 – Identifikace kombinací různých metod. Použijte „Klíč k určování mikrobů“ a určete následující druhy mikrobů Grampozitivní kok, kataláza negativní, neroste na Slanetz-Bartleyho půdě, viriduje, optochin pozitivní Gramnegativní tyčinka, roste na Endově agaru, Hajnova půda zůstává červená, je zelená, voní po jasmínu, má pozitivní oxidázovou reakci Gramnegativní kok, oxidáza pozitivní, INAC negativní, roste na čokoládovém, ale i na bohatším krevním agaru C2 – Identifikace uvnitř bakteriální čeledi. Na základě výsledku biochemického testu dvou bakterií (viz obrázky) určete, o které bakterie jde. Použijte přitom předložené pomůcky. ONPG 1H 1G 1F 1E 1D 1C 1B 1A 2H 2G 2F 2E 2D 2C 2B 2A Kmen: 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 Kód: Identifikace % pravd. T index ONPG 1H 1G 1F 1E 1D 1C 1B 1A 2H 2G 2F 2E 2D 2C 2B 2A Kmen: 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 Kód: Identifikace % pravd. T index