Spektrofotometrie – měření na spektrofotometru Helios

(scénář)

1. část:

Ukázka spektrofotometrického měření je prováděna na jednopaprskovém spektrofotometru Helios d.

Jako příklad bylo vybráno spektrofotometrické stanovení železnatých iontů 1,10-fenanthrolinem. Vzniká oranžově červený komplex s absorpčním maximem při 510 nm.

2. část:

            Pro měření je nutné nejprve pro danou vlnovou délku nastavit nulovou hodnotu absorbance slepého pokusu, což se provádí následujícím postupem.

            Do kyvety dáme slepý pokus, vložíme kyvetu do držáku na kyvety v kyvetovém prostoru spektrofotometru a pro vlnovou délku 510 nm nastavíme nulovou linii.

3. část:

            Pro vlastní stanovení železnatých iontů nejprve připravíme sérii kalibračních roztoků (v našem případě 5) a paralelní roztoky vzorku o neznámé koncentraci železnatých iontů (v našem případě 3). Pro všechny připravené roztoky změříme hodnoty absorbance.

            Nejprve měřeným roztokem vypláchneme kyvetu a po jejím opětovném naplnění týmž roztokem vložíme kyvetu do držáku na kyvety v kyvetovém prostoru spektrofotometru a pro vlnovou délku 510 nm změříme hodnotu absorbance.

            Ještě jednou si zdůrazněme, že při měření každého dalšího kalibračního roztoku i každého dalšího roztoku vzorku o neznámé koncentraci železnatých iontů je třeba nejprve důkladně propláchnout měřeným roztokem kyvetu.

            Tento postup měření provádíme pro všechny kalibrační roztoky i pro všechny paralelní roztoky vzorku o neznámé koncentraci železnatých iontů.

4. část:

            Podívejme se nyní na displeji spektrofotometru na změřené hodnoty absorbancí jednotlivých kalibračních roztoků i paralelně připravených roztoků vzorku železnatých iontů.

5. část:

            Získanou kalibrační závislost vyhodnotíme lineární regresí pomocí metody nejmenších čtverců a ze získané rovnice regresní přímky a absorbancí paralelně připravených roztoků vzorku železnatých iontů vypočteme průměrnou hodnotu koncentrace železnatých iontů ve vzorku.