Protokol

Příprava roztěru hemolymfy

Teorie: Pozorování buněk hemocytů, hemolymfa u bezobratlých

Cíl: připravit roztěr z jednoho zástupce hmyzu (Zavíječ voskový nebo Bourec morušový) ke sledování
hemocytů u hmyzu.

Materiál:

Larvy bource nebo zavíječe, kyvety na barvení, barvící souprava Leukodif (Biolatest) nebo barvící
roztoky na barvení podle Pappenheima (roztok May - Grünwald v poměru 1:1 s vodou, Giemsa barvivo
v poměru 1:9 s destilovanou vodou, metylalkohol), podložní skla, rukavice, alkohol na čištění skel,
nastavitelné mikropipety, špičky, oční nůžky, teplotní vodní lázeň

Postup práce:

Ustřihneme 1 nožku larvy a vytékající hemolymfu zachytíme kapkou na sklíčko a kapku rozetřeme a
sklíčko s nátěrem zahřejeme, např. na topení. Buňky lépe přilnou ke sklu.

Roztěr:

                                            blod-smear3

Roztěry

pushed_fims
 1. příliš tenký a dlouhý
 2. dobrý
 3. příliš krátký, kapka krve byla moc malá
 4. příliš silný, kapka krve byla moc velká

Převzato z  http://www.aum.iawf.unibe.ch/hemosurf/Demo_E/Lab/smears_quality.htm


Barvení podle Pappenheima v kyvetách:

3 min. fixace v kyvetě s metylalkoholem

3 min. May - Grunwald  1:1 s vodou (lépe 2 min.)

15 min. Giemsa - Romanowski  1:9 s vodou

opláchnout ve vodě, nechat schnout

pozn. sklíčka vkládat rubem k sobě do 1 drážky

Barvení soupravou Leukodif 200

ponořit 5x1s do fixačního roztoku č. 1 (metanol), otřít kapky o stěnu nádobky

ponořit 3x1s do činidla č.2 (barvivo Eosin), otřít kapky o stěnu nádobky

ponořit 5x1s do činidla č. 3 (barvivo Azur), otřít kapky o stěnu nádobky

opláchnout v dest.H2O a nechá zaschnout na vzduchu


Vyhodnocení: v roztěru z hemolymfy pozorujeme hemocyty a zakreslíme








Příklad nákresu buněk hemolymfy

Fotografie-0105

Závěr: