Protokol

Příprava roztěru hemolymfy

Teorie: Pozorování buněk hemocytů, hemolymfa u bezobratlých

Cíl: připravit roztěr z jednoho zástupce hmyzu (Zavíječ voskový) ke sledování hemocytů u hmyzu.

Materiál:

Larvy zavíječe voskového, kyvety na barvení, barvící souprava Leukodif (Biolatest) nebo barvící
roztoky na barvení podle Pappenheima (metyl alkohol, kyselé barvivo, zásadité barvivo, voda na
oplach), podložní skla, rukavice, alkohol na čištění skel, nastavitelné mikropipety, špičky, oční
nůžky, imerzní olej, kelímek na mrtvé larvy,  teplotní vodní lázeň

Postup práce:

Ustřihneme 1 nožku larvy a vytékající hemolymfu zachytíme kapkou na sklíčko a kapku rozetřeme a
sklíčko s nátěrem zahřejeme, např. na topení nebo na vodní lázeň. Buňky lépe přilnou ke sklu.

Roztěr:

                                            blod-smear3

Roztěry

pushed_fims
 1. příliš tenký a dlouhý
 2. dobrý
 3. příliš krátký, kapka krve byla moc malá
 4. příliš silný, kapka krve byla moc velká

Převzato z  http://www.aum.iawf.unibe.ch/hemosurf/Demo_E/Lab/smears_quality.htm


ponořit 5x1s do fixačního roztoku č. 1 (metanol), otřít kapky o stěnu nádobky

ponořit 3x1s do činidla č.2 (barvivo Eosin), otřít kapky o stěnu nádobky

ponořit 5x1s do činidla č. 3 (barvivo Azur), otřít kapky o stěnu nádobky

opláchnout v dest.H2O a nechá zaschnout na vzduchu


Vyhodnocení: v roztěru z hemolymfy pozorujeme hemocyty a zakreslíme








Příklad nákresu buněk hemolymfy

Fotografie-0105


Závěr: