Cvič. č. 10. Stanovení krevních skupin

Pomůcky: Komerční séra (EXBIO Olomouc) anti-A (IgM) monoklonální1:8, anti-B (IgM) monoklonální1:32,
lektin anti-H 1:2; náplav diagnostických erytrocytů  A,B,O; fyziol. roztok 0,85% (0,15 mmol/l)
NaCl, stojánky na epiny, malé epiny 0,5ml, nejmenší špičky, pipeta s rozměren 1 μl - 10 μl,
rukavice, odběrové pero, bodce, heparinové tubičky, fixy, skla, barvení, roztírátka, destičky
s otvory, desinfekce

Krátké ilustrativní video

https://www.youtube.com/watch?v=J5xSUhyXyIE


Aglutinace je imunitní děj, reaguje protilátka s korpuskulárním antigenem, která vede ke vzniku
aglutinátu „vločkové konzistence.  U reakce zv. hemaglutinace jsou korpuskulárním antigenem
erytrocyty. Výsledný shluk erytrocytů je dobře pozorovatelný pouhým okem a je dostatečně pevný při
standardním způsobu třepání. Nevýhodou hemaglutinace je nízká citlivost a omezená životnost
erytrocytů.


Aglutinační reakce se obvykle hodnotí vizuálně tzv. na čtyři křížky a jsou to metody jednoduché a
levné, ale také málo citlivé. Používají se hlavně pro průkaz antigenů erytrocytů a celé řady
bakteriálních antigenů.

Základem je reakce:

Aglutinogen (tj antigen) reaguje s aglutininem (tj protilátka) za vzniku aglutinátu – sraženiny
(imunokomplexu).

krevní skupina antigen   A   B  0   AB

v membráně erytrocytů  A   B  H  A i B


Pomůcky: podložní víčka na diagnostiku krevních skupin s kulovitými otvory, desinfekce, vatičky,
pero na odebírání krve z prstů, bodce, tubičky s heparinem, epiny, stojánek, roztírací umělohmotné
tyčky, pipeta s rozměren 1 μl - 10 μl, rukavice;

Červené krvinky všech skupin -

lahvičky s protilátkami proti krevním antigenům:

POUŽITÁ DIAGNOSTIKA

•Monoklonální diagnostikum anti-A (výrobce Sanquin, Holandsko; dodavatel EXBIO Olomouc s.r.o.),
ředění 1:8

•Monoklonální diagnostikum anti-B (výrobce Sanquin, Holandsko; dodavatel EXBIO Olomouc s.r.o.),
ředění 1:32

•Lektin anti-H (výrobce Sanquin, Holandsko; dodavatel EXBIO Olomouc s.r.o, •Monoklonální
diagnostikum anti-H (výrobce Immucor Gama, Německo; dodavatel APR Praha s.r.o., ředění 1.2



·        Postup:

·        Odběrovým perem v rukavicích odebereme kapky krve z prstu do heparinové tyčinky

·        kapku krve nakapeme na podložní sklíčko a rozetřeme

·        dále necháme krev stéci do epiny ve stojánku. Odtud 5µl krve napipetujeme do 500 µl
fyziol. roztoku

·        z naředěných protilátek anti A, B, H odebereme asi 3 μl a pipetou nakapeme na podložní
sklíčko s kulovitými prostory

·        pak z odebrané krve nabereme  asi 3 μl krve a nakapeme na sklíčko do nakapaných
protilátek. Vezmeme umělohmotné roztírátko a kapku krve s kapkou protilátek smícháme a čekáme na
výsledek, po každém míchání roztírátko umyjeme

·        nachystáme kontrolní vzorky kr. skupin komerčně zakoupené k porovnání, pokud máme

·        výsledek: Pokud došlo k aglutinaci, tj srážení krvinky s protilátkami za vzniku
aglutinátu, jde o danou krevní skupinu. Pokud nedošlo k tomuto ději, krev patří do jiné krevní
skupiny.

·        vyhodnocení: vyhodnotíme citlivost reakce, tj. uvedeme, při kterém ředění byla reakce
ještě pozitivní. Používáme hodnocení na čtyři křížky:


++++ (100% aglutinace) aglutinát se po protřepání vůbec nerozpadá +++ (75 %) ++ (50 %) + (25 %) 0
(bez aglutinace) lze snadno roztřepat až na původní erytrocytární suspenzi

Krev patří do skupiny….