9. TRÁVENÍ Stanovení činnosti trávicích fermentů Úkol č. 1: Orientační stanovení pH slin Materiál: univerzální pH papírek, sliny Pracovní postup: Krátkým vložením univerzálního pH papírku do úst (1min) určíme po srovnání s barevnou stupnicí pH slin (rozsah by měl být 7,5-8, měl by být slabě zásaditý) Výsledek: Úkol č. 2: Trávení škrobu ptyalinem Materiál: roztok škrobu, zkumavky, sliny, Fehlingovo činidlo (I. a II.), vodní lázeň, další vzorek-maso (kuřecí, vepřové nebo ryba), rohlíky Pracovní postup: Do jedné zkumavky dáme 1ml zředěný roztok škrobového mázu a přidáme sliny, do druhé zkumavky dáme pouze škrobový maz. Druhý z dvojice vloží do třetí zkumavky v ústech natrávený kousek rohlíku nebo chleba a v další – čtvrté zkumavce bude jen kousek rohlíku nebo chleba. V páté zkumavce bude kousek masa a sliny. Po zahřátí (temperace při 37 – 38 °C) provedeme Fehlingovu zkoušku (přidáme 2 ml směsi Fehlingu I. a II.(1m a 1ml). Posléze se zkumavky zahřívají nad kahańem asi 2 min. Pozn.: Ve zkumavce se slinami se objeví červené (žlutočervené) zbarvení dokladující přítomnosti glukózy. V případě jiného zbarvení nedošlo k trávení na glukózy. Výsledky Fehlingovo činidlo je roztok užívaný k rozlišení sloučenin obsahujících aldehydické a ketonické funkční skupiny. Používá se jako test redukujících a neredukujících cukrů. Aldehydy takto (komplexně a v zásaditém prostředí) vázané kovy redukují na barevný produkt. Dokazuje také redukční vlastnosti glukózy, neboli přítomnost redukujících sacharidů všeobecně). To je velmi důležité pro diagnózu diabetu (umožňuje odhalit cukr v moči). Složení: Aktivní činidlo Fehlingova roztoku je síran měďnatý a jeho kationt Cu2+, který slouží jako oxidační činidlo. Fehlingovo činidlo B (je čirý roztok Rochellovy soli (vinanu sodno-draselného) a hydroxidu sodného v destilované vodě (Fehlingovo činidlo B). Interpretace (závěr): popište výsledek v jednotlivých zkumavkách Úkol č. 3: Trávení bílkovin pepsinem Materiál: 2 % pepsin (2 – 3 g pepsinu rozpustíme v 50 ml vody), zkumavky, 0,4 % HCl, destilovaná voda, Biuret (NaOH 0,5ml, CuSO[4] 0,5ml), vzorky: bílek (bílkovinný roztok BR), maso Pracovní postup: Do zkumavek napipetujeme následující roztoky (v ml): pepsin HCl BR H[2]O MASO 1. 3 2 3 7 2. 3 2 3 7 povařit BR s vodou 3. 3 2 - 7 4. 3 - 3 9 5. - 2 3 10 6. 3 2 10 1cm^3 masa Zkumavky temperujeme v termostatu při 38 °C asi 40 minut. V každé posléze provedeme biuretovu reakci (důkaz peptidové vazby za pomoci roztoků NaOH (0,5ml) a CuSO[4]). Přidáme 0,5 ml NaOH a 5 – 10 kapek CuSO4. Výsledky Interpretace: popište výsledek v jednotlivých zkumavkách (Biuretová reakce je reakce, při níž se dokazuje bílkovina pomocí směsi roztoků hydroxidu sodného NaOH a síranu měďnatého CuSO[4]. Bílkovina se při důkazu zbarví modrofialově. Biuretovou reakcí dokážeme peptidové vazby, kterými se navzájem váží aminokyseliny. Ty tvoří v alkalickém prostředí se solemi mědi charakteristicky barevný komplex-biuret. (Do zkumavky dáme cca 2 ml odfiltrovaného mléka, přidáme cca 10% roztok hydroxidu sodného, min 1 ml, aby se směs silně zalkalizovala. Poté přidáváme po kapkách roztok síranu měďnatého a lehce promícháme skleněnou tyčinkou. Poté vložíme do zkumavky a začneme pozvolna zahřívat. Reakcí by měl vznikat biuret odlišné barvy.) Závěr: Nebyl proveden Úkol č. 4: Trávení bílkovin trypsinem Materiál: zkumavky, kádinka, 2 – 3 g pankreatinu (rozemletá slinivka břišní), destilovaná voda, 0,2 % uhličitan sodný Na[2]CO[3], Biuret (NaOH 0,5ml, CuSO4 0,5ml), vzorky: maso, bílkovinný roztok Pracovní postup: Do zkumavek napipetujeme následující roztoky (v ml): trypsin Na[2]CO[3] BR maso 1. 5 3 3 2. 5 3 - 3. 5 - 3 4. - 3 3 5. 5 3 3 Zkumavky temperujeme při 37 °C (vodní lázeň, termostat). Přidáme 2 – 3 ml NaOH a 5 – 10 kapek CuSO4. Reakci je možné provádět s čerstvým i koagulovaným bílkem (natráveným). U koagulovaného bílku vzniká biuretovou reakcí červenofialové zbarveni, u čerstvého bílku zbarvení modrofialové. Výsledky Interpretace