Biochemie- cvičení 1 PRÁCE S AUTOMATICKÝMI PIPETAMI Použití automatických dávkovacích pipet v laboratoři Pro přesné a bezpečné dávkování roztoků, reagencií a vzorků se v praktických cvičeních z biochemie používají automatické pipety. Rozlišujeme 2 druhy pipet :  pipety s fixním objemem - na ten je pipeta kalibrována a lze s ní dávkovat pouze na ní uvedené množství (objem) roztoku  pipety s nastavitelným objemem – lze nastavit požadované množství (objem) roztoku v rozsahu označeném na pipetě. V praxi se nejvíce používají pipety s nastavitelným objemem v rozsahu 0.5 – 1000 μl. Při manipulaci s pipetami dodržujte prosím tato základní pravidla: 1. k pipetám přistupujte jako k finančně nákladnému vybavení laboratoře, které vám usnadní, urychlí a upřesní práci při praktických cvičeních 2. při manipulaci s nastavitelnými pipetami zvažte, jaký objem potřebujete na pipetě nastavit a manipulujte otáčením koncem pístu jen v rozsahu objemů, pro které je pipeta určena. Nastavování objemu pod a nad uvedené rozmezí je zakázáno. Vede k přetočení vnitřního ústrojí pipety, vyšroubování a uvolnění dávkovacího pístu uvnitř pipety a většinou k jejímu trvalému poškození 3. pokud si nejste jisti správným nastavením požadovaného objemu, požádejte vyučujícího, rád vám nastavení zkontroluje Postup při pipetování roztoků: Pro dosažení správných výsledků při praktickém cvičení pracujte tak, aby nedošlo ke kontaminaci roztoků reagencií a vzorků, které máte pro úlohy k dispozici. Pro pipetování reagencií i vzorků používejte vždy čisté špičky. Ty máte umístěné v zásobních kádinkách na vašem pracovním laboratorním stole. Použité špičky odkládejte do kádinek naplněných vodou umístěných rovněž na laboratorním stole. Obě kádinky jsou opatřeny popisem. Při pipetování dbejte na to, aby špička, kterou před použitím na pipetu nasadíte, dobře těsnila. Stiskněte zlehka píst do první polohy zarážky, ponořte špičku do roztoku a lehce uvolněte píst. Roztok nechejte vždy volně nasát, pohyb – nasávání neurychlujte prudkým uvolněním pístu, protože by se vám do špičky nasál vzduch a odměřené množství (objem) by nebyl správně nadávkován. Stejným způsobem = stiskem pístu vypusťte nabrané odměřené množství roztoku do příslušné zkumavky (pokud možno na dno). Opakovaným stiskem pístu i do druhé polohy zarážky vyfouknete ze špičky zbytek roztoku, kapaliny, která stekla po vnitřních stěnách plastové špičky. Takto kvantitativně přenesete požadovaný objem roztoku do zkumavky. V žádném případě nepokládejte pipetu s nasátým roztokem ve špičce na laboratorní stůl, ani je nedržte ve vodorovné poloze. S nasátým objemem roztoku manipulujte s pipetou vždy ve svislé poloze. Je to z toho důvodu, aby nedošlo k zatečení roztoku do vnitřního ústrojí pipety s dávkovacím pístem, kde by mohlo dojít k poleptání a nevratnému poškození pístu pro přesné dávkování roztoků. Pro názornost vám vyučující v úvodním cvičení manipulaci s pipetami předvede a sami si ji vyzkoušíte. Správným pipetováním zajistíte přesnost provedení vašich praktických úloh a ochráníte svoje zdraví při práci v laboratoři. Úloha č.0 Napipetujte ve dvojcích roztoky dle předlohy pomocí mipety s rozsahem do 1ml SKUPINA A 2x žlutá 400 μl 3x růžová 500 μl 3x modrá 600 μl 3x fialová 700 μl 1x čirá 800 μl SKUPINA B 3x žlutá 300 μl 2x růžová 500 μl 3x modrá 600 μl 2x fialová 700 μl 1x čirá 800 μl SKUPINA C 2x čirá 200 μl 3x žlutá 300 μl 2x růžová 400 μl 3x modrá 600 μl 2x fialová 800 μl Přehled možných nastavení objemů a značení rozsahů nejběžněji používaných pipet: Zopakujte si převody jednotek : 1000 μl = 1 ml 100 μl = 0,1 ml 10 μl = 0,01 ml Rozsah 2 – 20 μl : nastavení v okénku pipety 2 0 0 2 _ - 0 0 20 μl 2 μl Rozsah 20 – 200 μl : nastavení v okénku pipety 2 1 0 0 0 0 5 8 5 2 0 0 0 0 0 200 μl 150 μl 80 μl 50μl 20 μl Rozsah 200 – 1000 μl : nastavení v okénku pipety 1 0 0 0 - - - - 0 8 5 2 0 0 0 0 1000 μl 800 μl 500 μl 200 μl 1 ml 0,8 ml 0,5 ml 0,2 ml Zopakujte si převody jednotek : 1000 μl = 1 ml 100 μl = 0,1 ml 10 μl = 0,01 ml Pro rychlou orientaci :  na pipety o objemu 2 l - 100 l se většinou používají žluté nebo bezbarvé špičky  na pipety o objemu 200 - 1000 l se používají modré špičky