datum:

   Jméno:

   téma:                                               Mikrotuberizace

   Metoda mikrotuberizace je využívána při množení, skladování a distribuci šlechtitelského
   materiálu vegetativně rozmnožovaných rostlin. Bramborové hlízky se              v podmínkách
   in vitro vytvářejí z axilárních meristémů prýtu. Mikrohlízky jsou modifikované stonky, které
   na apexu obsahují množství dormantních meristémů (“bramborová očka”). Dormanci lze přerušit
   skladováním mikrohlízek při nižších teplotách po dobu několika týdnů.

   

   Materiál:   kultura  prýtů brambor různých kultivarů

   médium        M-S medium, sacharosa 80 g.l^-1, pH 5,7 (MS-8)

                           udržovácí M-S médium

   Postup:

   1.       Přenes kultury brambor z kultivační místnosti do sterilního laminárního flowboxu.

   2.       Připrav sterilní nástroje a kultivační nádoby s čerstvým médiem (M-S, MS-8).

   3.       Kultivační nádoby otevři a ožehni hrdlo nádob plamenem.

   4.       Přenes kultury do sterilní Petri misky.

   5.       Odřízni vrcholovou část prýtu (2 cm) s neporušeným vrcholovým meristémem a inokuluj
   ji do udržovácího M-S média pro další kultivaci.

   6.       Zbylou část prýtu rozděl na jednonodální segmenty a podle pořadí na prýtu je inokuluj
   do MS-8 média.

   7.       Opatrně ožehni hrdlo otevřené kultivační láhve, uzavři a popiš.

   8.       Kultivuj v kultivační místnosti na světle (bílé zářivky, 30μmol.m^-2.sec^-1,
   fotoperioda 8/16 hod) při 20-oC po 2 - 4 týdnů.

   

   hodnocení

   V průběhu kultivace kontroluj kontaminace kultur.

   Zaznamenej počet mikrohlízek u každého kultivaru.

   Všimni si rozdílů při tvorbě mikrohlízek v závislosti na poloze nodálního segmentu na prýtu
   (topofýza) a vysvětli jejich podstatu. Vyhodnoť rozdíly mezi kultivary ve velikosti a zbarvení
   mikrohlízek.

   

   Literatura:

   1.        McCown, B.H. and P.J.Joyce. 1991 Automated propagation of microtubers of potato. In:
   I.K.Vasil /Ed./, Scale – Up and Automation in Plant Propagation, pp.95 – 109. Academic Press,
   San Diego.

   2.        Jackson S.D. (1999): Multiple Signaling Pathways Control Tuber Induction in Potato.
   – Plant Physiol., 119: 1-8.