Amesův test
Bakteriální test genotoxicity
Amesův test
•  Základní screeningový test ke sledování genotoxicke aktivity testovaných látek
•  Detekce bodových mutací zodpovědných za rakovi n otvor né bujení
•  Test všeobecně uznávaný národními normami
Princip testu
•  Test je založen na detekci bodové reverzní mutace geneticky modifikované bakterie (Salmonella typhimuríum a Escherichia coli) neschopné syntézy esenciálních aminokyselin (His a Try)
•   Reverzní mutaci způsobenou testovanou látkou v pozitivním případě detekujeme podle schopnosti růstu bakterie na médiu
bez esenciálních aminokyselin
Provedení testu
•   příprava inokula s mutovanými, His-bakteriemi na médium bez esenciálních AMK
•   příprava testované látky ve více koncentracích
•   metabolická aktivace, přidání mitochondriální S9 frakce z jater hlodavců pro aktivaci promutagenů
•   příprava blanku bez inokula, negativní kontroly pro odhalení spontánních revertních kolonií a kontroly pozitivní s AMK
•   inkubace plotny 48-72 hodin při teplotě 37°C
Hodnocení výsledků testu
•   Po inkubaci odečteme počet kolonií na jednotlivých plotnách (počet kolonií revertantu je v přímém vztahu k mutagenní aktivitě látky)
•   Porovnáme počet kolonií s negativní kontrolou
•  Významnost odpovědi ve variantě se vzorkem zjistíme statistickým hodnocením pomocí t-testu
Výhody Amesova testu
•  Rychlost testu, jednoduchost a finanční nenáročnost
•  Použití prokaryota - dobrá průchodnost mutagenu k cílové molekule
•  Rozšířenost testu, široká databáze výsledků, srovnání výsledků jiných testů
Nevýhody Amesova testu
• Problém s extrapolací výsledků z prokaryotické buňky na buňku eukaryotickou (odlišná absorpce, metabolismus, chromosomova struktura a reparační mechanismy DNA)
Děkuji za pozornost
http://www.oecd.org/dataoecd/18/31/1948418.pdf