Časový harmonogram:

Pondělí: 9:00 – 15:00

Úterý: 8:00 – 16:00

Středa: 9:00 – 12:00

Čtvrtek: 9:00 – 12:00

Pátek: dle potřeby k dokončení probíhajících úloh



1. Úloha – Izolace restriktáz

·         Pondělí

o   naočkování do 500 ml bujónu

·         Úterý

o   izolace restriktáz Sau96I a Sau3AI

·         Středa

o   dokončení izolace, ověření aktivity izolovaných restriktáz

·         Čtvrtek

o   elektroforéza, vyhodnocení


2. Úloha – Konstrukce RE mapy

·         Pondělí

·         Úterý

·         Středa

o   návrh restrikčních směsí a štěpení DNA rekombinantního plazmidu

·         Čtvrtek

o   elektroforéza

·         Pátek

o   sestavení RE-mapy


3. Úloha - Modifikace konců PCR fragmentu a klonování

·         Pondělí

o   PCR s primery nesoucími RE místa na 5’-koncích

o   izolace pBluescript na kolonkách, měření koncentrace

o   přečištění PCR-produktu na kolonkách

o   štěpení plazmidu i inzertu EcoRI+BamHI

o   kontrolní elektroforéza

o   příplava misek LBA s Amp, IPTG a Xgal


·         Úterý

o   přečištění štěpeného plazmidu a inzertu na kolonkách

o   příprava ligační směsi

o   transformace

o   příprava misek LBA s Amp

·         Středa

o   přeočkování transformantů

·         Čtvrtek

o   izolace získaných rekombinantních plazmidů – lyze varem

o   štěpení izolovaných plazmidů EcoRI a BamHI + kontroly

·         Pátek

o   elektroforéza