Využití pokusných zvířat v experimentu Vztah človeka ke zviratum: Antropocentrické pojetí: hodnota zvířete je podřízena lidským cílUm Biocentrické pojetí: všechny žijící bytosti mají svou vnitrní hodnotu Zoocentrické pojetí: opak antropocentrického pojetí 1959 - Russel, Burch - publikovali ve své knize „The principles of humane experimental technique" tzv. zásadu tří „R": představuje v současné době prosazovaný odpovědný a rozumný přistup k používáni zvířat v experimentu Replacement Reduction Refinement Náhrada Redukce počtu Zjemnění Počty laboratorních zvířat Celosvetové: 48 milionu Evropa: 11,6 milionU Československo: 0.3 milionU Zastoupené druhy: 1990-1991 □ myši a potkani □ morčata a králíci □ ptáci □ ryby, plazi Na co nejvíce: -farmacie, nové léky -testování vakcín - testy toxicity -onkologický výzkum -základní výzkum, výuka Legislativa Zákon 246/1992 Sb., na ochranu zvířat proti týrání Zvířetem se rozumí obratlovec kromě člověka, nikoliv však plody nebo féty Pokusným zvířetem zvíře, které je použito k pokusným účelům, je s ním manipulováno a jsou vytvářeny podmínky a navozovány procesy, které v přirozených podmínkách neexistují ařízení ■ f l f V /V , | f f V i chovná - chována a množena zvířata pro pokusné ucely dodavatelská - dodává za úplatu zvířata určená k pokusným účelům uživatelská - zvířata používána k pokusným UCelům Vyhláška 311/1997 Sb., o chovu a využití pokusných zvířat -Typy objektů a prostor v zařízeních - systémy chovu: Otevřený — konvenční zvířata vstup i výstup zvířat, osob i materiálu je bez bariéry Bariérový - SPF (specific pathogen free) zvířata ochrana před průnikem nežádoucích vlivů z vnějšího prostředí Izolátorový - gnotobiologická zvířata " " prostor pro zvířata trvale a úplně oddělen od vnějšího prostředí a osob, které se zvířetem manipulují Genetika laboratorních zvířat Z genetického hlediska rozlišujeme dvě základní skupiny: Geneticky, definovaná - isogenní Inbrední kmeny - produkt příbuzenské plemenitby mezi bratrem a sestrou po více než 20 generací. Homozygotnost uvnitř kmene více než 98%. eticky nedefinovaná - neisogenní Potomci skupiny zvířat geneticky heterogenních. Minimální příbuzenská plemenitba. Vlastnosti a využití: větší, odolnější, více plodní, levnější, toxikologické a farmakologické studie - kde potřebujeme vzorek „divoké populace". Větší n. Laboratorní myš Manipulace: - Rozdíly mezi kmeny - nutno znát! Uchopovat uprostřed ocasu, položit předními končetinami na drsnou podložku, chytit kůži na krku a hřbetní straně a ocásek Odběr krve: z ocasu, orbitálního sinu, karotidy, srdeční punkce Aplikace látek: - Perorálně - pinzetou na kořen jazyka, tekuté kapátkem, sondou do žaludku - Subkutánně - pod volnou kůži na hřbetě za krkem - Intramuskulárně - do stehenní svaloviny - Intravenozně - do postranní ocasní žíly - Intraperitoneálně - jednoduché, pomalejší resorbce, vstřebávání velkou plochou peritonea Alternativní metody Nejvíce využívány při testování toxicity Buněčné 1 a tkáňové kultury - rostlinné, živočišné (lidské) př. Testy na fotosenzitivitu a fototoxicitu na fibroblastech ■ Testy na citlivost rakovinných buněk vůči cytostatikům ■ Neutral Red Assay- sledovaná toxická látka se přidává spolu s kontrastní barvou, která obarví pouze živé buňky - princip vitálního barvení - Kultury buněk lemujících zuby- testy na dráždivost zubní výplně -Model lidské kůže - rekonstruovaná epidermis s stratum corneum -sledovaná toxická (leptající) látka musí proniknout přes stratum corneum a poškodit ouňky hlubších vrstev - sníží se jejich životnost. Existují komerčně dostupné sety na tato stanovení - EPISKIN Bakterie a kvasinky Další možnosti alternativních metod „óčítačóvé modely '*./'"[ / ^ > Neinvazivní . zobrazování(CT, MNR, Kuřecí e/nbrya - testy terotogenity Placenty (model pro mikrochirurgii, transport léků) Výzkum populace. (strava - ateroskleróza)/* Využití, bezobratlých - nítěnky - toxicita 1 LD 50, hodnotí se pohyb živočicha Vajíčka drápatek na testy teratogenity Alternativní metody s použitím zvířat Modifikace klasického testu orální toxicity Původně minimálně 30 potkanů, nyní pouze 6 Kožní dráždivost nikoli na živém zvířeti ale na terčících kůže z potkanů Kombinované studie toxicity a vlivu látek na reprodukci Bez použití zvířat: Draize test dráždivosti oka: původně na králících, jejich oko je ale citlivější než lidské - větší plocha a méně slz. Alternativní testy: - sledovaná látka se kape do proteinového roztoku získaného z fazolí - místo králíků model kuřecích zárodků