METODA PRO STANOVENÍ AKUTNÍ ORÁLNÍ TOXICITY PRO VČELU MEDONOSNOU
Metoda C.16 podle prílohy smernice 2001/59/ES
Metoda
•
•
Podstata metody: Dospělé dělnice včely medonosné (Apis mellifera) se exponují řadě dávek zkoušené látky rozptýlené do cukerného roztoku. Včely jsou poté krmeny stejným roztokem neobsahujícím zkoušenou látku. Mortalita se zaznamenáva denně během alespoň 48 hodin a porovnává se s kontrolními hodotami.
Validita testu:
> Průměrná mortalita u všech kontrolních skupin nesmí na konci zkoušky překročit 10%.
> LD50 pro referenční látku odpovídá předpokládané hodnotě.
Popis zkušební metody
•
•
•
•
Včelstvo: mladé dospělé včely, dělnice téhož plemena a stáří, stejně krmené
Vybírají se v den zkoušky, nebo večer před zkouškou a následně jsou drženy v podmínkách zkoušky.
Chov probíhá v čistitelných a dobře větraných klíckách, nasazují se skupiny po 10 včelách, teplota 25±2°C, vlhkost 50-70%
Před začátkem zkoušky necháme včely 2 h hladovět, aby byly rovnocenné
Postup
•
•
•
Požaduje se alespoň 5 zkušebních koncentrací tvořících geometrickou řadu a pokrývající rozsah LD50. Každá zkušební koncentrace se podá alespoň třem paralelním zkušebním skupinám o 10 včelách. Dále se nasazují 3 kontrolní skupiny a zkušební skupiny pro použité rozpouštědlo.
Podávání dávek: každé zkušební skupině včel se podá 100-200 |jl 50% vodného cukerného roztoku obsahujícího zkoušenou látku. Po spotřebování potravy (3-4 hod) se odebere krmící zařízení a nahradí se zařízením obsahujícím pouze cukerný roztok, který mohou přijímat dle libosti.
Délka zkoušky: 48 hodin od okamžiku kdy byl zkušební roztok nahrazen samotným cukerným roztokem. Pokud mortalita v kontrole nepřekročí 10%, zkoušku můžeme prodloužit na 96 hodin.
Protokol o zkoušce
• Obsahuje informace o zkoušené látce (fyzikální a chemické vlastnosti), testovacím druhu (název, plemeno, stáří, zdravotní stav) a zkušebních podmínkách (teplota, vlhkost, velikost a materiál klícek, příprava roztoků, datum).
• Výsledky: popisujeme výsledky orientační zkoušky, mortalitu pro každou koncentraci v každém čase (graf), hodnoty LD50, metody pro jejich stanovení, mortalita v kontrolních skupinách, jiné účinky (neobvyklé chování, rychlost spotřebování potravy,... )
METODA PRO STANOVENÍ AKUTNÍ KONTAKTNÍ TOXICITY PRO VČELU MEDONOSNOU
Metoda C.17 podle přílohy směrnice 2001/59/ES
Metoda
Podstata metody: Dospělé dělnice včely medonosné (Apis mellifera) se exponují řadě dávek zkoušené látky rozpuštěné ve vhodném nosiči přímou aplikací na hrudník jako kapičky. Délka trvá 48 hodin, max. 96 hodin.
Validita testu:
> Průměrná mortalita u všech kontrolních skupin nesmí na konci zkoušky překročit 10%
> LD50 pro referenční standard odpovídá specifikovanému rozsahu
•
•
Popis zkušební metody
•
•
•
Včelstvo: mladé dospělé včely, dělnice téhož plemena a stáří, stejně krmené
Vybírají se v den zkoušky, nebo večer před zkouškou a následně jsou drženy v podmínkách zkoušky.
Chov probíhá v čistitelných a dobře větraných klíckách, nasazují se skupiny po 10 včelách, teplota 25±2°C, vlhkost 50-70%
• Včely mohou být za účelem aplikace zkušební látky narkotizovány Co2 nebo dusíkem.
• Zkušební látka se aplikuje jako roztok v nosiči, tj. v organickém rozpouštědle (aceton, dimethylformamid, dimethylsulfoxid), nebo ve vodě se smáčedlem. Jako kontrolní roztoky se používají dvě samostatné kontrolní skupiny: roztok ve vodě a roztok s rozpouštědlem/nosičem.
Postup
•
Požaduje se alespoň 5 zkušebních koncentrací tvořících geometrickou řadu a pokrývající rozsah LD50. Každá zkušební koncentrace se podá alespoň třem paralelním zkušebním skupinám o 10 včelách. Dále se nasazují 3 kontrolní skupiny a zkušební skupiny pro použité rozpouštědlo.
Podávání dávek: u narkotizovaných včel se jednotlivě provede lokální aplikace. Objem í|jl roztoku obsahující zkušební látku ve vhodné koncentraci se aplikuje mikroaplikátorem na zádovou oblast hrudníku každé včely.
Délka zkoušky: 48 Pokud mortalita v kontrole nepřekročí 10%, zkoušku můžeme prodloužit na 96 hodin.
Protokol o zkoušce
• Obsahuje informace o zkoušené látce (fyzikální a chemické vlastnosti), testovacím druhu (název, plemeno, stáří, zdravotní stav) a zkušebních podmínkách(teplota, vlhkost, velikost a materiál klícek, příprava roztoků, datum).
• Výsledky: popisujeme výsledky orientační zkoušky, mortalitu pro každou koncentraci v každém čase (graf), hodnoty LD50, metody pro jejich stanovení, mortalita v kontrolních skupinách, jiné účinky (neobvyklé chování, rychlost spotřebování potravy.. )