mierni
-
Test akutní toxicity na Daphnia magna dle ČSN EN
ISO 6341 (1997)
Michal Dymák Veronika Navrátilová
20
Podstata testu
jišťuje se počáteční koncentrace
		obilizuje	l 5(		testovaných			
jedinců								
- 24h		-> 24h EC50						
48h -> 48h EC5
->
0
dmínky zkoušky
oda 16h svetlo/8h
tky podléhající rozkladu na svetle - testovat ve tme
Teplota 20°C ± 2°C
Bez toxických výparů či prachu ovlivňujících průbeh testu / /
Testová
anismus
Daphnia magna Strauss (Cladocera, Crustacea)
Dafnie je vodní korýš
Je to konzument
naupiiové očko
složené oko
antenuiy
končetiny řitní otvor
drápky
abdomen
dvouvětevné antény
hepatopankreas
netvové soustava srdce
vaječník
střevo
zárodečný prostor \ s vyvíjejícími se zárodky
spina
Daphnia magna Strauss
anismus
Matečný chov krmíme 1x denně mikroskopicko
raso
Do testu nasazujeme jedince mladší 24 hodin
V předstihu (2-3 dny) odlovíme gravidní samice do samostatné nádrže
Po vylíhnutí síťkou lovíme narozené jedince a nasazujeme ihned do testu
anismus
Většinou se udržuje chov a mladí dinci se používají na testování
je
padně je možné komerčně získat tzv. daphtoxkit obsahující tzv. efipi což jsou zvláštní chitinová pouzdra uzavírající zimní vajíčka - jedná se
tedy o dormantní stádia perlooče
k
MISU!
janismus
Použití testu pro testování:
Rozpustných chemických látek i Průmyslových odpadních vod Povrchových či podzemních vod
■
adů a
Ředící voda - médium
Používáno během testu jako médium pro perloočky
efinované slo
CaCl2 • 2H2 MgSO4 • 7H2O •NaHCO3
• KCl 0,23 g/l
i Každou navážku rozpustíme v 1 destilované vody
■ pH roztoku 7,8 ± 0,2
1,7
4,93 g/l 2,59 g/l
0,23 g/l
Před použitím v testu provzdušňujeme do nasycení
pH média7,8 ± 0,2
ní vzorki
ěrovou nádob
Provésl
t nej
dél
e 6 hod
in po
ku - preauprax vzorku
Rozpustíme známé m v určeném objemu ro
zpo
ství vzorku tědl
Rozpouštědlo nejčastěji destilovaná voda
Nádoby z inertního materiálu
Samotné testován'
Smícháme definované množství roztoku
s definovaným množstvím ředící
vody
van
oztok odpadu se dávkuje do série nádob ve zvyšujícím se množství - koncentrační řada
T3 n-n Vo X					
DaRKa C.		Konceniľace v %			
	1			100	
	2			50	
	3			25	
	4			12,5	
5				6,25	
Samotné testován
Do každé nádoby 20 jedinců -
ml roztoku na jedince
minimáln
Negativní kontrola - stejné podmínky avšak místo roztoku odpadu je přidána destilovaná voda
■
Samotné testován'
Běhe
■ j
m testu
anismy ne
Po 24/48 h
inci
počítají imobilizovan
Imobilizovaný jedinec je takový, který se po poklepání do 15s nerozplave i když např. hýbe antenami
ěřování citlivosti
Pravidelne se chov testuje na citlivost referenčním toxikantem r2O
K2Ci
2^7
Průbeh stejný jako normální tes
si
avšak místo vzorku je přítomen dichroman v koncentrační řade
Určení EC50
Spočítáme počty imobilizovanýc
din
je
ro
ncentr
ta zaznamenáme do tabulky
Určení EC50
kontrola
0,2 mg/l
0,4 mg/l
0,8 mg/l
1,6 mg/l
3,2 mg/l
24
48
24
48
24
48
24
48
24
48
24
48
0 0
0
0 0
0 0
0 0
2
4 4
5 5
5 5
5 5
0
0
0
0
0
1
2
5 5
4
5
5
5
Celkem
0
0
0
2
5
13
12
15
15
15
% efekt
0
6,67
0
6,67
0
13,33
25
65
80
100
100
100
y vytvoříme bodový graf
1
1
1
1
1
1
1
1
1
Určení EC50
Imobilizace Daphnia magna po 48 hodinách
120
100
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5
c K2Cr207 (mg/l)
křivku zlogaritmujeme
Určení E
logaritmovaná křivka imobilizace Daphnia magna po 48 hodinách
120	
100	^----*
H£ 60	
20 ♦---- n	
i                              i u	
log c K2Cr2O7 (mg/l)
y = 171,64x + 81,634
y = 171,64x + 81,634
70 60 50
40 30
EC50 (48h) = 0,65 mg/l
20
10
-0,45 -0,4        -0,35 -0,3        -0,25 -0,2        -0,15 -0,1 -0,05
EC50 = (50-81,634)/171,64
0
0
alidita
I I   ^j
9j
Povolená maximální mortalita kontroly je 10 %.
Test probíhá při stálé teplotě 20 °C ± 2 °C
Díky
za pozornos
t!