OECD 218 Test toxicity vodních sedimentů na pakomárech Katarína Bányiová; Josef Ospalík Modelové organismy • Pakomár Chironomus sp. (samec k rozeznání dle ochmýřených tykadel) • Podmínky pro chov zahrnuty v guideline 218 Chironomus riparius Instrumentace Kádinky 600 ml, d=8 cm; zakryté Plastový disk na zabránění resuspendace sedimentu při přípravě Termostat Pasteurova pipeta na provzdušnění Nádoba pro test A 5 A: lľ-2 Ľ.Y.DL. E. :be La verte d p!.aLdc cups t . :be hp'.esi eqwsure beater D: lľe w-3teresĽhaa=e lepseľi pons E: waTŕi F. :.eiLii-iúr Voda Sediment • Doporučuje se uměle připravený sediment naspikovaný testovanou látkou • Definované složení (viz. Guideline 207), známý původ složek • Bez kontaminace konkurenčními bezobratlými, těžkými kovy, org. polutanty • 2-3 cm2 sedimentu na larvu Testovaná látka • Rozpuštěná v destilované vodě, promýšená se sedimentem •V případě nerozpustné látky se postupuje s přídavkem rozpouštědla, promíšení s 10 g písku s následným odpařením rozpouštědla a promýšením se sedimentem • Promíšení se sedimentem v mlýnku/mixeru • Ustálení testované směsi (až týdny, u látkek podléhajících degradaci 48 h) + měření c test. látky v různých vrstvách systému • Vzorky by měly být homogenní Test • Statický test (doplňuje se pouze voda bez testované látky), ve výjimečných případech i semi-statické či kontinuální (při ovlivnění chemické rovnováhy vodou užitou při testu) • Efekt prodloužené expozice v sedimentech žijících larev Chironomus sp. testovaným látkám - expozice larev prvního instaru různým c testované látky (min. 5 + kontrola) • Délka 20-28 dní pro riparius a yoshimatsui, 28-65 pro tentans, objeví-li se dospělci dříve, test je dovoleno ukončit do 5 dnů od vylíhnutí posledního dospělce v kontrole • Možno provést limitní test Průběh testu • Organismy (v podobě vajíček) se po 5 dní nechají aklimovat ve stejné vodě jaká je použita při testu při 20-25°C (závisí na druhu) • Larvy po vylíhnutí použity při testu, 20 larev přidáno do každé kádinky za zastaveného provzdušňování (zastaveno po 24 h) • Min 60 larev pro ECx a 80 pro NOEC • Krmení denně/3x týdně krmením pro ryby; 0,25-0,5 mg na larvu / den prvních 10 dní, po zbytek testu 0,5-1 mg na larvu / den; omezení při nárůstu hub a mortality v kontrole • Aerace 24 hod před započetím testu a v jeho průběhu (krom přidání larev); nasycení kyslíkem min 60% • Teplota 20±2°C; pro tentans a yoshimatsui 23 a 25±2°C •Ozařování 16 hod, 500-1000 lux • Hodnocení 3x týdně-neobvyklé chování či vzhled v porovnání s kontrolou •Při líhnutí dospělců nutno počítat každý den, včetně určení pohlaví •Dospělci z testových nádob odebráni, stejně tak nutno zaznamenat a odebrat nová vajíčka Výstupy testu Měří se poměr pohlaví dospělců, stupeň vývoje a čas potřebný k vývinu, mortalita a váha larev na konci testu (popřípadě i po 10 dnech) určeni ECx, NOEC/LOEC 100 - I