METODA STANOVENÍ TOXICITY PRO ŽÍŽALY
podle vyhl. č. 222/2004
Jana Vašíčková Lucie Šindelářová
Princip testu
□ Krátkodobý orientační test pro zjištění účinku chemických látek
□ Žížaly Eisenia fetida exponovány různým koncentracím zkoušené látky
□ Látka se přidává do umělé půdy
□ Doba expozice 14 dní
□dermální a potravní příjem
□ Zjišťován letální účinek
Příprava půdy pro test Artificiální půda
□ 10 % rašeliny
□ 20 % kaolinového jílu
□ více než 50 % kaolinitu
□ 70 % křemenného písku
□ vel.částic 0,05 až 0,2 mm
□ 1% CaCO3 pro úpravu pH na 6,0 ± 0,5
□ Obsah vody 25 - 42 % sušiny základního substrátu
□ stanoví se vysušením vzorku při 105 °C
Přídavek testované látky
□ L. rozpustná ve vodě
□ rozpuštění ve vodě - aplikace do suché půdy -půda ovlhčena na požadovanou vlhkost
□ L. rozpustná v organickém rozpouštědle
□ aceton, cyklohexan, hexan, chloroform
□ rozpouštědlo aplikovat i do kontroly!
□ L. nerozpustná ve vodě ani v rozpouštědle
□ aplikace do půdy (suché), nebo písku (10g), poté zamícháno do patřičného objemu
□ Koncentrace zkoušené látky vyjádřeny jako hmotnost látky na hmotnost sušiny základního substrátu (mg.kg-1).
Pracovní postup
□ Jedno opakování - 500g suché půdy
□ Skleněné nádoby o obsahu 1l
□ Není znám přibližný koncentrační rozsah
□ předběžný test - hodnotí vliv koncentrací s faktorem 10 (např. 1000, 100, 10, 1)
□ Finální test
□ koncentrační škála s nejméně 5 koncentracemi
□ odstupňovaných v geometrické posloupnosti
□ pokrývajících rozsah 0 až 100 % mortality
Přídavek žížal do testu
□ Jedno opakování 10 žížal
□ Doporučovaná synchronizovaná populace
□ Žížaly stejné velikosti
□ Dobře vyvinutý opasek
□ Hmotnost 300 - 600 mg na žížalu
Experimentální podmínky
□ Klimatizované komory - 20 ± 2 °C
□ Stálé osvětlení
□intenzita světla 400 - 800 lux.
□ Expozice je 14 dní
□nepovinně lze vyhodnotit úhyn 7. den po začátku zkoušky
VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ
□ Kritéria validity
□ úhyn v kontrolních skupinách nesmí na konci zkoušky překročit 10 %
□ Zapisování koncentrace zkoušené látky a odpovídající procento mrtvých žížal
□ Stanovení hodnoty LC50
□ udává se v mg zkoušené látky na
1 kg substrátu pro zkoušku (v sušině)
Podmínky chovu žížal
□ Klimatizovaná komora
□ teplota 20 ± 2 °C,
□ osvětlení - intenzita 400 - 800 lux.
□ Chovné nádoby
□ vhodné mělké nádoby o objemu 10 až 20 l
□ Substrát
□ směs 50 % rašeliny a 50 % hovězího nebo koňského hnoje
□ pH 6 - 7
□ Substrát vlhký, ale ne pří-liš mokrý
Děkujeme za pozornost