snímek 1 ElektromigračníElektromigrační metodymetody ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 2 Podstata ,,Pohyb elektricky nabitých částic v elektrickém poli" ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 3 Historický přehled 1880 - první elektroforetické separace Smirnow,Hardy 1897 - regulační frunkce Kohlrausch 1930 - volná elektroforéza Tiselius (1948 Nobelova cena) 1962 - izoelektrická fokusace Vesterberg, Svensson 1967 - kapilární elektroforéza v rotující 1 - 3 mm křemenné kapiláře Hjerten 1970 - SDS PAGE Laemmli 1975 - 2D-elektroforéza ÓFarrell 1976 - isotachoforéza Everaerts, Mikkers ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 4 Teoretické aspekty elektromigračních metod ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 5 Mobilita + Fe Ff- + E ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 6 QEFe ×= E = intenzita elektrického pole [V/m] Q = náboj částice = zi ×××× e [] Elektrická síla Fe Frikční síla Ff fvFf ×= v = rychlost částice f(frikční koeficient) = 6..r ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 7 [m-2 V-1 s-1] E Q v f× = × v E Q f = × f Q E v == Ustálený stav mobilita ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 8 Sekundární jevy ˇ Jouleovo teplo ˇ Elektroosmóza ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 9 Jouleovo teplo P E i S i S = × = × 2 2 P = výkon [W.m-3] S = průřez [m2] = vodivost [-1.m-1] i = elektrický proud [A] ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 10 Elektroosmotický tok ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 11 Elektroosmotický tok = 4 eo v Eeo = × 4 = potenciál Helmholtzovy dvojvrstvy = viskozita = dielektrická konstanta eo = elektroosmotická mobilita ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 12 Původ elektroosmotického toku ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 13 Elektroforéza ,,Dělení nabitých částic na základě rozdílných elektroforetických mobilit" ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 14 Elektroforéza ˇ Volná ˇ Zónová ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 15 Volná elektroforéza + +- - C B+C A+B+CA+B+C A A+B A > B >C ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 16 Zónová elektroforéza + + A+B+C A B C - -A > B >C ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 17 Stabilizace ˇ Rotací ˇ Gradienty hustoty ˇ Porézními medii ˇ Kapilárou ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 18 Požadavky na porézní media ˇ Homogenita ˇ Inertnost - nespecifické interakce - nulový EOF ˇ Reprodukovatelná a snadná příprava ˇ Mechanická pevnost ˇ transparentnost ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 19 Upořádání Horizontální + - ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 20 + - Upořádání Vertikální ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 21 Chromatografický papír Složení ­ celulosa - Nehomogenní - Přítomnost ionogenních skupin - Špatně se chladí ­ pálí se Použití : téměř už se nepoužívá ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 22 Agar a agarosa Složení ­ kopolymer galaktosy a anhydrogalaktosy - Přítomnost ionogenních skupin ­ silný EOF + Velké pory + Snadná příprava Použití : imunoelektroforetické metody elektroforéza NK ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 23 Acetát celulosy Složení ­ acetát celulosy + Komerčně dostupný + Dobré mechanické vlastnosti Použití : imunoelektroforetické metody klinické aplikace ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 24 Škrob Složení ­ hydrolyzovaný škrob + poprvé se uplatňuje efekt molekulového síta - Špatné mechanické vlastnosti - Komplikovaná a nereprodukovatelná příprava - Není transparetní Použití : izoenzymová analýza ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 25 Sypané vrstvy Složení ­ Sephadex ­ zesíťovaný dextran + uplatňuje efekt molekulového síta Použití : preparativní ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 26 Polyakrylamid Složení ­ kopolymer akrylamidu a N,N,- methylenbisakrylamidu + plně splňuje požadavky - Monomery jsou neurotoxiny !!!!!! Použití : analýza bílkovin ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 27 Polyakrylamid CHH2C C O NH2 CHH2C C O NH CH2 NH C O CHH2C CHH2C C O NH CH2 NH C O CHH2C CH CH C CH2 O NH2 C CH2 NH2 ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 28 Polyakrylamid - příprava Radikálová polymerace ˇ Katalyzátor ­ tetramethylethylendiamin TEMED ˇ Iniciátor - chemicky ­ (NH4)2S2O8 - fotochemicky ­ ribloflavin + UV ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 29 Polyakrylamid - složení %100× + = m ba T %100× + = ba b C a ­ akrylamid (g) b ­ methylenbisakrylamid (g) m ­ objem (ml) ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 30 Fergussonova rovnice PAGE není pouze pasivním nosičem, ale podílí se na separaci efektem molekulového síta. [ ]TKr+= 0loglog - mobilita 0- mobilita při limitním zředění Kr ­ retardační koeficient ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 31 T T T A B MrA= MrB pIA pIB Uplatnění Fergussonovy rovnice A B MrA MrB pIA pIB MrA MrB pIA= pIB A B ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 32 Provedení PAGE vertikální x horizontální deskové x trubičkové homogenní x gradientové kontinuální x diskontinuální ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 33 Provedení PAGE ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 34 Provedení PAGE ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 35 Diskontinuální PAGE Orstein, Davis Koncentrační gel T = 3 ­ 5 % Separační gel T = x % Elektrodový pufr Tris Glycin pH 8.3 Koncetrační pufr Tris HCl pH 6.8 Separační pufr Tris Glycin pH 8.3 Elektrodový pufr Tris Glycin pH 8.3 Cl-Gly- B- A- Cl-Gly- B- A- Separační gel Zónová elektroforéza Koncentrační gel Izotachoforéza + - ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 36 SDS PAGE OSO3 -Na+ + -- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 1 g bílkoviny váže 1.4 g SDS uniformní náboj na jednotku MW ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 37 SDS PAGE ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 38 Stanovení Mr pomocí SDS PAGE Mr Rm čelo skvrna Rm = ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 39 Stanovení Mr pomocí SDS PAGE - standardy ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 40 Použití SDS PAGE ˇ Stanovení Mr ˇ Analýza komplexních směsí ˇ Sledování purifikace bílkovin ˇ Stanovení podjednotkového složení + - + - + - ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 41 PAGE - sekvenace DNA ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 42 Kapilární zónová elektroforéza CZE ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 43 Módy CZE ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 44 Kapilární zónová elektroforéza ve volné kapiláře ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 45 Výsledná mobilita částic při CZE ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 46 Separace aniontů pomocí CZE ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 47 Princip MEKC Micela a ­ střed ­ rozpustná v obou b ­ silně hydrofilní ­ nerozpustná v micele c ­ silně hydrofóbní ­ nerozpustná ve vodné fázi ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 48 Micelární elektrokinetická chromatografie ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 49 Separace fenolů a alkoholů pomocí MEKC ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 50 Kapilární gelová elektroforéza ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 51 CGE fragmentů dsDNA ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 52 Instrumentace CZE ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 53 Schéma zařízení pro CZE ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 54 Napájecí zdroj ˇ stabilizovaný 30 kV 300 A ˇ konstantní napětí nebo proud ˇ obojí polarita ˇ ochrana obsluhy ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 55 Kapilára ˇ křemenná - 25 -100 m i.d - 350 m o.d. ˇ délka až 100 cm délka ˇ polyimidové vnější pokrytí ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 56 Dávkování - hydrodynamické ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 57 Dávkování - elektrokinetické ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 58 Detekce spektrofotometrická ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 59 Detekce fluorescenční ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 60 Izoelektrická fokusace ,,Elektroforéza v gradientu pH, částice jsou separováný podle svých pI" ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 61 Tvorba gradientu Anoda (+) H3O+ 6H2OO2 + 4H3O+ + 4 e- Katoda (-) OH- 4H2O2H2 + 4OH- - 4 e- CH2 N (CH2)n N R CH2 (CH2)n NR3 R - CH3 - CH2COOH - H Ampholyty ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 62 Izoelektrická fokusace pH + - H3O+ OH- A + - H3O+ OH- A pI t0 t1 ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 63 Izoelektrická fokusace + - H3O+ OH- pH tx ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 64 Kapilární izoelektrická fokusace ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 65 Izoelektrická fokusace analytická ˇ Provedení - v gelech ­ PAGE, agarosa ˇ Použití - sledování komplexních směsí - izoenzymové složení - stanovení pI ­ rozřezání a eluce ­ pH elektrody ­ pI standardy ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 66 Izoelektrická fokusace analytická ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 67 Izoelektrická fokusace analytická ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 68 Izoelektrická fokusace analytická - standardy ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 69 Izoelektrická fokusace preparativní ˇ Provedení - v sypaných vrstvách ­ Sephadex - v gradientech hustoty ­ sacharoza - rotací ­ Rotofor (BioRad) ˇ Použití ­ izolace bílkovin ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 70 Dvourozměrné metody ˇ Metoda titračních křivek ˇ Dvourozměrná elektroforéza ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 71 Metoda titračních křivek I.rozměr ­ IEF bez vzorku II.rozměr ­ elektroforéza se vzorkem pH 3.0 10.0 -- + + pH 3.0 10.0 ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 72 Dvojrozměrná elektroforéza pI Mr I.rozměr IEF II.rozměr SDS-PAGE pH 3.0 10.0 ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 73 Dvojrozměrná elektroforéza ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 74 Dvojrozměrná elektroforéza pI Mr ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 75 Izotachoforéza ,,Vzorek je umístěn mezi dva elektrolyty : vedoucí L (leading) s nejvyšší mobilitou a - uzavírající T (terminating) s nejmenší mobilitou" ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 76 Izotachoforéza T A+B L T A+B LB A BT AB LA BT LA BT AB LA t0 t1 t2 t3 + + + - - - ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 77 Izotachoforéza ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 78 Izotachoforéza I v E LB AT v E = L > A > B > T ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 79 Kohlrauschova regulační funkce x i i K cz i z = i L Rii i L RL Li z z cc + + = ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 80 Analytická ITP + - Dávkování Detekce Zapisovač Napájení ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 81 Analytická ITP instrumentace ˇ Napájení - stejnosměrné 30 kV 0,2 ­ 0,5mA ˇ Kapilára 0,1 ­ 2 mm ˇ Dávkování - dávkovací ventil ˇ Detekce - universální ­ konduktometrická ­ potencialně gradientová - selektivní ­ UV-VIS ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 82 Analytická ITP Metoda spojování kapilár Předseparační kapilára ­ 2 mm Analytická kapilára ­ 0.1 mm ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 83 Izotachoforetický záznam kvantita A T L B ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 84 Izotachoforetický záznam kvalita A T L B ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 85 Preparativní ITP V gelech - Sephadex + - ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 86 Preparativní ITP - LA+BT AB + Kontinuální plošná ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 87 Detekce po elektroforéze a izoelektrické fokusaci ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 88 Nespecifická detekce ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 89 Nespecifická detekce ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 90 Nespecifická detekce ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 91 Fluorescenční detekce ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 92 Specifická detekce ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 93 Autoradiografie ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 94 Specifická detekce ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 95 Detekce glykoproteinů ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 96 Detekce na základě biologické aktivity ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 97 Detekce na základě biologické aktivity ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 98 Blotting ˇ Southern ­ DNA ˇ Nothern ­ RNA ˇ Western - bílkoviny ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 99 DRŽÁK FILTRAČNÍ PAPÍR BLOTOVACÍ MEMBRÁNA GEL NÁDOBA S PŘENOSOVÝM PUFREM DRŽÁK HOUBA HOUBA FILTRAČNÍ PAPÍR BLOTOVACÍ MEMBRÁNA Difuzní blotting ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 100 Vakuový blotting PORÉZNÍ PODLOŽKA VÝVĚVA ZÁKLADNA GEL FILTRAČNÍ PAPÍR BLOTOVACÍ MEMBRÁNA ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 101 Kapilární blotting ZÁVAŽÍ BLOTOVACÍ MEMBRÁNA FILTRAČNÍ PAPÍR NÁDOBA S PŘENOSOVÝM PUFREM FILTRAČNÍ PAPÍR GEL ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 102 FILTRAČNÍ PAPÍR KATODA DRŽÁK FILTRAČNÍ PAPÍR NÁDOBA S PŘENOSOV ÝM PUFREMDRŽÁK HOUBA HOUBA +- ANODA BLOTOVACÍ MEMBRÁNA GEL Tankový elektroblotting ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 103 Tankový elektroblotting ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 104 Tankový elektroblotting Mini Protean Trans Blot Cell ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 105 ,,Semi dry" blotting FILTRAČNÍ PAPÍR + FILTRAČNÍ PAPÍR BLOTOVACÍ MEMBRÁNA KATODA ANODA - GEL ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 106 ,,Semi dry" blotting ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ snímek 107 PORÉZNÍ PODLOŽKA VÝVĚVA NANÁŠECÍ ŠABLONA BLOTOVACÍ MEMBRÁNA TĚSNĚNÍ ZÁKLADNA JAMKY PRO NANÁŠENÍ VZORKŮ TĚSNĚNÍ Kapkovací dot blotting ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________