® FETAX je test embryotoxicity a teratogenity na časných vývojových stádiích drápatky vodní (Xenopus laevis), normovaný podle metodiky ASTM E 1439-98
Fetax medium
® FETAX médium se připravuje čerstvé, o pH 7,6-7,9. ® Složení (na litr destilované vody):
- 625 mg NaCl
- 96 mg NaHCO3
- 30 mg KCl
- 15 mg CaCl3
- 60 mg CaSO4-2HžO
- 75 mg MgSO4
- Rozpouštědlo v nezbytně nutném množství (DMSO, aceton, propylen glykol <1,6% v.v.)
Příprava na test
ž Rodičovský pár se hormonálně stimuluje injekcí humánního choriongonadotropinu do hřbetního lymfatického vaku (samice 500-1000 IU, samec 250-500 IU).
ž Stimulovaný pár je umístěn do nádrže s FETAX médiem.
ž Po 9 až 12 hodinách od injekce hormonu dochází ke kladení oplozených vajíček.
ž Ve snůšce by mělo být více než 75% oplozených vajíček.
ž Do testu se vybírají vajíčka, která jsou nakladena jednotlivě a mají dokonale kulatý tvar.
Příprava na test
ž Po celou dobu je nutné vodu provzdušňovat a udržovat teplotu na 21±2°C.
ž Vytvoří se koncentrační řada testované látky, pro každou koncentraci tři opakování, každé na vajíčka jiného rodičovského páru.
ž Pět hodin po fertilizaci se vybere 25 oplozených vajíček na Petriho misku a přidá se 10 ml FETAX média a testovaná látka v požadované koncentraci.
ž Jako negativní kontrola slouží FETAX medium.
Test
ž Akutní semistatický test ® Doba expozice je 96 hodin
ž Výměna média a odběr uhynulých embryí a larev se provádí po 24, 48 a 72 hodinách od založení testu.
® Larvy se během testu nekrmí.
v
Test
ž Test se zakládá mezi fází střední blastuly a začátkem neurulace embryí, tzn. přibližně 5 hodin po fertilizaci
ž Teplota v průběhu testu se udržuje na 24±2°C
ž Jako negativní kontrola slouží embrya, která se vyvíjela pouze v roztoku FETAX, bez přidání testované látky, ve čtyřech opakováních.
ž Jako pozitivní referenční 6-aminonikotinamid
Vyhodnocení
® Po 96 hodinách se test ukončí, embrya se zafixují v 3% formaldehydu.
ž Vyhodnotí se jejich stav pod mikroskopem, tj. tělesná délka a výskyt malformací se porovnává s negativní kontrolou.
ž Výsledkem testu jsou hodnoty získané po ukončení 96hodinové expozice:
- LC[10], LC[50], LC[90] - koncentrace způsobující 10%, 50%, 90% úhyn embryí, ale většinou se stanovuje pouze LC[50]
• EC[10], EC[50], EC[90] - koncentrace způsobující malformace u 10%, 50%, 90% embryí
(Výsledky LC a EC se hodnotí pomocí statistické probit analýzy)
Vyhodnocení
ž TI - Teratogenní index
• Hodnota podílu 96h LC[50] a EC[50].
• Slouží k hodnocení potenciálu testované látky způsobit teratogenní poškození.
• Látka se považuje za neteratogenní pokud je TI < 1,5 pokud je teratogenní index větší než 3, považuje se látka za silný teratogen.
ž MCIG - minimální koncentrace způsobující inhibici růstu
• Porovnání velikosti embryí ve srovnání s negativní kontrolou. (Potenciální teratogenita vzrůstá s rostoucím TI a klesající hodnotou MCIG)
ž Hodnocení vzniklých malformací
• Atlas abnormalit
Využití FETAXu
ž Test FETAX je dobře standardizovanou metodou, která umožňuje snadno a rychle (screeningové hodnocení) získat důležité informace o letálním a neletálním působení látek
ž Používá se pro hodnocení vývojové toxicity jak čistých látek, tak komplexních směsí, povrchových a podzemních vod, sedimentů, výluhů a dalších enviromentálních vzorků.
ž Může pomoci v hodnocení ekotoxicity, embryotoxicity a teratogenity vodních organismů, i obratlovců všeobecně (při zohlednění toxikokinetických specifik)
Výhody a nevýhody
ž Validita ž Rychlost ž Cena
ž Dokumentace ž Alternativní druhy
Děkujeme za pozornost!
V případě dalšího zájmu lze originální verzi normy FETAX z 1.4. 2004 získat například na http://eshop.normservis.cz za 820.80 Kč ©.